中国疾病预防控制中心青年科研基金(2010A101)
- 作品数：3 被引量：9H指数：2
- 相关作者：郝彦玲葛向阳刘建东宋伟任莉更多>>
- 相关机构：中国疾病预防控制中心潍坊医学院广西医科大学更多>>
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- HIV-1gp140蛋白不同聚合体的纯化
- 2016年
- 目的对HIV-1 CN54膜蛋白gp140的不同聚合体进行纯化。方法将在哺乳动物细胞Free Style 293F中表达的gp140蛋白经过糖基化亲和层析、阴离子交换层析和凝胶排阻层析3种纯化方法进行分离,并对该纯化方法进行优化。采用ELISA方法检测不同结构抗原与广谱中和抗体的特异性反应。结果选择lentil lectin填料进行糖基化亲和层析,纯化的gp140蛋白为4.56 mg/L,得率为89.9%;选择弱阴离子填料DEAE用于阴离子交换层析,纯化的gp140蛋白为3.87 mg/L,得率为84.8%;凝胶排阻层析纯化获得了gp140蛋白的多聚体、三聚体+二聚体以及单体3种结构。不同结构的gp140蛋白可与CD4结合位点的广谱中和抗体VRC01以及结构依赖性的V3区特异性广谱中和抗体反应,具有较好的特异性,且不同聚合体在V3区结构依赖性抗体2G12的结合抗体反应上会存在一定差异。结论成功建立了HIV-1 gp140蛋白不同聚合体纯化的方法,该方法对于其他相似蛋白的纯化具有参考作用;不同结构的gp140蛋白的分离为进一步研究其免疫原性奠定了基础。
- 刘建东何彦平鞠斌孙红岩宋伟葛向阳任莉刘颖邵一鸣郝彦玲
- 关键词：HIV纯化
- HIV-1 gp140蛋白疫苗的设计及其免疫原性研究被引量：5
- 2016年
- 目的 设计HIV-1 gp140蛋白疫苗并进行免疫原性初步研究.方法 构建包含不同信号肽的gp140蛋白表达克隆,对表达效率和信号肽切割效率进行比较筛选,同时对不同长度C末端的gp140进行比较,最终获得优化的HIV-1 gp140免疫原.采用不同的免疫方式免疫豚鼠,通过特异性结合抗体检测和中和抗体检测进行免疫效果评价.结果 设计的信号肽具有较好的分泌、切割效率,重组HIV-1 gp140抗原获得良好的表达.重组蛋白疫苗单独免疫就能诱导很强的结合抗体和中和抗体反应,反应强度高于重组DNA疫苗以及痘苗病毒载体疫苗的联合免疫.不同C末端长度的gp140蛋白免疫效果没有显著的差异,但长C末端的gp140蛋白免疫效果稍好.结论 优化设计了HIV-1 gp140蛋白疫苗,设计的重组疫苗获得较好的免疫效果.
- 宋伟刘建东葛向阳任莉邵一鸣郝彦玲
- HIV-1 DNA疫苗的免疫效价及其与免疫剂量的相关性被引量：4
- 2012年
- 目的研究HIV-1 DNA疫苗的免疫效价及不同剂量HIV-1 DNA疫苗对小鼠诱导免疫反应的影响。方法将80只BALB/c小鼠随机分为8组,每组10只,分别为对照组(pDRVI1.0空载体,100μg)、DNA疫苗pENV 3.125、6.25、12.5、25、50、100和200μg组,经小鼠胫骨前肌注射,100μl/只,每隔2周免疫1次,共3次。采用ELISA法检测小鼠血清抗体反应,并计算抗体阳转率;ELISPOT法检测小鼠T细胞免疫反应,并计算阳转率。结果高剂量组抗体反应仅25μg与100μg组之间差异有统计学意义(P<0.05),其他高剂量组间及低剂量各组间差异均无统计学意义(P>0.05),而各疫苗组抗体阳转率总体之间差异有统计学意义(P<0.01)。高剂量组细胞免疫反应强度之间差异无统计学意义(P>0.05),且比低剂量组更趋稳定。DNA疫苗诱导的抗体和细胞免疫反应均随免疫剂量的增加而增加,且呈正相关。当疫苗剂量达到100μg时,均达最高反应强度。结论 HIV-1 DNA疫苗25μg免疫剂量对BALB/c小鼠可能是适当的免疫剂量。在选择临床或临床前试验免疫剂量时,使用统计学无差异的低剂量可能免疫效果更好。
- 郝彦玲李平何彦平孙红岩傅晶晶邵一鸣
- 关键词：HIV-1疫苗DNA免疫效价免疫剂量
