广西壮族自治区科学研究与技术开发计划(0322025-20)
- 作品数：6 被引量：10H指数：2
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- 相关机构：广西医科大学广西医科大学第一附属医院更多>>
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- 氯化锶激活对小鼠体细胞核移植胚胎卵裂率和囊胚率的影响
- 2012年
- 目的:建立氯化锶(SrCl2)诱导小鼠体细胞核移植胚胎激活的最佳方法。方法:首先构建及鉴定小鼠核移植胚胎,在注核完成后,使用以下实验激活核移植胚胎:实验1,采用5 mmol/L和10 mmol/L SrCl2处理核移植胚胎1～8 h,观察时间对卵裂率和囊胚率的影响;实验2,在4、6 h采用1～20 mmol/L多种浓度SrCl2处理核移植胚胎,观察不同浓度对卵裂率和囊胚率的影响;实验3,研究10 mmol/L SrCl2配合不同培养液激活核移植胚胎的效果;实验4,观察10 mmol/L SrCl2联合蛋白激酶抑制剂6-DMAP、细胞松驰素(CB)对体外培育核移植胚胎的影响。结果:研究发现当浓度一致时(5 mmol/L),6 h组卵裂率(38.9%)与1 h组(6.7%)、2 h组(22.8%)、3 h组(22.8%)、4 h组(25.6%)比较差异均有显著性(P<0.05),但与5 h组(28.9%)、7 h组(34.4%)、8 h组(28.9%)均无显著差异(P>0.05);当时间固定时(6 h),SrCl2浓度为10 mmol/L获得的卵裂率和囊胚率(68.9%和7.2%)较高,较1 mmol/L组(28.3%和0%)、2.5 mmol/L组(35.6%和0%)、5 mmol/L组(37.8%和1.1%)、7.5 mmol/L组(60.6%和2.2%)、15 mmol/L组(51.7%和1.1%)和20 mmol/L组(41.7%和1.1%)均高(P<0.05);不同成分培养液实验显示,含Ca2+和Mg2+KSOM组的胚胎卵裂率较低,仅为27.8%,与不含Ca2+组(69.4%)、不含Ca2+/Mg2+组(66.1%)和添加EDTA组(68.3%)比较差异均显著(P<0.05);虽然SrCl2联合各培养液对核移植胚胎体外发育影响不大,但SrCl2联合CB组囊胚细胞计数(45.40±2.23)较未联合组(30.15±1.12)、联合6-DMAP组(34.95±1.38)、联合6-DMAP+CB组(37.45±1.43)均显著增多(P<0.05)。结论:10 mmol/L SrCl2单独处理6 h或联合CB均能较好地激活小鼠体细胞核移植胚胎。
- 覃敏莫曾南莫曾南何敏杨小丽李慕军
- 关键词：核移植氯化锶
- 不同核移植方法对小鼠体细胞核移植效率的影响被引量：4
- 2009年
- 目的:研究不同核移植方法对小鼠体细胞核移植效率的影响,建立一种简单有效的核移植方法。方法:以小鼠卵丘细胞作为体细胞核移植的供核细胞,采用4种去核方法(盲吸法、蔗糖辅助去核法、化学去核法、荧光染色去核法)研究卵母细胞去核率的差异,并比较胞质内注射法和反向核移植法应用于小鼠体细胞核移植的效果。结果:荧光染色法的去核率(88%)显著高于其他试验组(P<0.05),但囊胚率和囊胚细胞数与蔗糖辅助去核法无明显差异(P>0.05);胞质内注射法构建重构胚的效率与反向核移植法相似(P>0.05),但胞质内注射法的囊胚率和囊胚细胞数较反向核移植高(P<0.05)。结论:荧光染色去核法和胞质内注射法构建体细胞核移植胚胎效率较高,可维持胚胎早期发育。
- 覃敏莫曾南何敏李慕军杨小丽江莉
- 关键词：核移植小鼠
- 核移植胚胎干细胞的鉴定及诱导分化研究被引量：1
- 2012年
- 目的观察胚胎后肾细胞微环境诱导核移植胚胎干细胞（ntESCs）分化为肾系细胞的作用。方法分离小鼠ntESCs样集落，对ntESCs进行鉴定。将核移植拟胚体（ntEBs）与胚胎后肾细胞通过间接共培养以诱导其分化。逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测诱导后ntEBs与对照组中肾组织Wilms瘤抑癌因子1（WT-1）、Wnt-4、同源盒基因2（pax-2）、c—Ret、足细胞标记蛋白（podocalyxin）和Nephnn的mRNA表达；免疫荧光染色法检测诱导后ntEBs与对照组的Pax-2、wT-1蛋白表达。结果ntESCs集落性生长，符合小鼠胚胎干细胞的一系列特性。ntEBs共培养组wT-1、Wnt-4、pax-2、c—Ret、podocalyxin和Nephnn均有表达，而对照组则为阴性；免疫荧光结果显示ntEBs细胞诱导分化后Pax-2荧光强度为（＋＋）；而实验组wT-1荧光强度（＋）也优于对照组的（±）。结论后肾细胞微环境可促进核移植胚胎来源ntESCs分化为肾系细胞。
- 覃敏黄林何敏李慕军莫曾南
- 关键词：核移植胚胎干细胞
- 近交系小鼠体细胞核移植胚胎的构建和鉴定被引量：3
- 2008年
- 背景:体细胞核移植技术已成功用于多种动物的克隆,但其过程中核移植技术的成功率较低。目的:通过对卵母细胞不同去核方法的对比分析,观察其对小鼠体细胞核移植胚胎体外发育的影响,并利用微卫星DNA技术进行核移植囊胚鉴定,初步建立小鼠体细胞核移植技术平台。设计、时间及地点:以卵母细胞为观察对象的对比实验,于2005-09/2007-10在广西医科大学医学科学实验中心及动物实验中心完成。材料:选用C57BL/6小鼠卵母细胞为受体、BALB/c小鼠卵丘细胞为供体。取600枚受体卵母细胞,根据去核方法不同分为3组,每组200枚。方法:①盲吸法:吸出卵母细胞第1极体及其附近的适量胞质。②蔗糖辅助去核法:以含蔗糖显微操作液预处理卵母细胞,吸出可见的细胞核等遗传物质。③荧光染色去核法:Hoechest33342预处理卵母细胞,在紫外光下用去除遗传物质。乙醇联合二甲氨基嘌呤进行重构胚激活,激活后卵裂培养基液滴中培养。根据MouseGenomeDatabase设计小鼠微卫星DNA多态聚合酶链反应引物,提取近交系小鼠体细胞核移植囊胚、供体BALB/c小鼠、受体C57BL/6小鼠及昆明小鼠的基因组DNA,使用巢式聚合酶链反应扩增选定的序列。最终扩增出4个微卫星位点DNA片段,即D3Mit28,D11Mit258,D12Mit136及D14Mit50。主要观察指标:比较3种去核方法的去核率、卵裂率、囊胚率及囊胚细胞数差异。对巢式聚合酶链反应产物进行琼脂糖凝胶电泳验证。结果:①盲吸去核法的去核率、处理重构胚的体外发育能力均低于荧光染色去核法和蔗糖辅助去核法(P<0.05)。②荧光染色去核法的去核率高于蔗糖辅助去核法(P<0.05),两组的囊胚率及囊胚细胞数差异均无显著性意义(P>0.05)。③巢式聚合酶链反应可扩增微量基因组DNA,通过微卫星DNA序列的扩增,证明核移植囊胚的微卫星DNA与供体细胞完全相同,而与受体细胞或者对�
- 莫曾南覃敏何敏李慕军杨小丽宣强莫林键
- 关键词：细胞移植
- 近交系小鼠体细胞核移植囊胚的微卫星DNA鉴定被引量：1
- 2009年
- 目的利用微卫星DNA技术进行体细胞核移植囊胚的鉴定。方法根据Mouse Genome Database设计小鼠微卫星DNA多态聚合酶链反应引物,提取近交系小鼠体细胞核移植囊胚、供体BALB/c小鼠、受体C57BL/6小鼠及昆明小鼠的基因组DNA,使用巢式聚合酶链反应扩增4个微卫星位点DNA片段,即D3Mit28、D11Mit258、D12Mit136及D14Mit50。对反应产物进行琼脂糖凝胶电泳验证。结果巢式聚合酶链反应可扩增微量基因组DNA,通过微卫星DNA序列的扩增,证明核移植囊胚的微卫星DNA与供体细胞完全相同,而与受体细胞或者对照细胞无亲缘关系。结论体细胞核移植囊胚基因组来源于供体BALB/c小鼠。
- 覃敏何敏宣强莫林键吴华莫曾南
- 关键词：疾病模型微卫星DNA
- 一步法和二步法培养系统对小鼠核移植胚胎体外发育的影响被引量：2
- 2009年
- 目的比较一步法和二步法两种培养系统对小鼠体细胞核移植胚胎体外发育的影响，确立一种有效的培养系统。方法构建小鼠核移植胚胎，在一步法和二步法2种培养系统中培养，观察核移植胚胎体外发育情况。结果GlyGln—KSOMg^AA／GlyGln—KSOMg^AA组核移植胚胎发育的囊胚率（3．9％）和囊胚细胞计数（34．00±2．29）与GlyGln—KSOMg^AA组差异无统计学意义（P〉0．05）。卵裂培养基（9．8％；46．05±2．62）组和卵裂培养基／囊胚培养基（10．3％；51．15±2．37）组核移植胚胎的囊胚率和囊胚细胞计数差异也无统计学意义（P〉0．05）；牛磺酸加入GlyGln—KSOM—g^AA后能有效改善早期核移植胚胎体外发育能力。结论一步法和两步法培养体系均符合小鼠体细胞核移植胚胎不同发育阶段的代谢特征和营养需求，是适宜的小鼠体细胞核移植胚胎培养方法。
- 覃敏莫曾南何敏李慕军杨小丽黄林
- 关键词：核移植胚胎培养体外发育
