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乙型肝炎病毒多聚酶末端蛋白重链可变区抗体体外抑制病毒的复制被引量：1: 2007年; 目的用蛋白片段互补法（PCA）选择HBV多聚酶末端蛋白（TP）重链可变区（VH）抗体，研究特异性VH抗体体外抑制HBV的复制与分泌。方法以HBV多聚酶TP区为抗原，用PCA法进行特异性VH抗体筛选。特异性VH抗体基因定向亚克隆入真核表达载体pZeoSV2（＋），构建pZeoSV2（＋）-VH重组质粒，用脂质体介导的转染技术，将其导入HepG2．2．15细胞，观察特异性抗体的生物学活性。结果用PCA法从抗体库中选择出3个特异性抗体：VH1、VH2和VH3，其中与抗原亲和力最高的是VH1。转染pZeoSV2（＋）-VH1的HepG2．2．15细胞比未转染pZeoSV2（＋）-VH1或只转染空载体pZeoSV2（＋）的HepG2．2．15细胞病毒颗粒分泌明显减少，上清液内为2．9787±0．2761比5．1504±0．2761和5．2951±0．2410（P〈0．05）；细胞内为5．2839±0．1629比8．3004±0．3232和8．5321±0．1383（P〈0．05）。结论用PCA法可从抗体库中选择出HBV多聚酶TP区特异性VH抗体，该抗体在体外可抑制HBV的复制与分泌。; 于俊岩汤勃周吉军邓春青兰林王宇明

选择HBV DNA多聚酶TP区VH抗体的一种新方法:蛋白片段互补法: 2006年; 目的:用PCA(Prote in fragm ent comp lem entation assay,PCA,蛋白片段互补方法)选择HBV(Hepatitis B virus)多聚酶TP(Term inal prote in,TP,末端蛋白)区VH(Variab le fragm ents of heavy chain,VH,重链可变区)抗体。方法:用HepG2.2.15细胞分泌的HBV的多聚酶TP区作为抗原,用PCA方法进行VH抗体选择。抗原与抗体基因分别与二氢叶酸还原酶(DHFR)的两部分相连。特异性抗原、抗体相互识别,分别与他们相连的酶基因就会接触而恢复完整的DHFR酶活性,细菌得以存活。结果:对HBV DNA多聚酶TP区进行抗体选择,用PCA方法从抗体库中选择出3个对应抗体。3个TP区抗原特异性抗体有不同的氨基酸序列。结论:对HBV DNA多聚酶TP区进行抗体选择,用PCA方法可以从抗体库中较为简便的选择出对应抗体。PCA可以作为一个从抗体库中选择特异性抗体的强有力方法。; 于俊岩兰林王宇明丁世涛; 关键词：乙型肝炎病毒甲氧苄氨嘧啶

蛋白转导结构域介导乙型肝炎病毒聚合酶末端蛋白重链可变区抗体体外抑制病毒的复制: 2009年; 目的蛋白转导结构域（TAT）介导HBV聚合酶末端蛋白（TP）重链可变区（VH）抗体，研究特异性TAT—VH抗体体外对HBV复制的影响。方法将TAT—VH基因克隆入原核表达载体pET28a（＋），在大肠埃希菌BL21（DE3）LysS内诱导融合蛋白表达并进行纯化。纯化的TAT—VH加入培养的HepG2．2．15细胞，间接免疫荧光法检测其导人HepG2．2．15细胞的效率，四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测其对细胞生长代谢的影响，将TATVH加入培养的HepG2．2．15细胞，定量PCR法检测HBVDNA水平。数据行单因素方差分析和t检验。结果成功制备了TAT—VH融合蛋白，间接免疫荧光及MTT证实TATVH可以跨膜导入HepG2．2．15细胞，且对细胞生长无影响．力口入5000nmol／LTAT—VH的HepG2．2．15细胞培养上清液内HBVDNA为（1．211±0．132）lg拷贝／mL，对照组为（5．325±0．041）lg拷贝／mL（t=72．91，P〈0．05）；细胞内分别为（3．521±0．411）和（8．532±0．132）lg拷贝／mL（t=28．41，P〈0．05）。结论HBV聚合酶TP区特异性TAT—VH抗体在体外可抑制HBV复制，为应用细胞内抗体治疗HBV感染提供了良好的实验基础。; 于俊岩兰林李俊刚张长江王宇明; 关键词：转导免疫球蛋白类重链病毒复制

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国家自然科学基金(30100159)