国家高技术研究发展计划(2011AA10A212)
- 作品数：32 被引量：97H指数：5
- 相关作者：扈荣良张守峰刘晔杨涛赵晶更多>>
- 相关机构：军事医学科学院扬州大学中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 鸡白痢沙门菌研究进展被引量：16
- 2014年
- 本文就鸡白痢沙门菌的基因组学、与鸡伤寒沙门菌的鉴别方法、感染与致病机制、防治措施等方面的研究进展进行总结,以期为相关研究提供参考。
- 耿士忠郭荣显焦新安潘志明
- 关键词：鸡白痢沙门菌基因组学致病机制
- 基于RIG-I的狂犬病病毒免疫逃逸机制被引量：3
- 2013年
- 狂犬病是重要的人兽共患疾病,在我国,每年约有2000～3000人死于狂犬病。固有免疫是机体针对病毒等病原的第一道非特异的防线,同时,也对特异性的获得性免疫应答产生影响。目前,固有免疫中RIG-I通路及其抗病毒作用机制研究深入广泛。狂犬病病毒进化中获得诸多针对宿主特别是固有免疫应答的逃逸机制,针对该机制的研究对于狂犬病的预防、诊断及治疗具有重要意义,同时,也为其他病毒的免疫逃逸相关研究奠定基础。
- 王林栋张守峰刘晔扈荣良
- 关键词：狂犬病病毒免疫逃逸RIG-I
- 鸡白痢沙门菌spiC基因克隆与生物信息学分析被引量：1
- 2016年
- 为了研究鸡白痢沙门菌SpiC蛋白的功能,以鸡白痢沙门菌S06004基因组DNA为模板PCR扩增spiC基因,进行克隆测序和生物信息学分析,并调查该基因在255株不同年代鸡白痢沙门菌分离株中的分布与进化情况。结果显示,鸡白痢沙门菌spiC基因全长384bp,编码127个氨基酸,在不同年代分离株中稳定存在。推导SpiC蛋白无跨膜区、信号肽和卷曲螺旋结构,有1处酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点,2处N-豆蔻酰化位点,预测线性抗原表位主要分布在15-20、29-35、52-53、70-72、83-85、89-94aa。利用SWISS MODEL在线程序建模,得到SpiC三维结构模型。同源性及进化分析显示spiC基因仅存在于沙门菌中且比较保守,鸡白痢沙门菌SpiC蛋白与沙门菌肠道亚种亲缘关系最近。
- 安树敏郭荣显薛颖潘志明耿士忠焦新安
- 关键词：鸡白痢沙门菌生物信息学分析
- 鸡白痢沙门菌SpiC蛋白的原核表达及其应用被引量：4
- 2015年
- 目的进行鸡白痢沙门菌Spi C蛋白原核表达并建立以Spi C蛋白为检测抗原的间接ELISA。方法以鸡白痢沙门菌S06004基因组DNA为模板,PCR扩增384 bp的spi C基因。将spi C基因克隆至原核表达载体p ET30a中,构建重组原核表达质粒p ET30a-spi C,再转化到表达宿主菌E.coli BL21(DE3)中,异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,SDS-PAGE和Western blot分析鉴定,纯化His-Spi C蛋白,建立Spi C蛋白为检测抗原的间接ELISA并检测临床血清样品。结果通过对诱导后重组菌裂解产物进行SDS-PAGE和Western blot分析,重组菌可以表达相对分子质量(Mr)约19 200的可溶性重组蛋白His-Spi C。重组蛋白GST-Spi C免疫无特定病原体鸡,所获得的高免血清能识别重组蛋白His-Spi C,表明体外表达的重组蛋白His-Spi C有良好的免疫反应原性。所建立的以重组蛋白His-Spi C介导的间接ELISA有较好的特异性,能够区分spi C基因缺失型疫苗候选株免疫与野生菌自然感染。结论重组蛋白His-Spi C呈可溶性表达,具有良好的免疫原性,以重组蛋白His-Spi C建立的间接ELISA,可以作为区分感染和免疫动物(DIVA)鸡白痢疫苗免疫的鉴定方法。
- 耿士忠刘欢焦新安潘志明钱珊珊郭荣显安树敏薛颖
- 关键词：鸡白痢沙门菌来杭鸡原核表达
- 狂犬病病毒糖蛋白单克隆抗体的制备
- 2012年
- 用狂犬病病毒BD06株脑毒免疫BALB/c小鼠,制备G蛋白单克隆抗体。将灭活的BD06脑毒免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)进行融合,通过间接ELISA法和荧光抗体病毒中和试验法进行4轮筛选,获得6F12、1B12共2株具有中和活性的糖蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞。通过Western blotting分析和直接免疫荧光检测结果显示,获得一株针对狂犬病病毒糖蛋白构象表位的单抗6F12和一株针对糖蛋白线性表位的单抗1B12。小鼠中和试验结果显示,两株杂交瘤细胞分泌的抗体均具有狂犬病病毒中和活性。结果表明,获得了两株针对狂犬病病毒G蛋白不同抗原表位的中和活性单克隆抗体,为狂犬病病毒特性研究和检测奠定了基础。
- 米立娟王永志刘晔张守峰扈荣良
- 关键词：狂犬病病毒糖蛋白中和抗体单克隆抗体
- N-糖基化对乙型脑炎病毒prME和NS1基因免疫效果影响的研究
- 2012年
- prME和NS1为乙型脑炎病毒两个主要的免疫保护蛋白,且均为N-糖蛋白。为研究N-糖基化对乙型脑炎病毒免疫保护的作用,本研究用PCR介导的定点突变方法,分别消除乙型脑炎病毒prME和NS1基因的不同N-糖基化位点,并构建了prME和NS1突变基因的真核表达质粒。将质粒免疫四周龄雌性小白鼠,经两次免疫后,采集血清检测体液免疫反应,最后对小鼠用强毒进行攻击,观察并记录免疫保护力。研究结果显示,与野生型prME基因免疫组相比,消除单个糖基化位点后prME基因诱导的ELISA抗体、中和抗体和免疫保护力均略有升高,而同时消除两个糖基化位点的则会降低。NS1基因消除单个糖基化位点后保护率高达到100%,但消除两个糖基化位点后则免疫保护率略有降低(75%)。通过本研究证明,N-糖基化在维系乙型脑炎病毒prME和NS1蛋白的免疫保护中具有重要的作用,单个糖基化的缺失可增强蛋白的免疫原性,而两个糖基都缺失后,则造成了免疫效率的降低。
- 张子重汪雪宰俊杰孙乐强宋云峰陈焕春
- 关键词：乙型脑炎病毒NS1基因N-糖基化免疫
- 肠炎沙门菌ΔspiCΔcrp基因工程疫苗候选株的构建被引量：3
- 2015年
- 目的构建肠炎沙门菌ΔspiCΔcrp双基因缺失株,以探索其作为新型基因工程疫苗的可能性。方法以等位基因同源重组方法,在构建单基因缺失肠炎沙门菌ΔspiC基础上,运用λRed重组酶系统构建双基因缺失株肠炎沙门菌ΔspiCΔcrp。结果 PCR和抗生素抗性结果表明肠炎沙门菌ΔspiCΔcrp成功构建;生物学鉴定显示,与野生菌相比,其生长速度与生化特性发生了变化,LD50提高约1 000倍,毒力显著降低。结论双基因缺失株肠炎沙门菌ΔspiCΔcrp被成功构建,为其作为疫苗的免疫学评价奠定基础。
- 曾玲李宝利严素惠潘志明耿士忠焦新安
- 关键词：肠炎沙门菌CRPSPIC基因工程疫苗
- 狂犬病病毒糖蛋白的杆状病毒表达及其免疫原性研究被引量：5
- 2012年
- 构建表达狂犬病病毒SRV9株糖蛋白(GP)的重组杆状病毒,评价其表达出的SRV9株糖蛋白对小鼠免疫效果。将狂犬病病毒SRV9株GP基因的完整开放阅读框克隆入穿梭质粒Bacmid中,构建重组穿梭质粒Bacmid-G,以此转染Sf9细胞。对病变细胞培养物进行电镜观察,获得正确重组杆状病毒后,通过Western-blot、IFA及小鼠免疫实验鉴定表达产物的免疫反应性及免疫原性。正确构建重组穿梭质粒Bacmid-G;获得表达SRV9株糖蛋白的重组杆状病毒,其表达产物具有良好免疫原性;表达产物接种小鼠可诱导其产生抗狂犬病病毒中和抗体,中和抗体达到保护水平的比例为100%。本实验所获得的重组杆状病毒表达出的SRV9株糖蛋白具有较好的免疫原性,可诱导小鼠产生保护性中和抗体,该实验为进一步开发狂犬病亚单位疫苗奠定了基础。
- 陈奇张守峰刘晔付云红孙程龙杨洋宫婷宋菲菲扈荣良
- 关键词：狂犬病病毒糖蛋白杆状病毒免疫
- 猪源大肠杆菌F18菌毛的体外表达和抗原特性被引量：2
- 2014年
- 【目的】揭示从仔猪腹泻和/或水肿病猪体内分离到的fedA+大肠杆菌所携带的毒力因子、F18菌毛在体外表达及其抗原变异情况。【方法】利用凝集试验测定O血清型,PCR方法检测毒力基因,单克隆抗体分析F18菌毛抗原特性。【结果】在75个fedA+分离株中,有62株测定出其O血清型,覆盖8种血清型,以O107和O139为主(74.2%);estI、estII、elt、stx-2e、astA、orfA、irp2、fyuA、ler和eaeA基因在这75个菌株中的检出率分别为64.0%、46.7%、28.0%、62.7%、26.7%、9.3%、9.3%、9.3%、1.3%和1.3%,其中仅拥有stx-2e基因的菌株有19株,同时拥有estI/estII/stx-2e基因的菌株有20株。单抗鉴定结果显示,在33株体外表达F18菌毛的菌株中,21株(63.6%)被鉴定为F18ac变体,2株(6.1%)被鉴定为F18ab变体,其余10株(30.3%)仅跟F18"a"因子单抗反应,而不跟F18"b"、"c"因子单抗反应。间接ELISA显示,11株单抗至少识别F18菌毛的6个表位,其中"a"因子至少有3个表位,"b"因子至少有2个表位,"c"因子至少有1个表位。【结论】在猪源菌株中,F18ab菌毛在体外表达率较低;F18ac菌毛在体外表达率较高,主要与肠毒素和O107血清型相关,同时我国存在F18菌毛的抗原变异。
- 陈祥宦海霞万婷王雷高崧焦新安
- 关键词：大肠杆菌F18菌毛血清型毒力因子抗原特性
- 抗蓝舌病病毒VP6和VP7蛋白单克隆抗体的制备及鉴定被引量：3
- 2012年
- 为制备针对蓝舌病病毒(BTV)的单克隆抗体(MAb),本研究利用血清型1型BTV(BTV1)免疫BALB/c鼠,将其脾淋巴细胞与SP2/0进行融合,并用BTV1包被ELISA板,通过间接ELISA方法筛选出3株稳定分泌抗BTV1的MAb的杂交瘤细胞株(2B10、3D4和4H8)。利用表达BTV1主要蛋白的真核表达重组质粒转染BHK-21后,对所制备的杂交瘤细胞株上清进行间接免疫荧光(IFA)以及western blot鉴定,结果显示:2B10和4H8与VP7蛋白反应,而3D4与VP6蛋白反应。同时,IFA鉴定结果进一步表明,3株MAb与24个血清型的BTV均可以发生反应。本研究制备的MAb为建立BTV免疫学检测方法和相关病毒蛋白的功能研究奠定了基础。
- 魏鹏孙恩成刘霓红杨涛徐青元秦永丽赵晶冯瑜菲王文世张翠云吴东来
- 关键词：蓝舌病病毒单克隆抗体VP7蛋白
