深圳市科技计划项目(200701008)
- 作品数：2 被引量：22H指数：1
- 相关作者：陈心春余卫业单万水朱秀云徐六妹更多>>
- 相关机构：深圳市第三人民医院(深圳市肝病研究所)广东医学院更多>>
- 发文基金：深圳市科技计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 结核酶联免疫斑点试验与抗结核抗体平行检测比较被引量：22
- 2009年
- 目的比较评价结核分枝杆菌特异性细胞免疫检测与抗体免疫检测在结核诊断中的应用价值。方法分别采用免疫胶体金技术及结核分枝杆菌抗原ESAT-6特异性IFN-y酶联免疫斑点检测技术（ELISPOT）对113例结核病患者和90名健康对照进行结核菌特异性抗体免疫和细胞免疫测试；对健康对照还采用PPD皮试进行细胞免疫检测。对12例结核患者和10名健康对照同时采用ELISPOT和T—SPOT．TB试剂盒进行平行检测。结果ELISPOT检测的阳性阈值判定根据受试者操作特征（ROC）曲线分析获得最佳阈值为30个斑点／2×10^5个细胞，以此判断ESAT-6刺激后IFN-y释放水平诊断结核病敏感度为75．2％，特异度为85．6％。在90名健康对照中，抗体检测和ELISPOT检测阳性率分别为26．67％和14．44％，PPD皮试强阳性的比例为27．78％；ELISPOT检测及抗体检测均与PPD皮试结果正相关（r值分别为0．280，0．253，P均〈0．05）。在113例结核患者中，ELISPOT检测和抗体检测的阳性率分别为77．88％和60．18％。ELISPOT检测对结核病辅助诊断的阳性预测值为86．27％、阴性预测值为75．25％，抗体检测分别为73．91％和59．46％；2种方法阳性预测值和阴性预测值比较差异均有统计学意义（X^2=3．941，P=0．047；X^2=5．268，P=0．022）。采用T-SPOT．TB与ELISPOT检测结果进行配对比较，差异无统计学意义（X^2=0．500，P=0．480）。结论结核分枝杆菌ESAT-6抗原特异性IFN-y的细胞免疫检测技术在结核病临床辅助诊断的应用价值显著高于结核菌特异性抗体检测，值得进一步优化和推广。
- 杨倩婷朱秀云单万水徐六妹余卫业陈心春
- 关键词：结核分枝杆菌结核抗体细菌细菌蛋白质类免疫酶技术
- 结核分枝杆菌早期分泌抗原靶6kDa蛋白原核载体的构建及在E.coli中的高效表达
- 2010年
- 目的获得高效表达的结核分枝杆菌早期分泌抗原靶6kDa蛋白(ESAT-6)。方法利用PCR方法扩增出ESAT-6基因片段,将酶切处理后的基因片段定向克隆到原核表达载体pET-21b(+),酶切分析和序列测定鉴定出ESAT-6基因的阳性重组子,将其转化入E.coliBL21(DE3),阳性菌株经IPTG诱导,SDS-PAGE和免疫印迹分析靶蛋白的表达;重组蛋白经Ni-NTAHis.BindResins纯化。结果成功扩增出ESAT-6基因片段,构建了重组表达质粒pET-ESAT-6,SDS-PAGE显示表达产物分子量约为6kD,经亲和纯化后的ESAT-6重组蛋白纯度高,且能被结核病人血清所识别。结论利用pET原核表达系统成功的对结核分枝杆菌ESAT-6重组蛋白进行高效表达和纯化,重组蛋白具有良好的免疫活性。
- 李兵刘威龙张晶张明霞邓群益李晓鹤罗瑞玲余卫业陈心春周伯平
- 关键词：结核分枝杆菌原核表达
