国际科技合作与交流专项项目(2007DFA31260)
- 作品数：10 被引量：54H指数：5
- 相关作者：赵德刚赵杰宏韩洁田晓娥吴拥军更多>>
- 相关机构：贵州大学贵阳中医学院北京林业大学更多>>
- 发文基金：国际科技合作与交流专项项目国家科技支撑计划国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学环境科学与工程更多>>
- 黑糯米成熟胚愈伤组织培养及植株再生研究被引量：4
- 2008年
- 对贵州惠水黑糯、黑糯141成熟胚愈伤组织培养及再生条件的研究结果表明,分步消毒可以减少外植体的污染率,在附加2,4-D 2 mg/L的NBD 1培养基中,成熟胚愈伤组织诱导率较高,分别为93.84%、90.52%。愈伤组织的继代培养是分化前必不可少的过程,适当干燥处理及合适的激素配比能够提高愈伤组织分化率,贵州惠水黑糯分化率为95.18%,黑糯141分化率为89.38%。2个黑糯米品种在附加NAA 0.5 mg/L的生根培养基中均能正常生根。
- 余婧蒋杰郭刚赵德刚
- 关键词：黑糯米成熟胚植株再生
- 转基因作物标记蛋白潜在致敏性的生物信息学预测被引量：4
- 2010年
- 转基因作物表达的标记蛋白带来潜在致敏性顾虑。根据FAO/WHO决策方案,使用SDAP、Farrp和NCBI三大数据库对GUS、NptII和OPH的潜在致敏性进行评估。在线Blast或Fasta发现,OPH、GUS和NptII全序列或连续80aa的匹配性皆不存在致敏性可能。连续6aa比对中,OPH有2个片段与大豆、小麦和橡胶树的前纤维蛋白或德国蟑螂过敏原相关蛋白存在序列一致;GUS有1个片段与埃及伊蚊唾液腺过敏原存在序列一致;NptII有1个片段与摇蚊血红蛋白过敏原存在序列一致,但匹配的6aa序列皆未在各蛋白抗原性决定部位,是假阳性结果。初步证明转基因植物表达的GUS、NptII和OPH不具有潜在的致敏性风险。
- 赵杰宏韩洁赵德刚
- 关键词：标记蛋白致敏性生物信息学
- 转基因表达有机磷水解酶(OPH)提高黄瓜降解蝇毒磷能力的初步研究被引量：5
- 2010年
- 为快速提高黄瓜降解有机磷农药残留的能力，选取能广泛降解有机磷农药的有机磷水解酶（OPH）为表达蛋白，构建CaMV35S启动子驱动有机磷水解酶基因（opd）的植物表达载体pSOP，经双酶切证明重组载体含有插入位置和方向皆正确的目的片段。通过农杆菌介导遗传转化黄瓜子叶节，诱导和筛选出9株抗性苗，获得3株GUS染色和PCR阳性转化苗。酶活性分析表明，转基因黄瓜降解蝇毒磷能力是对照（非转基因株）的4．7～9．7倍，最高达到7．8μmol／（mg·min），有助于加快降解黄瓜中的有机磷农药残留，为食品安全研究提供借鉴。
- 赵杰宏韩洁赵德刚
- 关键词：生物修复农药残留
- 油菜偏嗜性ChIFN-γ基因合成及原核表达
- 2009年
- 依据鸡γ-干扰素基因(ChIFN-γ)的氨基酸序列,采用油菜偏嗜性的密码子,人工合成ChIFN-γ,构建原核表达载体pET32a-ChIFN-γ,并转化到E.coliBL21中。1 mmol.L-1IPTG 37℃诱导表达12h ChIFN-γ表达量达到菌体总蛋白的37%。SDS-PAGE电泳检测表明,ChIFN-γ重组蛋白分子量约为33kDa。研究为下一步制备ChIFN-γ抗体进行真核表达研究奠定了基础。
- 许文钊吴拥军赵德刚田斌
- 关键词：原核表达
- 降解残留有机农药的微生物资源研究进展被引量：12
- 2008年
- 有机农药污染已成为一个世界性问题,微生物在环境农药残留修复中起着重要作用。对降解有机磷、有机氯、拟除虫菊酯类和有机氮等农药的微生物种属资源以及相关酶资源和基因资源的研究进展进行了综述,分析了近年来该领域中对微生物资源的开发和利用状况,并讨论了在环境修复、生物防治和生物肥料等方面多功能化应用微生物资源,同时保障转基因生物安全,避免对环境造成二次污染等应成为该领域重要的研究方向。
- 赵杰宏赵德刚
- 关键词：有机农药降解微生物
- ipt基因促进矮牵牛遗传转化效率及热激启动子驱动基因删除被引量：11
- 2011年
- 本研究主要探讨ipt基因对矮牵牛遗传转化不定芽诱导影响及拟南芥热激启动子hsp18.2驱动重组酶基因flp的热诱导外源基因删除表达载体在矮牵牛中的基因删除效果。本研究中将植物表达载体pBin-hsp18.2:flp-35S:ipt及对照载体pBin-hsp18.2:flp遗传转化矮牵牛,以获得转基因植株,分析比较不定芽的诱导和转基因植株进行的热激基因删除。研究结果表明,ipt基因可促进矮牵牛遗传转化过程中不定芽的诱导,其不定芽诱导率为21.5%,显著高于对照的8.7%。在44℃,6h,热激6次的条件下,转基因矮牵牛植株表型恢复正常,经GUS蛋白表达分析及PCR、RT-PCR检测,证明外源基因已经被删除。转基因矮牵牛基因删除效率最高可达43.8%。本研究为ipt基因在一些遗传转化困难植物转基因中的应用奠定了基础。
- 李岩赵德刚
- 关键词：矮牵牛异戊烯基转移酶基因基因删除
- 含有融合标记基因和LoxP/FRT位点的植物表达载体构建及应用被引量：1
- 2011年
- 本研究利用化学合成法合成了包含pCAMBIA0390左右边界T-DNA和LoxP/FRT(LF)位点的DNA片段Ⅰ,利用SacⅡ和SphⅠ酶切位点,去除了pCAMBIA0390左右边界T-DNA和多克隆位点之间的序列,然后连接DNA片段Ⅰ和载体片段,构建了植物表达载体pGM323-LF-enTP。随后,再合成含有适合在单子叶植物中表达的由玉米Ubi-1启动子驱动的融合标记基因(Bar::gus)和水稻actin-1启动子驱动的Bt抗虫蛋白基因(Cry1Ab)表达元件的DNA片段Ⅳ,在pGM323-LF-enTP的基础上,利用SalⅠ和PstⅠ位点构建了同时含有LF位点、Bar::gus以及Cry1Ab基因表达元件的表达载体pGM626-LF-ABt。利用含有pGM626-LF-ABt的农杆菌遗传转化烟草和玉米,以草丁膦作为抗性筛选剂,非转化细胞得到了有效抑制,快速获得了转基因植株,利用GUS组织化学检测和RT-PCR分析了转基因植株中标记基因的表达,结果表明pGM626-LF-ABt可以用于农杆菌介导的单、双子叶植物遗传转化。本研究为培育安全抗虫转基因植物奠定了基础。
- 朱友银田晓娥赵德刚
- 关键词：BARGUS植物遗传转化
- 转基因表达OPH提高番茄果实降解有机磷农药能力的研究被引量：2
- 2010年
- 拟通过基因工程提高番茄果实降解有机磷农药残留的能力。构建了E8启动子基因驱动有机磷降解基因(OPD)的植物表达载体pSE8OP,经农杆菌介导遗传转化番茄子叶后,进行GUS染色、PCR和Southern blotting分析。证明OPD基因已整合进转基因植株基因组中,为1个拷贝。HPLC比较分析发现,转基因番茄果实能显著提高降解毒死蜱和对硫磷的能力,大大减少了番茄中的农药残留。
- 赵杰宏赵德刚韩洁
- 关键词：毒死蜱对硫磷
- ChIFN-α基因在烟草中的表达及转基因烟草对TMV的抗性被引量：5
- 2010年
- 动物α干扰素具有高效广谱的抗病毒作用,通过农杆菌介导法将35S驱动的干扰素基因ChIFN-α转化烟草,Southern杂交和W estern杂交进行目的基因的转化、表达检测,重组蛋白的数量通过ELISA测定,对获得的转基因烟草植株进行TMV接种实验,结果表明ChIFN-α基因的转化赋予了转基因烟草对TMV的抗性,进一步的荧光定量PCR差异表达检测结果表明,该抗性可能与转基因烟草体内防卫基因PR-1 a、抗病N基因和信号转导MAPK基因受到上调表达有关。
- 宋莉赵德刚田晓娥吴拥军
- 关键词：转基因烟草烟草花叶病毒抗病性
- ＂外源基因清除＂技术(Gene-Deletor)原理、特点及其潜在应用前景被引量：11
- 2008年
- "外源基因清除"技术(Gene-Deletor)是美国康涅狄格大学华裔教授李义领导的研究小组发展起来的,有望成为解决转基因植物环境安全性和食品安全性问题的有力工具。象计算机"卸载"应用软件一样,"外源基因清除"技术利用器官特异或诱导型启动子、重组酶及融合识别位点构建基因表达元件,能将转基因植物中的全部外源基因在完成其功能作用后自动地从花粉、种子和果实中彻底清除。最近,美国著名"社会技术"公司公布了未来20年对社会最具影响力、最有前景的技术创新领域一系列12个简报,其中第10个专题推介了"外源基因清除"技术。本文综述了"外源基因清除"技术的原理和技术优点,介绍并讨论了李义对该技术在作物有性繁殖中的应用以及在解决食品安全性问题上的应用方略。
- 赵德刚吕立堂贺爱公罗克明Hui Duan郑雪莲邓伟陈永勤安新民贺明阳
- 关键词：转基因植物食品安全性环境安全性植物
