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EWS-FLI1介导DTA基因在尤文肉瘤移植瘤裸鼠模型体内特异表达研究: 2006年; 目的观察EW S-FLI1介导的白喉毒素A链基因(d iphtheria toxin A cha in gene,DTA)在尤文肉瘤裸鼠移植瘤模型体内特异表达情况。方法采用尾静脉注射给药,将含有EW S-FLI1特异结合序列ACCGGAAGT和白喉毒素A链基因的真核表达载体pS2-DTA导入尤文肉瘤裸鼠移植瘤模型体内,通过免疫组化及RT-PCR检测DTA的表达情况。结果DTA在肿瘤组织中有高表达,肝组织中有弱表达,心肌组织中表达结果为阴性。结论EW S-FLI1介导的DTA可在尤文肉瘤裸鼠移植瘤内特异表达。; 赵忠全冯岗王东林; 关键词：尤文肉瘤裸鼠

作为基因转移载体的乙型肝炎病毒衣壳对肝癌细胞的靶向性: 2007年; 目的:探讨乙型肝炎病毒衣壳作为基因转移载体对肝癌细胞的靶向性和有效性。方法:采用PEG8000病毒浓缩法、β-丙内脂法从能持续产生HBV的HepG2.2.15细胞上清液中制备乙型肝炎病毒衣壳(hepatitisBvirusenvelope,HBVE),用它包裹绿色荧光蛋白质粒(pIRS2-EGFP)后得到基因转移载体复合物HBVE-GFP,用脂质体包裹pIRS2-EGFP后得到基因转移载体复合物Liposome-GFP。用HBVE-GFP及作为对照的Liposome-GFP转染人成肝细胞瘤HepG2细胞来研究其转导效率;用HBVE-GFP分别转染HepG2细胞及作为对照的人肺腺癌细胞A549、人宫颈癌细胞HeLa、人皮肤成纤维细胞FB来研究其靶向性;荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达情况,流式细胞术检测细胞发光率。结果:(1)有效性检测:Liposome-GFP组及HBVE-GFP组均可见绿色荧光蛋白的表达,HBVE-GFP组的荧光强度较Liposome-GFP组更强(P<0.01);Liposome-GFP组的转染效率为(49.97±2.37)%,而HBVE-GFP组为(70.65±3.15)%,两者差异显著(P<0.01)。(2)靶向性检测:各种细胞均可见绿色荧光蛋白的表达,HepG2细胞较其他细胞具有更强的荧光强度(P<0.01),HepG2细胞的转染效率为(71.35±0·03)%,显著高于其他3组(P<0.01)。结论:乙型肝炎病毒衣壳作为基因转移载体对肝癌细胞具有较好的转染有效性和靶向性。; 潘德键王东林王卫兵周锡建陈正堂; 关键词：基因转移载体转染效率靶向性肝癌

乙肝病毒衣壳作为肝癌基因转移载体对肝癌是否有靶向性: 2007年; 背景与目的：乙型肝炎病毒（HBV）具有嗜肝性的主要原因在于病毒衣壳（HBVE）上镶嵌的外衣壳蛋白PreS1,利用此生物特性有可能将HBVE改造成肝癌靶向性基因转移载体.本研究探讨乙型肝炎病毒衣壳作为基因转移载体对肝癌是否有靶向性.方法：采用PEG 8000病毒浓缩法、β-丙内脂法从Hep G 2.2.15细胞上清液中制备乙型肝炎病毒衣壳（HBVE）,用它包裹绿色荧光蛋白质粒（pIRS2-EGFP）后得到基因转移载体复合物HBVE-GFP,用HBVE-GFP分别转染Hep G2、A549、HeLa、FB细胞,通过荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达情况,通过流式细胞仪检测细胞发光率.结果：荧光显微镜下观察可见,各组均可见绿色荧光蛋白的表达,Hep G2组较之其他3组具有更高的荧光强度;流式细胞仪检测结果显示,Hep G2组的转染效率为（71.35±0.03）%,显著高于其他3组（P＜0.001）,且其荧光强度是其他3组的3～4倍（P＜0.001）.结论：乙型肝炎病毒衣壳作为载体对肝癌具有较好的靶向性.; 潘德键王东林陈正堂; 关键词：靶向性肝癌基因转移

含EWS-FLI1结合序列的DTA载体对报告基因表达抑制的研究被引量：1: 2004年; 目的　研究含尤文家族肿瘤EWS FLI1结合序列的DTA载体对报告基因表达的抑制作用。方法　构建含有EWS FLI1结合序列和白喉毒素A链基因的表达载体 pS2 DTA。共同转染不同剂量梯度的 pS2 DTA和pS2到尤文肉瘤细胞和对照细胞 ,检测荧光强度。结果　每增加一个 pS2 DTA剂量梯度 ,在尤文肉瘤细胞中都可以检测到虫荧光素酶的表达显著降低 ,而在对照细胞中这种作用却不明显 ;在同一个pS2 DTA剂量梯度下 ,虫荧光素酶在尤文肉瘤细胞的表达都显著高于非尤文肉瘤细胞。结论　pS2 DTA转染可以抑制尤文肉瘤细胞内其它基因表达。; 冯岗赵忠全王东林; 关键词：融合基因虫荧光素酶

作为基因转移载体的乙肝病毒衣壳的制备及其功能的初步鉴定被引量：3: 2006年; 目的构建具有肝脏靶向性的乙型肝炎病毒衣壳基因转移载体。方法采用PEG8000病毒浓缩法提取HepG2.2.15细胞上清液中的乙型肝炎病毒,用β-丙内酯法制备乙型肝炎病毒衣壳,用它包裹5.3kb的绿色荧光蛋白质粒以测试其装载能力,并用ELISA法、PCR法、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、透射电镜等对它进行定量、定性研究,最后将其转染HepG2细胞,通过荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达情况,通过流式细胞仪检测细胞发光率。结果制备的乙型肝炎病毒衣壳载体保留病毒衣壳的表面蛋白HBsAg+preS1+preS2,无病毒DNA;该载体对绿色荧光蛋白质粒较高装载容量,装载绿色荧光蛋白质粒后在肝癌细胞中有很高的转移效率,并能实现高表达。结论采用PEG8000病毒浓缩法、β-丙内酯法可从HepG2·2·15细胞上清液中制备乙型肝炎病毒衣壳基因转移载体,该载体具有良好的生物学功能。; 潘德键赵忠全王东林陈正堂; 关键词：乙型肝炎病毒衣壳靶向性基因转移

尤文肉瘤EWS-FLI1与特异序列结合并调节表达的研究被引量：4: 2004年; 目的　研究尤文肉瘤EWS FLI1与特异基因序列的结合性及其对下游基因表达的调节作用。方法　用脂质体转染含尤文肉瘤EWS FLI1特异结合序列的pS2质粒到尤文肉瘤细胞及对照细胞 ,进行荧光定量检测 ,确定各组细胞荧光强度。结果　虫荧光素酶在尤文肉瘤细胞中表达强度明显高于非尤文肉瘤细胞。结论　尤文肉瘤特异性的EWS; 冯岗赵忠全王东林; 关键词：尤文肉瘤融合基因虫荧光素酶

白喉毒素抗肿瘤作用研究进展被引量：2: 2005年; 冯岗赵忠全王东林; 关键词：白喉毒素肿瘤基因疗法

携带尤文肉瘤EWS-FLI-1结合序列的DTA表达载体构建及其对尤文肉瘤细胞杀伤作用的研究被引量：3: 2004年; 目的　研究尤文氏肉瘤EWS FLI 1融合蛋白的特异结合序列与DTA基因融合后的表达及对尤文肉瘤细胞的杀伤作用 ,为肿瘤基因治疗探索新的治疗方法。方法　构建含有EWS FLI 1特异结合序列和白喉毒素A链基因的表达载体pS2 DTA。转染尤文肉瘤细胞以及对照细胞后检测DTA表达及其对细胞的杀伤作用。结果　表达载体pS2 DTA在尤文肉瘤细胞系中高表达并产生强烈的杀伤作用。结论　pS2 DTA可以对尤文肉瘤细胞产生选择性杀伤作用 ,抑制其生长。; 冯岗赵忠全王东林; 关键词：尤文肉瘤融合基因基因治疗

Hep G2细胞中乙肝病毒衣壳包裹绿色荧光蛋白质粒表达的研究被引量：1: 2007年; 目的:观察乙型肝炎病毒衣壳(hep-atitis B virus envelope,HBVE)包裹绿色荧光蛋白质粒在肝癌细胞株(Hep G2细胞)中的表达效果是否优于脂质体包裹绿色荧光蛋白质粒。方法:采用PEG8000病毒浓缩法、β-丙内脂法从Hep G2.2.15细胞上清液中制备HBVE基因转移载体,分别用HBVE及脂质体包裹绿色荧光蛋白质粒(pIRS2-EGFP)后转染Hep G2细胞,通过荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达情况,流式细胞仪检测细胞发光率。结果:荧光显微镜下观察可见,脂质体组及HBVE组均可见绿色荧光蛋白的表达,HBVE组较之脂质体组具有更高的荧光强度;流式细胞仪检测结果显示,脂质体组的转染效率为49.97%,而HBVE组转染效率为70.65%,其转染效率及荧光强度明显高于脂质体组,P=0.000。结论:HBVE包裹绿色荧光蛋白质粒较之脂质体包裹在HepG2细胞中具有更好的转染效果。; 潘德键王东林王卫兵周锡建陈正堂; 关键词：脂质体基因转移

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国家自然科学基金(30100189)

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