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动物负链RNA病毒反向遗传操作的构建策略及应用被引量：3: 2013年; 以T7RNA聚合酶或RNA聚合酶Ⅰ/Ⅱ为基础的病毒反向遗传操作系统在设计构建和应用上由繁到简不断改进。本文分别以新城疫病毒、狂犬病病毒和禽流感病毒等负链RNA病毒为例,综述了近十年来病毒反向遗传操作中的构建策略创新及其在分子病毒学和反向疫苗学的应用,旨在为更好地利用该技术提供参考。; 朱春生赵建军闫喜军王伟; 关键词：反向遗传操作

貉源犬瘟热病毒的分离鉴定及其H基因的序列分析: 2013年; 为了研究我国貉源犬瘟热病毒(CDV)的流行、遗传变异性,试验从某养殖场选取5只疑似患犬瘟热病死貉的肝脏、肺脏、脾脏、肠等脏器,利用Vero细胞分离出1株病毒,通过免疫荧光、RT-PCR等方法鉴定为CDV,命名为HLJ(11),利用其RNA为模板,采用RT-PCR扩增血凝素(H)基因,进行序列测定与分析。结果表明:分离株HLJ(11)的H基因序列与HeB(07)1、SD(09)3、SD(07)1同源性最高,分别为99.9%、99.7%、99.6%,与Strain CDV 3、Convac vaccine strain的同源性最低,为91.4%;遗传进化分析显示,分离株HLJ(11)为Asia-Ⅰ型。; 郭抗抗闫喜军柴秀丽张蕾赵建军张海玲白雪邵西群; 关键词：H基因

肉食兽类细小病毒TaqMan-MGB荧光定量PCR方法的建立与应用被引量：2: 2013年; 为建立检测肉食兽类细小病毒荧光定量PCR方法和探索细小病毒基因组拷贝数与病毒含量之间的相关性,在肉食兽类细小病毒VP2基因区分别设计了1对保守引物和1条TaqMan-MGB标记的水解探针,通过对貉细小病毒(RDPV)LN10-1株VP2基因上的长度为92bp的保守片段进行PCR扩增,构建标准重组质粒,由已知浓度的重组质粒通过荧光定量PCR体系建立标准曲线,建立了检测肉食兽类细小病毒基因组拷贝数的荧光定量PCR方法。结果显示,该检测方法在3.50×102～3.50×107 copies/μL范围内与Cp值呈良好的线性关系(R2可达0.999),最低检测浓度为35.0copies/μL。通过标准曲线得出RDPVLN10-1株样品的目标片段拷贝数,将拷贝数值与TCID50值进行相关性分析;分析结果显示,基因组拷贝数值与病毒TCID50值之间存在极显著的正相关关系(P<0.01),血凝效价与病毒TCID50值存在显著的正相关关系(P<0.05)。结果表明,与用血凝效价测定病毒含量的方法相比,用本试验建立的荧光定量PCR技术测得的病毒拷贝数值更能准确地代表活病毒的含量。; 康洪涛赵建军柴秀丽胡博张海玲张蕾白雪邵西群闫喜军吴威; 关键词：荧光定量PCR TCID50 血凝效价

犬瘟热病毒N基因在昆虫杆状病毒表达系统中的表达及应用被引量：2: 2012年; 目的:为检测犬瘟热抗体提供诊断抗原,应用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)N蛋白。方法:采用RT-PCR克隆CDV-N基因,构建重组杆粒BacmidCDV-N,并将其转染Sf9昆虫细胞。通过Western blot和间接免疫荧光检测N蛋白的表达。以表达的CDV N蛋白为包被抗原,建立了检测犬瘟热抗体的间接ELISA方法。结果:成功表达了CDV N蛋白。间接ELISA(iELISA)方法中,犬血清最佳稀释度1∶80,N蛋白稀释度1∶40(6.3μg/100μl)。应用该方法共检测了36份犬血清,与中和试验检测方法相比较,其特异性为81.8%,灵敏度为96.0%,符合率为91.7%。结论:表达的CDV-N蛋白具有良好反应原性,建立了快速检测CDV阳性血清的iELISA方法。; 冯佩平张蕾柴秀丽张海玲赵建军胡博白雪高晗邵西群闫喜军赵权徐磊; 关键词：杆状病毒表达系统 IELISA

水貂狐狸及貉源犬瘟热病毒H基因的克隆与序列分析被引量：9: 2014年; 应用RT-PCR方法从2011—2013年来自我国不同地区7份水貂、狐狸和貉源犬瘟热阳性病料中克隆得到犬瘟热病毒（CDV）H基因。序列分析结果表明，7株CDV的H基因的核苷酸序列与推导的氨基酸序列的同源性分别为98．7％～100％和98．4％～100％；相应地，与Onderstepoort、CDV3疫苗株的同源性分别为90．5％～91．2％、88．99／5～91．1％。基于H基因推导的氨基酸序列构建的系统进化发生树显示，7株CDV野毒均属于Asia-1基因型。来自山东省的3株水貂和狐狸源[SD（12）1、SD（12）3和sD（12）2]CDV的H蛋白的氨基酸在第549位点由Y突变成H，此突变位于SLAM受体结合区域。此外，与其他Asia-1基因型CDV的H蛋白N-糖基化位点不同，2株水貂源CDV[SD（12）1和SD（12）3]H蛋白的受体结合区因第542位氨基酸I→N突变而增加了1个潜在N-糖基化位点NRT。这2个重要的点突变可能预示着我国某些地区CDV在进化过程中对非犬源宿主（狐狸、水貂）的适应性增强。; 朱春生赵建军白雪张海玲胡博张蕾邵西群许皓王振军孙彦刚闫喜军; 关键词：犬瘟热病毒血凝素蛋白水貂狐狸

貉细小病毒LN10-1株分离鉴定及其免疫原性研究被引量：11: 2012年; 为研制貉细小病毒性肠炎疫苗,筛选出针对貉细小病毒性肠炎免疫原性好、安全高效的疫苗备选株,应用CRFK细胞从辽宁省发病貉的粪便中分离病毒,并通过形态学、血清学、分子生物学、动物回归及免疫接种等方法对分离株进行鉴定。鉴定结果表明成功分离出1株貉细小病毒,命名为LN10-1株。其VP2基因核苷酸序列与猕猴源猫泛白细胞综合征病毒株(BJ-22/2008/CHN株)相似性高达99.7%。VP2蛋白上决定宿主范围的2个氨基酸位点发生了突变。VP2基因种系发生分析显示,LN10-1株位于猫泛白细胞综合征病毒(Feline panleukopenia virus,FPLV)、蓝狐细小病毒(Blue fox parvovirus,BFPV)、水貂肠炎病毒(Mink enteritis virus,MEV)组成的食肉类动物细小病毒聚类分支与由犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)组成的聚类分支。由LN10-1株制备的灭活疫苗免疫结果显示,接种28d细小病毒中和抗体滴度可达到1∶256以上。推测LN10-1株可能正处于FPLV与CPV进化的中间状态,或是CPV适应新宿主(貉)而形成的一种新病毒,可以作为针对貉细小病毒性肠炎灭活疫苗的候选株。; 康洪涛赵建军柴秀丽张蕾胡博闫喜军吴威; 关键词：VP2基因免疫原性

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国家级星火计划(2010GA660009)