国家自然科学基金(30200237)
- 作品数：15 被引量：26H指数：3
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- 吸血和约氏疟原虫感染对大劣按蚊血细胞中rpS7转录的影响被引量：1
- 2003年
- 目的 观察血餐和约氏疟原虫感染对大劣按蚊血细胞中核糖体蛋白S7(Ribosomalprotein ,rpS7)转录的影响。方法 同批 3～ 5d龄大劣按蚊分为正常组 (N)、吸正常血组 (B)和感染约氏疟原虫组 (I) ,分别在血餐后 1、2、3、7d ,离心法同时收集 3组各 5 0只雌大劣按蚊血细胞总RNA ,所有样品进行RT PCR后 ,各吸取 10ulPCR产物进行琼脂糖凝胶电泳 ,凝胶图像分析系统扫描并读取数据 ,并对所得数据进行统计学分析。结果 3组大劣按蚊血细胞rpS7mRNA的RT PCR扩增产物量无显著差异 (P >0 0 5 )。结论 类似于人类和小鼠 β actin ,以及冈比亚按蚊rpS7。
- 张敬如徐文岳黄复生段建华
- 关键词：大劣按蚊约氏疟原虫
- 核糖体蛋白S7在大劣按蚊抗疟原虫感染免疫研究中的内标作用
- 2003年
- 目的 探讨核糖体蛋白S7(ribosomalprotein ,rpS7)在大劣按蚊抗约氏疟原虫感染免疫中的作用。 方法 根据rpS7的保守mRNA序列设计简并引物 ,以大劣按蚊血细胞mRNA为模板 ,进行RT PCR扩增 ,克隆、并测定序列 ;RT PCR结合凝胶图像扫描比较、分析血餐后d1、d2、d3、d4、d7和d11,未吸鼠血组 (N)、吸正常鼠血组 (B)和吸感染约氏疟原虫鼠血组 (I)大劣按蚊血细胞中rpS7的转录差异。 结果 成功克隆大劣按蚊rpS7部分cDNA序列 ( 4 65bp) ,吸血和约氏疟原虫感染均未明显地影响大劣按蚊血细胞中rpS7的转录 (P >0 .0 5 )。 结论 大劣按蚊血细胞rpS7可作为研究大劣按蚊抗约氏疟原虫感染免疫相关因子的内参照。
- 徐文岳黄复生段建华
- 关键词：大劣按蚊抗疟原虫感染免疫研究
- 斯氏按蚊血淋巴在约氏疟原虫卵囊黑化时差异表达蛋白的SDS-PAGE分析
- 2003年
- 目的 初步了解约氏疟原虫感染后的雌斯氏按蚊成蚊吸饲硝喹蔗糖水和蔗糖水后不同时间的血淋巴蛋白差异表达。方法 挤压法分别收集两组雌斯氏按蚊成蚊 1～ 5d的血淋巴 ,经SDS PAGE ,考马斯亮蓝和银染显色 ,Bio Rad10 0 0凝胶图像分析系统进行扫描和差异蛋白条带的自动化分析。结果 用药第 2天少数蚊卵囊开始部分黑化 ,第 5～9天黑化蚊及其黑化卵囊逐渐增多。用药后第 3天处理组蚊血淋巴蛋白条带数明显多于对照组 ,两组间存在较多差异蛋白带 ,主要集中在 ( 2 0～ 40 )× 10 3、( 60～ 80 )× 10 3和 13 0× 10 3处。银染比考马斯亮蓝染色出现的蛋白条带数多。结论 约氏疟原虫感染的雌斯氏按蚊成蚊吸饲硝喹糖水后其血淋巴蛋白表达有差异 。
- 杨松黄复生况明书段建华
- 关键词：血淋巴斯氏按蚊约氏疟原虫
- 大劣按蚊抗约氏疟原虫感染相关cDNA文库的构建被引量：5
- 2005年
- 目的构建大劣按蚊抗约氏疟原虫感染相关cDNA文库,为进一步筛选、克隆按蚊免疫差异新基因奠定基础。方法以大劣按蚊-约氏疟原虫为实验模型,分别将饱吸约氏疟原虫感染鼠血和正常鼠血后24h的大劣按蚊作为T组和D组,采用抑制差减杂交方法和T/A克隆技术构建大劣按蚊抗约氏疟原虫感染相关cDNA文库。结果扩增差减cDNA文库获得2500余个白色阳性克隆,随机挑取白色克隆进行PCR扩增,92%的克隆中均有200～600bp的插入片段,测序显示,有与冈比亚按蚊未知功能基因同源的克隆。结论成功构建了大劣按蚊差异基因文库。
- 张健徐文岳段建华黄复生王英
- 关键词：大劣按蚊抑制差减杂交基因文库
- 大劣按蚊前酚氧化酶基因部分序列的克隆与序列分析被引量：1
- 2003年
- 目的 克隆大劣按蚊 (Anophelesdirus)前酚氧化酶 (Prophenoloxidase,PPO)基因部分序列。 方法 根据已报道的多种昆虫 PPO的保守氨基酸序列设计简并引物 ,以大劣按蚊总 RNA为模板进行 RT- PCR扩增 ,目的片段经 TA克隆后测定其核酸序列 ,然后进行序列查询与比对。 结果 大劣按蚊 PPO基因 (Ad PPO)部分序列长 5 98bp,编码 199个氨基酸 ;Ad PPO与冈比亚按蚊 PPO5基因的核酸和氨基酸序列同源性分别达 84 .2 3%和 88.89%。 结论 成功克隆出Ad PPO部分序列 ,其与冈比亚按蚊 PPO基因序列具有很高同源性。
- 郝宏兴黄复生
- 关键词：大劣按蚊基因克隆基因序列疟疾
- 约氏疟原虫卵囊黑化与卵囊内游离钙关系的研究被引量：2
- 2003年
- 目的 研究大劣按蚊蚊胃的约氏疟原虫卵囊黑化时卵囊内Ca^(2+)的变化,探讨疟原虫感染不易感蚊种时卵囊黑化与囊内Ca^(2+)的相互关系。方法 以荧光染料Fluo-3/Am作卵囊内钙指示剂,应用共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)观察不同时期约氏疟原虫卵囊内Ca^(2+)分布、变化以及检测的实验条件。结果 3μmol/L Fluo-3/Am同时加入1μl/ml 25%Pluronic F-127在37℃恒温下,孵育约氏疟原虫卵囊60min即可达到最佳的负载效果。Fluo-3/Am浓度的提高和孵育时间延长只能增加背景染色,若降低孵育浓度和缩短孵育时间则难于达到最佳的负载效果。约氏疟原虫成熟卵囊的囊内Ca^(2+)为(137.15±7.02)nmol/L,完全黑化卵囊为(18.44±1.75)nmol/L,并在囊壁出现明显的钙沉着。 结论 约氏疟原虫卵囊完全黑化时,囊内Ca^(2+)明显减少,并有外排现象。
- 张锡林徐文岳王英段建华况明书
- 关键词：约氏疟原虫卵囊黑化游离钙共聚焦激光扫描显微镜
- 大劣按蚊丝氨酸蛋白酶cDNA克隆和表达被引量：2
- 2004年
- 目的 克隆、表达大劣按蚊丝氨酸蛋白酶。方法 根据已报道昆虫的前酚氧化酶激活酶 (prophenoloxidase -acti vatingenzyme,PPAE)的保守氨基酸序列设计简并引物 ,以大劣按蚊血细胞mRNA为模板 ,进行RT -PCR扩增 ,克隆和测定插入片段 ;所得序列进行BLAST查询 ,并原核表达其中的两种PPAE样丝氨酸蛋白酶cDNA ,通过SDS -PAGE和Westernblotting检测表达产物。结果和结论 获得了 3种大劣按蚊血细胞丝氨酸蛋白酶cDNA部分序列 ,即AdsP1(5 12bp) ,AdsP2(488bp)和AdsP3(5 12bp)。AdsP1和AdsP3与冈比亚按蚊sP14D1、sP14D2、3种昆虫PPAE和黑腹果蝇Easter很相似 ,推测AdsP1和AdsP3可能是大劣按蚊的PPAE ,起调节大劣按蚊黑化包裹约氏疟原虫反应的作用。另外 ,成功表达了AdsP1和Ad sP3部分cDNA序列。
- 徐文岳黄复生夏莉莎段建华
- 关键词：大劣按蚊丝氨酸蛋白酶CDNA克隆
- 与先天免疫相关的大劣按蚊差异基因的克隆及分析
- 目的克隆及分析与先天免疫相关的大劣按蚊差异基因。方法利用SSH方法克隆大劣按蚊差异基因,并对与先天免疫相关的差异基因(文中命名为T6基因)进行生物信息学分析及半定量实验,分析约氏疟原虫感染前后其转录的变化,探讨它与按蚊抗...
- 张健徐文岳黄复生段建华
- 关键词：抑制消减杂交大劣按蚊差异基因先天免疫
- 文献传递
- 大劣按蚊AdPPO2、AdPPO3基因cDNA克隆与组织定位被引量：2
- 2004年
- 目的 克隆大劣按蚊PPO基因家族新成员的cDNA部分序列 ,并对所克隆基因进行蚊体组织定位研究。方法 根据已报道的多种昆虫PPO的保守氨基酸序列设计简并引物 ,以大劣按蚊总RNA为模板进行RT PCR扩增、目的片段克隆入T载体 ,然后 ,用PCR方法筛选新的PPO克隆并测序 ;以RT PCR方法分析AdPPO2和AdPPO3在蚊血淋巴、蚊胃和唾液腺的分布情况。结果 AdPPO2和AdPPO3基因cDNA部分序列长均为 5 97bp ,编码 199个氨基酸 ;它们在血淋巴、蚊胃和唾液腺均有分布。结论 从大劣按蚊成功克隆获得 2种新的PPO基因家族成员的cDNA部分序列 。
- 郝宏兴邱宗文段建华况明书黄复生王英
- 关键词：大劣按蚊基因克隆
- AdPPO4基因部分序列的cDNA克隆与序列分析被引量：1
- 2004年
- 目的 克隆大劣按蚊 (Andirus)前酚氧化酶 (prophenoloxidase ,PPO)基因部分序列。方法 根据已报道的多种昆虫以及冈比亚按蚊PPO基因编码的保守氨基酸序列设计简并引物 ,以大劣按蚊幼虫总RNA为模板进行RT PCR扩增 ,目的片段经TA克隆后测定其核苷酸序列 ,然后进行序列查询与比对。结果 从大劣按蚊幼虫中获得的PPO4基因(AdPPO4)部分序列长 5 97bp ,编码 199个氨基酸 ;AdPPO4与冈比亚按蚊PPO4基因的核酸和氨基酸序列同源性分别达 84%和 90 %。结论 从大劣按蚊幼虫中成功地克隆出了AdPPO4基因的部分序列 。
- 邱宗文郝宏兴张锡林徐文岳
- 关键词：大劣按蚊基因克隆
