福建省科技重大专项(05HZ101070193) 作品数:4 被引量:24 H指数:3 相关作者: 江贤章 黄建忠 郭晓贤 宋浩雷 秦丽娜 更多>> 相关机构: 福建师范大学 更多>> 发文基金: 福建省科技重大专项 国家科技支撑计划 更多>> 相关领域: 生物学 更多>>
酿酒酵母ADH3基因的敲除 能源是人类赖以生存和发展的关键因素,燃料乙醇作为石油能源的替代物,逐渐成为世界各国研究的热点。酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)是一种已知全序列的重要模式生物,具备单双倍体特性、乙醇耐受性强、高... 宋浩雷 郭晓贤 杨月梅 江贤章 黄建忠关键词:酿酒酵母 基因敲除 PCR 文献传递 酿酒酵母ADH3基因的敲除 被引量:11 2006年 设计含有与酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)编码乙醇脱氢酶Ⅲ的ADH3基因ORF两侧序列同源的长引物,以质粒pUG6为模板进行PCR构建带有Cre/loxP系统的敲除组件。转化酿酒酵母YS3(Saccharomyces cerevisiae),并将质粒pSH65转入阳性克隆子。半乳糖诱导表达Cre酶切除Kanr基因,在YPD培养基中连续传代培养丢失pSH65质粒,在原ORF处留下一个loxP位点,获得ADH3单倍体缺陷型菌株。利用同样的方法再次敲除双倍体的另一个等位基因。最终获得ADH3双倍体基因缺陷型突变株YS3-ADH3。 宋浩雷 郭晓贤 杨月梅 江贤章 黄建忠关键词:酿酒酵母 乙醇脱氢酶 基因敲除 PCR 酿酒酵母乙醇脱氢酶Ⅰ基因的超表达 被引量:9 2008年 利用重叠延伸PCR融合磷酸甘油激酶(phosphoglycerate kinase,PGK)启动子和酿酒酵母乙醇脱氢酶基因Ⅰ(alcohol dehydrogenaseⅠ,adh1),将该融合片段插入带有G418抗性基因(KanMX)和loxP位点的pUG6质粒中,并在adh1基因下游插入细胞色素c(Cytochrome c transcription,CYC1)终止子,构建了酿酒酵母整合表达载体pUPGKAT。TthⅢⅠ内切酶线性化后转化酿酒酵母乙醇脱氢酶基因Ⅱ(adh2)敲除菌株YS2-△adh2。根据酿酒酵母同源重组机制,使adh1基因增加1个拷贝,且其中1个拷贝置于PGK强启动子下游,利用PGK启动子的调控成功实现adh1基因的超表达。厌氧发酵试验表明该重组菌株YS2-△adh2-adh1的乙醇产量较出发菌株提高了8.84%。 秦丽娜 江贤章 田宝玉 舒正玉 黄建忠关键词:酿酒酵母 同源重组 超表达 乙醇脱氢酶 乙醇 代谢工程在酿酒酵母茵育种中的应用研究进展 被引量:2 2007年 酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)是传统的乙醇生产重要菌株,也是第1个完成基因组测序的真核生物。随着世界能源储备的日益枯竭,燃料乙醇作为液体可再生能源的广泛应用,利用生物技术对酿酒酵母进行遗传修饰,改变其代谢网络,构建高产乙醇的转基因酿酒酵母已成为当今酿酒酵母分子育种的热点。针对近年来利用代谢工程拓展酿酒酵母底物利用范围、降低副产物生成率、提高乙醇产量、改良细胞特性以及缩短发酵周期等方面的研究进展予以综述。 秦丽娜 江贤章 田宝玉 舒正玉 黄建忠关键词:燃料乙醇 代谢工程 遗传修饰 酿酒酵母 敲除sfa1基因提高酿酒酵母乙醇合成能力的研究 被引量:6 2007年 sfa1基因编码的酶具有乙醇脱氢酶和甲醛脱氢酶双功能活性,通过设计含有与sfa1基因两侧序列同源的长引物,以质粒pUG6和pUG66为模板进行PCR构建带有Cre/loxP系统的酿酒酵母sfa1基因敲除组件,转化酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)YS1并将质粒pSH47转入阳性克隆子,诱导表达Cre酶切除筛选标记,在原ORF基因处保留一个loxP位点,丢失质粒后获得sfa1基因缺陷型酵母突变株YS1-sfa1。摇瓶发酵实验表明,突变株YS1-sfa1的乙醇分解代谢活性降低,乙醇产量提高8.0%。 宋浩雷 郭晓贤 王艳尊 江贤章 黄建忠关键词:酿酒酵母 基因敲除 PCR