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CCK－8法检测牛膝醇提物诱导兔骨髓间充质干细胞最佳检测条件的实验研究被引量：2: 2015年; 目的：研究CCK－8法检测牛膝醇提物诱导兔骨髓间充质干细胞（ BMSCs）最佳检测条件。方法：以兔BMSCs分离、培养及扩增，经多次传代扩增，并取第4代细胞用于实验。对比CCK－8法在不同孵育时间及不同检测波长条件下吸光光度值的差异，研究CCK－8法检测牛膝醇提物诱导兔BMSCs最佳检测时间及检测波长。结果：牛膝醇提物能明显诱导兔骨髓间充质干细胞增生，对诱导兔BMSCs软骨分化具有较强的可行性。 CCK－8法检测牛膝醇提物诱导兔BMSCs最佳测试时间为加入CCK－8试剂孵育后的2小时，最佳检测波长为450nm。适宜检测的细胞数量范围为2．5×103／ml～4×104／ml个。结论：CCK－8法在孵育2小时后及酶标仪450 nm波长下检测牛膝醇提物诱导兔BMSCs灵敏度最高。; 陈浩雄彭力平徐宁达裴军宇刘兴利赵亮

中药治疗膝骨关节炎软骨修复实验研究进展被引量：20: 2014年; 骨关节炎（OA）是在机械性和生物性因素作用下，关节软骨细胞、细胞外基质以及软骨下骨正常合成和降解耦联失衡，导致关节软骨纤维化、溃疡、缺失，软骨下骨的硬化和骨质象牙化，骨赘形成和软骨下囊变。膝骨关节炎是最常见的关节炎形式。; 陈浩雄徐宁达彭力平谢增军何斌斌陈肖; 关键词：中药膝骨关节炎软骨修复

中药诱导干细胞软骨分化的实验研究进展被引量：1: 2014年; 关节软骨退变和其继发的骨质增生是骨关节炎（Osteoarthritis，OA）的核心病理改变。在机械性和生物性因素作用下，关节软骨细胞、细胞外基质以及软骨下骨正常合成和降解偶联失衡，关节软骨纤维化、溃疡、缺失，软骨下骨的硬化，骨赘形成和软骨下囊变，形成关节炎。膝关节是关节软骨退变最常见部位，致残率高。中医药在治疗骨关节病方面，有丰富的经验，临床疗效也较好。很多学者对中药诱导干细胞软骨分化，治疗骨关节炎的作用机理做了深入研究。本文就相关实验研究情况做一综述。; 陈浩雄徐宁达彭力平谢增军何斌斌陈肖; 关键词：软骨分化中药诱导干细胞关节软骨退变关节软骨细胞软骨下骨

CCK-8法检测牛膝醇提物体外诱导兔BMSCs增殖活性的研究被引量：1: 2016年; 目的:研究牛膝醇提物含药血清对骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外增殖的影响。方法:采用高、中、低剂量牛膝醇提物以及等体积生理盐水对SD级新西兰大白兔进行灌胃,从中提取含药血清,同时采用贴壁筛选法培养兔骨髓间充质干细胞,并以4种不同浓度的含药血清及胎牛血清分别干预第三代骨髓间充质干细胞。于干预后第3、6、9天分别3次采用CCK-8法测定细胞光密度值(OD),比较各组间的差异。结果:高剂量组牛膝醇提物含药血清刺激骨髓间充质干细胞增殖,并促进细胞分化,其OD均值与其他组相比较最高,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:牛膝醇提物含药血清具有促进BMSCs增殖作用,其中高剂量作用最强。; 马笃军彭力平裴军宇李明华徐宁达王立新余阗; 关键词：骨髓间充质干细胞

实验兔骨髓间充质干细胞的分离、培养及鉴定被引量：5: 2017年; 探讨建立兔骨髓间质干细胞(BMSCs)的体外分离纯化、扩增和鉴定的方法,为BMSCs的进一步诱导分化和应用奠定基础。首先抽取兔髂骨骨髓,采用Percoll密度梯度离心法得到骨髓单个核细胞,接种后形成单层贴壁细胞,经胰蛋白酶消化后传代培养扩增,倒置相差显微镜观察细胞生长状态,细胞免疫组化检测CD73、CD34。结果表明,成功建立了兔BMSCs体外分离及培养扩增的方法,发现BMSCs表现贴壁生长,P0代时呈集落生长,细胞呈梭形,传代后细胞增殖速度加快,形态开始多样化;细胞免疫组化显示BMSCs表达CD73,未表达CD34,反复传代后CD73表达效率增高。上述研究表明,Percoll密度梯度离心联合骨髓贴壁法,能有效分离、纯化和扩增BMSCs,提取的细胞具有BMSCs的生长特性和抗原表型,其中P3~P6代细胞增殖能力强,可用于进一步的研究工作。; 马笃军彭力平王立新余阗裴军宇李明华徐宁达肖伟; 关键词：骨髓间充质干细胞细胞培养密度梯度离心法

牛膝醇提物诱导兔骨髓间充质干细胞软骨定向分化的实验研究被引量：12: 2017年; 目的:观察牛膝醇提物诱导兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)软骨定分化的作用。方法:密度梯度离心联合骨髓贴壁法分离培养新西兰大白兔BMSCs,取P3代细胞随机分成5组(空白组、完全诱导组、牛膝醇提物低剂量组、牛膝醇提物中剂量组、牛膝醇提物高剂量组),连续诱导培养21d,倒置相差显微镜观察细胞形态,免疫细胞学检测Ⅱ型胶原蛋白荧光表达,qRT-PCR检测软骨分化标记基因Sox9、蛋白聚糖、Ⅱ型胶原mRNA表达情况,Western Blot检测Sox9、蛋白聚糖、Ⅱ型胶原蛋白表达水平。结果:牛膝醇提物高、中、低剂量组与空白组相比Ⅱ型胶原蛋白荧光阳性表达明显;牛膝醇提物高、中剂量组与空白组相比软骨分化标记基因Sox9、蛋白聚糖、Ⅱ型胶原明显增加(P<0.05),Western Blot验证Sox9、蛋白聚糖、Ⅱ型胶原蛋白表达明显(P<0.05),其中牛膝醇提物高剂量组效果最佳(P<0.01),与完全诱导组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:牛膝醇提物能够诱导兔BMSCs成软骨分化,其具体作用机制有待进一步研究。; 马笃军彭力平王立新余阗裴军宇李明华徐宁达肖伟; 关键词：怀牛膝骨髓间充质干细胞软骨分化

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深圳市福田区卫生系统公益性科研项目(FTWS201318)