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大鼠雪旺细胞Neuritin的表达被引量：4: 2011年; 目的探讨体外培养大鼠雪旺细胞Neuritin的表达。方法体外培养和纯化大鼠雪旺细胞,用RT-PCR和Western blot方法分别鉴定Neuritin在雪旺细胞转录和翻译水平的表达。结果 Neuritin在雪旺细胞的转录和翻译水平均有表达,分为细胞内和分泌性两种。结论 Neuritin在大鼠雪旺细胞有表达。; 石敏李剑波张红曼徐宽枫许馨予程恒沈捷杨涛陈家伟; 关键词：雪旺细胞 NEURITIN

氧化应激对糖尿病大鼠Neuritin水平和坐骨神经功能及超微结构的影响: 2015年; 目的探讨氧化应激对糖尿病大鼠血清Neuritin水平和坐骨神经功能及超微结构的影响。方法 40只SD大鼠随机均分为四组。NC组作为空白对照;DC、LD和HD组大鼠腹腔注射链脲佐菌素55mg/kg建立糖尿病模型。DC组为模型对照;LD和HD组分别腹腔注射硫辛酸20mg·kg-1·d-1和40mg·kg-1·d-1,连续用药6周。分别在给药2、4、6周时检测大鼠血清丙二醛(MDA)、Neuritin的含量及超氧化物歧化酶(SOD)的活性,测量坐骨神经运动传导速度(MNCV),采用透射电镜观察坐骨神经超微结构。结果与NC组相比,DC组2周后MDA含量升高,SOD活性和Neuritin含量降低(P<0.05),4周后坐骨神经MNCV降低(P<0.05),坐骨神经出现脱髓鞘病变。与DC组相比,LD、HD组给药2周后SOD活性和Neuritin含量升高(P<0.05),给药4周后MDA含量降低,坐骨神经MNCV升高(P<0.05)。结论氧化应激可能直接或者通过影响Neuritin水平引起糖尿病外周神经的异常。; 张莹端李剑波奚春红颜莓徐宽枫许馨予陈恒王玉成杨涛; 关键词：氧化应激糖尿病

大鼠雪旺细胞Neuritin基因shRNA表达载体构建及其体外抑制效应被引量：4: 2012年; 目的构建针对大鼠neuritin基因的短发夹状小干扰RNA(shRNA)表达载体,并研究该载体对neuritin基因表达的沉默效应及雪旺细胞生存的影响。方法设计并合成neuritin靶向siRNA序列,连接pGCSIL-GFP慢病毒表达载体后,将neuritin基因干扰质粒和重组表达质粒共转染入293T细胞,包装成慢病毒,以此感染大鼠雪旺细胞,分为空白对照组(A组)、无意义干扰组(B组)和干扰组(C组)。RT-qPCR、Western blot及Annexin V/PI方法分别检测细胞neuritinmRNA、蛋白表达及细胞凋亡情况。结果与A、B组相比,C组雪旺细胞neuritin mRNA和蛋白表达水平降低,而细胞凋亡明显增加(P<0.01或P<0.05)。结论成功构建neuritin基因shRNA慢病毒表达载体。其转染的雪旺细胞neuritin基因表达受抑制,并导致细胞凋亡增加。; 张红曼李剑波晏玲飞解敏徐宽枫许馨予陈恒杨涛陈家伟; 关键词：慢病毒转染雪旺细胞凋亡

转染高表达Neuritin基因的雪旺细胞在高糖时对背根神经节突起的影响被引量：1: 2014年; 目的探讨转染高表达neuritin基因的雪旺细胞在高糖情况下对背根神经细胞的影响。方法构建neuritin基因的高表达系统,包装出含有目的基因的慢病毒载体,转染雪旺细胞。流式细胞计数法(FACS)检测雪旺细胞的转染率。分离纯化SD大鼠的背根神经细胞,与转染高表达neuritin基因的雪旺细胞或正常雪旺细胞共培养。高糖情况下分别观察其对背根神经细胞生长的影响。细胞免疫荧光化学分析背根神经元突起的生长情况。ELISA检测细胞培养上清液中neuritin的浓度。结果高糖情况下,与非转染雪旺细胞/背根神经细胞共培养相比,转染高表达neuritin基因雪旺细胞/背根神经细胞共培养的培养液中neuritin的含量增高,并且促进背根神经细胞突起的生长(P<0.05)。结论在高糖情况下,转染neuritin基因的雪旺细胞能高分泌neuritin蛋白,并促进背根神经节的生长。; 颜莓李剑波张莹端解敏晏玲飞陈恒许馨予徐宽枫; 关键词：NEURITIN 高糖雪旺细胞

胰岛素样生长因子1对大鼠雪旺细胞Neuritin表达的影响: 2013年; 目的探讨高糖状态下胰岛素样生长因子1(IGF-1)对体外培养的大鼠雪旺细胞neuritinmRNA及蛋白表达的影响。方法体外培养的大鼠雪旺细胞分为五组:A组为非干预对照组;B、C、D和E组分别以浓度为0.1、1、10和100ng/ml的IGF-1并高糖同步处理36h。用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、蛋白免疫印迹实验分别检测大鼠雪旺细胞neuritin mRNA和蛋白的表达量。结果B、C组雪旺细胞neuritin mRNA和蛋白表达量与A组相仿(P>0.05),D、E组雪旺细胞neuritinmRNA和蛋白表达量均显著高于A组(P<0.05)。D组与E组雪旺细胞neuritin mRNA和蛋白表达量比较无统计学差异(P>0.05)。结论 IGF-1能上调体外高糖培养的大鼠雪旺细胞neuritinmRNA及蛋白的表达量。; 晏玲飞李剑波解敏颜莓张红曼徐宽枫许馨予陈恒杨涛陈家伟; 关键词：胰岛素样生长因子1 高糖

Neuritin基因高表达系统构建及转染大鼠雪旺细胞的鉴定被引量：2: 2013年; 目的构建neuritin基因的高表达系统,观察其转染雪旺细胞后neuritin的表达。方法根据大鼠neuritin mRNA序列体外合成编码序列(CDS区),构建到pGH载体,与酶切后的GV208-绿色荧光蛋白(GFP)慢病毒载体片段进行连接、转化、酶切及测序鉴定重组克隆。提取阳性克隆,转染入293T细胞,包装成慢病毒,以此感染大鼠雪旺细胞。将雪旺细胞分为三组:空白对照组(A组)、无意义干扰组(B组)、高表达组(C组)。实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹实验检测细胞neuritin的表达。结果大鼠neuritin正确插入慢病毒载体,C组neuritin mRNA水平显著高于A组、B组(P<0.01)。检测到neuritin蛋白与GFP的融合蛋白。结论成功构建neuritin慢病毒高表达系统;其转染的雪旺细胞neuritin表达升高。; 解敏李剑波晏玲飞颜莓徐宽枫许馨予陈恒杨涛陈家伟; 关键词：雪旺细胞

神经素对糖尿病大鼠雪旺细胞凋亡的影响: 2016年; 目的探讨神经素(neuritin)对糖尿病大鼠雪旺细胞凋亡的影响。方法 5只SD大鼠腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病模型,另选5只SD大鼠为正常对照,测定大鼠坐骨神经传导速度(MNCV)。从大鼠坐骨神经提取雪旺细胞,分为高糖实验组(A组)、正糖对照组(B组)和高渗甘露醇对照组(C组)。采用实时定量PCR检测雪旺细胞中神经素mRNA表达,流式细胞术检测雪旺细胞的凋亡情况。结果糖尿病大鼠MNCV慢于正常大鼠[(24.40±7.16)m/s vs.(35.60±6.27)m/s](P<0.05)。与B组和C组相比,A组雪旺细胞中神经素mRNA表达降低,而细胞凋亡率增加(P<0.05)。经外源性神经素0、1和100ng/ml处理后,A组雪旺细胞凋亡率呈剂量依赖地下降(P<0.05)。结论糖尿病外周神经病变状态下,雪旺细胞神经素表达降低、凋亡增加,而外源性神经素可抑制雪旺细胞凋亡。; 奚春红李剑波陆鹤张莹端王玉成徐宽枫许馨予陈恒杨涛; 关键词：雪旺细胞糖尿病

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江苏省基础研究计划(BK2009441)