国家科技重大专项(2011ZX08002004-003)
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
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- 相关机构：山东农业大学更多>>
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- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 西尔斯山羊草(Aegilops searsii)α-醇溶蛋白编码基因的克隆及原核表达
- 2015年
- 醇溶蛋白是小麦加工品质的重要影响因素,主要决定面团的粘性和延展性。根据酸性条件下迁移率的不同,可将醇溶蛋白分为α-,β-,γ-,ω-醇溶蛋白。α-醇溶蛋白占贮藏蛋白的15%～30%,是含量最丰富的一类贮藏蛋白,同时,α-醇溶蛋白中含有一些致敏性的毒性多肽。克隆西尔斯山羊草α-醇溶蛋白基因,并进行序列分析,通过构建原核表达载体,使其在大肠杆菌中诱导表达融合蛋白,并通过切胶纯化法,获得纯度较高的目的蛋白。根据α-醇溶蛋白基因编码区保守序列设计引物,通过PCR扩增克隆得到α-醇溶蛋白基因并进行序列分析。将目的基因KC421089连到表达载体p EASY-E1上,在大肠杆菌BL21（DE3）中经IPTG诱导表达,获得表达的融合蛋白。通过切胶纯化法,获得纯度较高的目的蛋白。从小麦近缘植物西尔斯山羊草（Aegilops searsii）中首次克隆了7个α-醇溶蛋白编码基因,它们的编码区长度分布在849～954 bp之间,可编码282～317个氨基酸。通过与已发表的其它物种的α-醇溶蛋白氨基酸序列进行多重比对分析,发现这些基因都具有α-醇溶蛋白编码基因典型的结构特点,同时还存在着碱基的缺失、插入以及SNPs。在克隆目的基因的基础上,本研究还通过大肠杆菌体外表达和切胶纯化方法,获得了纯度较高的目的蛋白,实现了该基因的表达。克隆了7个α-醇溶蛋白基因序列,登录号为KC421089的基因可在原核系统中成功表达,并通过切胶纯化法获得目的蛋白,为进一步利用西尔斯山羊草改良小麦加工品质奠定了基础。
- 刘国娟马信尹华燕孙鑫杜旭烨王宏伟李安飞陈呈涛孔令让
- 关键词：原核表达
- 尾状山羊草α-醇溶蛋白基因的克隆和序列分析
- 2014年
- 本研究利用一对α-醇溶蛋白基因的特异引物,从小麦近缘植物尾状山羊草Y46中克隆获得5个α-醇溶蛋白基因,与NCBI已提交的α-醇溶蛋白序列进行多重比对分析发现,本研究获得的α-醇溶蛋白基因与已知的小麦及其近缘植物中的α-醇溶蛋白基因序列具有较高的相似性,其编码的氨基酸序列存在一定的多态性;在潜在的致敏性上,在这5个α-醇溶蛋白序列中未发现任何已知的与乳糜泻病相关的抗原表位,这在小麦及其近缘植物中较为罕见;进化分析表明,来自C染色体组中的α-醇溶蛋白与来自M和U染色体组的α-醇溶蛋白具有较近的亲缘关系。
- 薄存瑶杜旭烨刘国娟尹华燕王宏伟李安飞孔令让
- 关键词：基因克隆
- 柱穗山羊草类燕麦储藏蛋白基因克隆和序列分析被引量：1
- 2012年
- 从小麦近缘植物柱穗山羊草中克隆得到一个特殊的类燕麦储藏蛋白(Avenin-like protein)基因。其编码区比已知的类燕麦储藏蛋白编码基因长200 bp左右,是迄今发现的最大的类燕麦储藏蛋白,将其命名为AL-Y127。通过与已知的类燕麦储藏蛋白基因比较后发现,该蛋白家族在信号肽、N末端和C末端具有很高的保守性,而在重复区中则具有较大的序列差异。AL-Y127中有26个半胱氨酸残基,远多于已知的avenin-like蛋白中的半胱氨酸残基数目,这些半胱氨酸残基可能会参与形成更多的二硫键,有利于提高面粉的加工品质。
- 杜旭烨周婷婷许骥坤郭伟华赵小龙翟军孔令让
- 关键词：基因克隆
