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Visfatin ShRNA腺病毒载体的构建及对细胞表达的影响: 2013年; 目的:Visfatin是由内脏脂肪细胞分泌的一种脂肪细胞因子,它能够发挥拟胰岛素作用,并能促进脂肪细胞的分化、合成及积聚,与糖脂代谢有着密切的联系,但其确切生理功能及作用机制仍有待进一步研究。本实验成功构建了visfatin ShRNA腺病毒载体,并验证其对Hepal-6细胞visfatin mRNA表达的影响。旨在为进一步研究visfatin在影响糖脂代谢方面的作用机制提供一个简便可行的分子生物学研究平台。方法:将前期构建的pGenesil1.2-visfatin质粒双酶切,得到目的片段mU6-visfatin ShRNA,克隆入穿梭质粒pShuttle-Basic-EGFP,I-CeuI+I-SceI双酶切后转入pAdxsi载体,经筛选、鉴定后,通过脂质体转染HEK293细胞,包装后得到腺病毒Adxsi-GFP-mU6-visfatin,病毒颗粒法(viral particle,VP)和半数组织感染量法(50%tissue culture infective dose,TCID50)测定其滴度。感染hepal-6细胞后,实时定量PCR检测visfatin的mRNA表达。结果:经酶切及测序鉴定,结果与预期一致。VP法检测病毒滴度为3.20×1012VP/mL,TCID50法测得滴度为2×1011PFU/mL。重组病毒感染后,对小鼠Hepal-6细胞visfatin基因mRNA表达抑制率>70%。结论:成功构建了visfatin ShRNA重组腺病毒载体,并能有效抑制小鼠Hepal-6细胞visfatin基因表达,为后期进一步研究visfatin在糖脂代谢方面的作用机制提供了一个基因表达下调的生物学模型。; 刘大伟李伶杨刚毅杨晓敏卢春敏; 关键词：VISFATIN 腺病毒载体 RNA干扰

痛风的诊治进展被引量：2: 2016年; 随着痛风发病率的不断上升,痛风性关节炎逐渐成为临床上最常见的炎性关节病,严重地影响了病患的生活质量。关于痛风诊治的研究也受到广泛的关注。目前,痛风的常规诊治仍存在局限,新的诊断标准、检测手段以及新型治疗药物逐渐涌现,给痛风的诊治带来了新的希望。本文就目前临床上常见的痛风诊断标准、影像学检查的优缺点以及新型抗痛风药物的治疗进行了简要综述。; 胡昌伦蒲丹岚尹经霞廖涌杨刚毅; 关键词：痛风高尿酸血症

JAZF1基因对3T3-L1脂肪细胞Akt和AMPK信号途径的影响被引量：2: 2014年; 目的探讨JAZFl（juxtaposed with another zinc finger gene 1）基因对333一L1脂肪细胞蛋白激酶B（Akt）和AMP活化的蛋白激酶（AMPK）信号通路的影响。方法构建pGenesil—JAZFlshRNA重组质粒，转染3T3．L1脂肪细胞后分别用胰岛素或利拉鲁肽处理细胞。2．脱氧-^3H—D-葡萄糖掺入法检测细胞的葡萄糖摄取，Western印迹法检测各组细胞Akt和AMPK的磷酸化水平。结果成功构建的pGenesil-JAZFlshRNA重组载体转染333-L1脂肪细胞后下调JAZF1表达，使基础和胰岛素刺激的葡萄糖摄取降低33．6％和38．8％（均P〈0．05）。胰岛素或利拉鲁肽增加333-L1脂肪细胞Akt和AMPK磷酸化水平（均P〈0．05），JAZF1表达下调降低基础和2种激素刺激的Akt和AMPK活性（均P〈0．05）。结论JAZF1基因可能通过Akt和AMPK信号通路改善糖代谢。; 罗小河李伶杨刚毅杜林贾彦军冉文侠张亚丽罗妤; 关键词：蛋白激酶B 利拉鲁肽

不同糖耐量人群血清含BED锌指蛋白3水平及其与胰岛素抵抗的相关性研究被引量：1: 2014年; 目的探讨不同糖耐量人群血清中含BED锌指蛋白3（ZBED3）水平的变化及其与胰岛素抵抗的关系。方法以2型糖尿病（T2DM，n=109）、糖耐量正常（NGT，n=113）、糖耐量受损（IGT，n=89）者为研究对象。采用酶联免疫法测定患者血清ZBED3水平，分析其与人体学指标如血压、腰臀比、体重指数（BMI）及其他相关代谢指标的关系，并分析高胰岛素、高血糖对ZBED3的影响。结果T2DM组血清ZBED3水平明显高于IGT组和NGT组[（142．1±31．0对122．2±25．4和96．0±19．7）ng／L，均P〈0．01]；女性人群中血清ZBED3水平明显高于男性[（122．0±34．6对114．7±26．6）ng／L，P〈0．05]；超重组血清ZBED3水平高于非超重组[（131．1±31．6对88．6±17．1）ng／L，P〈0．01）]；血清ZBED3水平与BMI、腰臀比、体脂百分比（BF％）、收缩压、舒张压、甘油三酯（TG）、空腹血糖、空腹胰岛素、HbA1c、稳态模型评估的胰岛素抵抗指数（HOMA．IR）呈明显正相关（均P〈0．01），与高密度脂蛋白胆固醇呈负相关（P〈0．01），多元逐步回归分析显示腰臀比、BF％、舒张压、TG、HbA1c、HOMA．IR是影响血清ZBED3的独立相关因素；糖耐量正常者口服75g葡萄糖30min后血清ZBED3从基线（96．0±19．7）ng／L快速上升到（169．0±39．1）ng／L（P〈0．01），而后逐渐下降，2h时为（93．5±29．1）ng／L。结论血清ZBED3在T2DM、IGT患者及超重人群中均明显升高，其可能与胰岛素抵抗发生发展相关，并受血糖和胰岛素影响。; 罗涌杨刚毅李伶李钶张利莉钟晓妮阳皓张程徐伟冉东川何艳袁云川张先祥; 关键词：胰岛素抵抗肥胖

大鼠中枢nesfatin-1信号改善肝胰岛素抵抗的机制研究被引量：4: 2013年; 目的探讨中枢nesfatin-1对肥胖大鼠肝胰岛素信号通路的影响。方法成年雄性SD大鼠40只分为4组：（1）普通饮食人工脑脊液组（NCA）；（2）普通饮食nesfatin-1组（NCN）；（3）高脂饮食人工脑脊液组（HFA）；（4）高脂饮食nesfatin-1组（HFN）。采用实时荧光定量PCR测定各组大鼠肝脏磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（PEPCK）和葡萄糖-6-磷酸酶（Glc-6-Pase）的mRNA表达，Western印迹检测PEPCK、Glc-6-Pase、InsR、IRS-1、Akt、AMPK、TORc2、mTOR的蛋白及其磷酸化表达水平，免疫组化测定nesfatin-1及人工脑脊液干预后下丘脑核团c-fos蛋白的表达。结果高脂喂养抑制了大鼠肝脏InsR、IRS-1、Akt、AMPK和TORc2磷酸化水平。在普通及高脂饮食喂养条件下，中枢nesfatin-1干预均能显著降低大鼠肝脏PEPCK mRNA和蛋白表达（均P〈0.05），同时增加Akt及AMPK蛋白表达（P〈0.01或P〈0.05）。并且能促进大鼠肝脏InsR、IRS-1、TORc2和mTOR磷酸化（P〈0.01或P〈0.05）。此外，中枢nesfatin-1还增加了视上核、室旁核和弓状核的c-fos表达（均P〈0.01）。结论中枢nesfatin-1通过激活InsR/IRS-1/AMPK/Akt/mTOR/TORc2信号通路改善肥胖大鼠肝胰岛素敏感性。; 张颖张志红杨刚毅李伶李钶张利莉陈文雯李生兵; 关键词：糖尿病 NESFATIN-1 胰岛素抵抗下丘脑

锌α2糖蛋白与胰岛素抵抗相关疾病关系的研究进展被引量：5: 2015年; 随着现代生活方式及饮食习惯的改变,疾病谱的重心逐渐转变为慢性非感染性疾病。心血管疾病、糖脂代谢紊乱、肥胖、代谢综合征、多囊卵巢综合征等疾病均与胰岛素抵抗有关。胰岛素抵抗是慢性非感染性疾病的重要组成部分,患病人群众多,严重影响其生活质量。锌α2糖蛋白(Zinc-α2-Glycoprotein,ZAG)是新近发现的一种具有调节体质量和改善胰岛素敏感性的脂肪因子,因其与胰岛素抵抗相关疾病关系密切逐渐受到人们的重视。近年来大量临床实验研究ZAG与胰岛素抵抗的关系,本文拟这些研究进展做一综述。; 尹经霞廖涌李伶杨刚毅; 关键词：胰岛素抵抗高血压糖尿病肥胖

脑出血患者早期高血糖与其近期死亡率相关性的Meta分析被引量：8: 2013年; 目的探讨自发性脑出血患者早期高血糖与其近期死亡率的相关性。方法检索PubMed、Embase、Cochran、万方数据库、维普咨询网、CNKI数据库等，搜索和筛选目前发表的以“早期高血糖与自发性脑出血患者近期死亡率关系”为主要研究内容的文献，提取整理相关数据。采用Meta分析评估高血糖组和非高血糖组近期死亡率RR值及95％CI，并进行发表偏倚分析。结果共纳入8篇文献，研究对象3756例。高血糖切点范围：6．1～8．3mmol／L；中位数切点：7．5mmol／L。与高血糖相关的近期死亡率RR=3．65，95％CI：3．08～4．33，P〈0．01。亚组分析，A组：RR=3．46，95％CI：1．66～7．20，P=0．09；B组：RR=3．49，95％CI：2．89～4．21，P〈0．01。发表偏倚均显示，Egger’s test（P〉0．1），Begg’s test（P〉0．05），Nfs0．05远大于纳入文献数量。结论早期高血糖增加自发性脑出血患者近期死亡风险，亚组分析尚未发现其关系受高血糖切点的影响。; 李毅何煦杨刚毅李伶王毅李生兵李钶张利莉; 关键词：高血糖脑出血 META分析

Visfatin基因表达下调对小鼠脂肪细胞及肝细胞脂代谢的影响被引量：5: 2013年; 目的探讨Visfatin基因表达抑制对小鼠脂肪细胞及肝细胞脂代谢相关基因的影响。方法构建并筛选具有最佳抑制率的pGene-sil-Visfatin表达载体,转染小鼠3T3-L1脂肪细胞及Hepa1-6肝细胞,Western印迹法测定两种细胞的Visfatin蛋白水平,实时荧光定量PCR法测定Vis-fatin、脂代谢相关基因的mRNA表达水平,油红O染色法测定脂肪细胞内甘油三酯(TG)含量变化。结果 pGenesil-visfatin可有效抑制两种细胞Vis-fatin蛋白表达。脂肪细胞转染pGenesil-Visfatin后,脂代谢相关基因PPARα/γ,HSL,ATGL,AP2,SREBP1,FAS,ACC mRNA表达均下降(其中PPARγ与ACC P<0.05,余P<0.001),TG含量降低,但无统计学差异;肝细胞转染后,PPARα,SREBP1,FAS以及SREBP2,HMGCR,LDLr mRNA表达显著降低(P<0.001),而HSL,ATGL与ACC变化无统计学意义(P>0.05)。结论 Visfatin基因表达下调可能对细胞脂质代谢具有调节作用。; 张亚丽李伶杨刚毅卢春敏; 关键词：VISFATIN 3T3-L1细胞脂代谢

不同糖耐量人群血浆分泌型卷曲相关蛋白5水平与胰岛素抵抗的相关性研究被引量：13: 2013年; 目的探讨不同糖耐量人群血浆分泌型卷曲相关蛋白5(SFRP5)水平变化及与APN、IR的关系。方法采用ELISA测定不同糖耐量人群血浆SFRP5和APN水平,分析血浆SFRP5与APN及相关代谢指标的关系。结果 T2DM、IGT组血浆SFRP5水平低于正常对照(NC)组[(42.99±20.89)vs(49.21±21.52)vs(78.48±23.72)μg/L,P<0.01]。肥胖者血浆SFRP5水平低于非肥胖者[(42.05±19.93)vs(67.72±26.48)μg/L,P<0.01]。相关性分析发现,血浆SFRP5水平与BMI、WHR、体内脂肪百分比(Fat%)、SBP、DBP、FPG、FIns、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、HbA1c、TG、FFA呈负相关(P均<0.01),与APN、LDL-C呈正相关(P均<0.01)。结论血清SFRP5水平在新诊断T2DM患者和肥胖人群中明显降低,可能与IR有关。; 尹经霞杨刚毅张利莉李伶李生兵廖涌; 关键词：胰岛素抵抗肥胖糖尿病

2型糖尿病患者动脉粥样硬化性心血管疾病风险横断面研究被引量：4: 2016年; 目的：探讨2型糖尿病（type 2 diabetes mellitus,T2DM）患者动脉粥样硬化性心血管疾病（atherosclerotic cardiovascular disease,ASCVD）高风险（心血管风险可视化评估工具QRISK2≥10%）的现状及相关危险因素。方法：搜集武警重庆总队医院2015年7月至2016年1月25-84岁住院或门诊T2DM患者共271例。按照心血管风险可视化评估工具QRISK2评分检测项目要求,采用统一的调查表,收集被调查人员的社会人口学特征、主要疾病特征以及生化指标,主要包括年龄、性别、吸烟、一级亲属早发（〈60岁）心血管疾病史、既往病史、身高、体质量、血压及血脂情况。结果：调查人群中QRISK2≥10%患者比例占82.66%。男性患者平均QRISK2评分较女性患者平均评分高1.14倍[（23.28±8.77）%vs.（20.31±10.01）%,t=-2.364,P=0.019]。QRISK2评分随年龄呈现逐渐增加趋势,男性患者ASCVD高风险较女性患者更显年轻化[（62.43±8.74）岁vs.（67.20±7.45）岁,t=4.367,P=0.000]。年龄、是否吸烟、SBP、TG及有无糖尿病慢性并发症是影响QRISK2评分≥10%（ASCVD高风险）的影响因素,是否吸烟为最重要影响因素（OR=297.03,95%CI=31.00-2845.66,P=0.000）。结论：通过对QRISK2评分对T2DM患者ASCVD风险进行评估,简便、有效。我院T2DM患者ASCVD风险是较高,有必要进行积极管理干预以减少不良结局事件。T2DM患者ASCVD高风险影响因素较多,包括年龄、病程、吸烟等。; 蒲丹岚尹经霞唐萍廖涌杨刚毅; 关键词：2型糖尿病动脉粥样硬化性心血管疾病

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国家教育部博士点基金(20105503110002)

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