广东省自然科学基金(031668A)
- 作品数：4 被引量：13H指数：3
- 相关作者：麦贤弟黄绍良檀卫平黄文林刘然义更多>>
- 相关机构：中山大学附属第二医院中山大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 哮喘患儿转录因子T-bet/GATA-3 mRNA表达及其与杀伤性T淋巴细胞平衡间的关系被引量：10
- 2007年
- 目的研究转录因子 T-bet/GATA-3在小儿哮喘发病以及杀伤性 T 淋巴细胞 Tc1/Tc2失衡中的作用。方法通过半定量 RT-PCR 检测38例哮喘患儿(哮喘发作组20例,缓解组18例)及20例正常对照组儿童外周血单个核细胞(PBMC)中 T-bet、GATA-3mRNA 表达情况,同时采用三色荧光流式细胞仪检测哮喘患儿的 Tc1、Tc2细胞数量,并对 T-bet、GATA-3mRNA 表达水平与 Tc1、Tc2细胞比率进行相关分析,了解 T-bet/GATA-3对哮喘患儿的 Tc 细胞分化的调节作用。结果 (1)哮喘患儿外周血淋巴细胞转录因子 T-bet mRNA 表达水平低于正常对照组(0.28±0.03),其中哮喘发作组(0.14±0.04)显著低于哮喘缓解组(0.21±0.03)(P<0.05);转录因子 GATA-3 mRNA 表达水平高于正常对照组(0.37±0.04),其中哮喘发作组(0.49±0.09)高于哮喘缓解组(0.44±0.08)(P<0.05)。(2)哮喘患儿外周血淋巴细胞亚群 Tc1百分率低于正常对照组(31.2±3.8),其中哮喘发作组(6.6±2.4)又低于哮喘缓解组(14.2±4.3)(P<0.05);Tc2细胞百分率高于正常对照组(3.5±1.1),其中哮喘发作组(10.0±4.2)又高于哮喘缓解组(5.4±2.2)(P<0.05)。(3)哮喘患儿 T-betmRNA 表达量与 Tc1细胞比率呈正相关(r=0.704),与 Tc2细胞比率呈负相关(r=-0.629);GATA-3mRNA 表达量与 Tc1细胞比率呈负相关(r=-0.612),与 Tc2细胞比率呈正相关(r=0.673);T-bet/GATA-3 mRNA 比值与 Tc1细胞比率呈正相关(r=0.731),与 Tc2细胞比率呈负相关(r=-0.642),与 Tc1/Tc2比值呈正相关(r=0.773)。结论哮喘患儿 T-bet/GATA-3 mRNA 表达水平失调,与哮喘患儿的 T 细胞呈现 Tc2优势分化密切相关。
- 檀卫平麦贤弟吴葆菁李晓圆李静魏菁黄花荣黄绍良
- 关键词：哮喘反式激活因子类
- 小鼠T-bet基因真核表达载体的构建被引量：4
- 2005年
- 目的构建小鼠T—bet基因重组真核表达载体pcDNA3一T—bet,为T—bet基因治疗研究提供有效的生物表达系统。方法采用内切酶切从质粒T—bet/GFP—RV中获得约1.7 kb的小鼠T—betcDNA片段,以单酶切非定向克隆方式与真核表达质粒pcDNA3连接,构建真核表达载体pcDNA3-T-bet。结果经PCR筛选阳性重组子,双酶切鉴定T—bet基因重组方向,并测序鉴定无错配及插入移位等DNA顺序改变。结论本实验成功构建了小鼠T—bet基因真核表达载体pcDNA3-T-bet。
- 檀卫平麦友刚黄嘉凌刘然义麦贤弟黄绍良黄文林
- 关键词：T-BET基因基因真核表达载体CDNA片段真核表达质粒酶切鉴定PCDNA3
- 含绿色荧光蛋白和小鼠T—bet基因双顺反子真核表达载体的构建及其在A549细胞中的表达
- 2007年
- 目的构建一种带有绿色荧光蛋白（GFP）和小鼠T—bet基因双顺反子的新型真核表达载体pCI—mT—bet—IRES—GFP。方法利用脑炎心肌炎病毒（EMCV）的内部核糖体进入位点（IRES），将GFP的cDNA与小鼠T—bet基因（mT—bet）连接到真核表达载体pCI中，构建含GFP和mT—bet基因双顺反子的重组质粒。结果成功构建了含GFP和mT—bet基因双顺反子的真核表达载体。荧光显微镜下可观察到发绿色荧光的转基因细胞。结论含绿色荧光蛋白和mT—bet基因双顺反子真核表达载体的构建为哮喘基因治疗研究提供了新的生物表达体系。
- 檀卫平刘然义麦贤弟吴葆箐黄绍良黄文林
- 关键词：绿色荧光蛋白真核表达载体
- 小鼠T-bet基因重组腺病毒载体的构建被引量：3
- 2004年
- 【目的】构建小鼠T-bet基因重组腺病毒载体,为T-bet基因在支气管哮喘治疗中的作用研究提供有效的T-bet生物表达系统。【方法】采用内切酶从质粒T-bet/GFP-RV中切获约1.7kb的小鼠T-betcDNA片段,与穿梭质粒pShuttle连接,再通过稀有酶切位点将含T-betcDNA的表达盒与Adeno-X腺病毒载体骨架连接,构建重组载体pAdeno-T-bet,测序鉴定无错配及插入移位等DNA顺序改变,并转染HEK293细胞,出现CPE后取含病毒上清的细胞培养液抽提病毒DNA行PCR鉴定。【结果】PCR及酶切证实:T-betcDNA正确克隆到穿梭质粒pShuttle中,带T-betcDNA的表达盒成功重组到腺病毒载体基因组E1A缺失区,并在HEK293细胞中成功包装出具有感染活性的重组腺病毒pAdeno-T-bet。【结论】本实验成功构建了小鼠T-bet基因重组腺病毒载体,并在HEK293细胞中成功包装出重组腺病毒。
- 檀卫平黄嘉凌刘然义梁志慧黄必军麦贤弟黄绍良黄文林
- 关键词：T-BET腺病毒载体HEK293细胞重组腺病毒酶切位点细胞培养液
