国家自然科学基金(81270963)
- 作品数：40 被引量：154H指数：7
- 相关作者：陈克明周建马小妮高玉海石文贵更多>>
- 相关机构：兰州军区兰州总医院兰州理工大学中国人民解放军更多>>
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- 淫羊藿苷促成骨细胞分化成熟主要不依赖其雌激素活性被引量：13
- 2014年
- 目的:利用人乳腺癌细胞MCF-7检测淫羊藿苷(icariin,I)与染料木黄酮(genistein,G)雌激素样活性的大小。方法:MCF-7细胞系采用无酚红DMEM培养基(含5%活性炭吸附处理血清CS-FBS)培养48 h后,利用CCK-8试剂盒检测不同浓度的I和G对体外培养MCF-7增殖的影响,筛选出最佳药物浓度;以最佳浓度的I和G处理细胞12,24,36,48 h后提取总RNA,Real-time RT-PCR检测I和G对MCF-7细胞雌激素受体α(ERα)、雌激素受体β(ERβ)、雌激素调节蛋白(PS2)、孕激素受体(PR)mRNA表达水平的影响;以最佳浓度的I和G处理MCF-7细胞48 h后,Western blot检测G和I对MCF-7细胞ERα,ERβ,PS2,PR蛋白表达量的影响。结果:I和G均能显著促进MCF-7的增殖,其中最佳的I和G作用浓度为10μmol·L-1,并且在该浓度下G促MCF-7增殖的能力明显高于I;I和G作用MCF-7细胞24,36 h后,10μmol·L-1的I和G均能显著促进ERα,ERβ,PS2,PR mRNA表达水平,其中G促进ERα,PS2,PR mRNA表达的能力明显强于I,对于ERβmRNA的表达两者没有显著性差异;Western blot检测结果表明,10μmol·L-1的I和G均能促进ERα,ERβ,PS2,PR蛋白的表达,其中G促进ERα,PS2,PR蛋白表达的能力明显强于I,对于ERβ蛋白的表达两者没有显著性差异。结论:10μmol·L-1的G和I都具有较强的雌激素活性,但是该浓度下G的雌激素活性明显高于I,而本课题组前期研究表明,I在促进成骨细胞分化成熟及生物矿化的药理学活性明显强于G,因此I促成骨细胞分化成熟主要不是依赖其雌激素活性。
- 石文贵马小妮谢艳芳周建陈克明
- 关键词：淫羊藿苷染料木黄酮MCF-7
- 正弦电磁场促进成骨细胞成熟分化依赖于BMP-Smad信号通路被引量：3
- 2016年
- 正弦电磁场(SEMFs)能够显著促进大鼠成骨细胞(ROBs)成熟分化,但其作用机制未知。本研究旨在阐明BMP-Smad信号通路对SEMFs促进ROBs成熟分化的影响。取新生SD大鼠颅骨,多次酶消化体外分离培养得到ROBs传代培养后,利用50 Hz 1.8 m Ts SEMFs处理0,5,15,30和60min,Western印迹检测BMP-2表达和Smad1/5/8磷酸化水平,免疫荧光染色检测P-Smad1/5/8核转位。加入BMP-Smad信号通路的阻断剂noggin后,50 Hz 1.8 m Ts SEMFs分别处理3 d和6 d(2h/d)后,检测胞内碱性磷酸酶(ALP)活性,磁场处理2 d后(2 h/d),real-time PCR和Western印迹分别检测Ⅰ型胶原(collagen1)和成骨相关转录因子RUNX-2基因和蛋白质表达量。结果发现,50Hz 1.8 m Ts SEMFs处理ROBs后,BMP-2的表达量显著增加,胞内Smad1/5/8快速磷酸化,而对非磷酸化的Smad1/5/8表达无影响。同时,SEMFs处理30 min后引起P-Smad1/5/8发生核转位。50Hz 1.8m Ts SEMFs能够显著促进ALP活性增加,促进成骨相关因子collagen1和RUNX-2基因和蛋白质表达。加入BMP-Smad信号通路的阻断剂noggin后,SEMFs促进ALP活性增加,collagen1和RUNX-2基因和蛋白质表达水平被显著抑制。上述结果说明,50 Hz 1.8 m Ts SEMFs促进成骨细胞成骨性分化依赖于BMP-Smad信号通路。
- 谢艳芳石文贵周建高玉海王鸣刚陈克明
- 关键词：成骨细胞正弦电磁场
- 不同强度50Hz脉冲电磁场促进大鼠颅骨成骨细胞矿化成熟最佳参数的筛选被引量：8
- 2014年
- 为研究不同强度脉冲电磁场（pulse electromagnetic fields,PEMFs）对大鼠颅骨成骨细胞（rat skull osteoblasts,OB）增殖及成熟矿化的影响,将大鼠颅骨成骨细胞随机分为7组.检测大鼠颅骨成骨细胞的增殖,细胞内碱性磷酸酶（ALP）活性变化,细胞沉积钙盐的情况,组织化学染色以及成骨细胞内标志性分子表达量的改变.结果显示,0.6 mT组促细胞增殖作用最强（P〈0.01）;0.6mT、1.8 mT、3.0 mT和3.6 mT均能提高ALP活性,其中0.6 mT ALP活性最高（P〈0.01）;在磁场处理4-12 d时细胞沉积钙盐逐渐增加,6种强度的脉冲电磁场均能促进钙盐沉积,尤以0.6 mT水平最高;ALP染色、茜素红染色0.6 mT组均显著高于对照组（P〈0.01）;0.6 mT组Bmp-2和Collagen-1 mRNA的表达明显（P〈0.01）高于对照组,磁场处理组Rankl mRNA的表达均比对照组低.0.6 mT 50 Hz脉冲电磁场是促进成骨细胞增殖和矿化成熟的最佳参数,这为采用脉冲电磁场治疗骨质疏松症提供了治疗参数的基础支持.
- 闫娟丽王鸣刚陈克明葛宝丰周建马小妮宋鹏成魁
- 关键词：脉冲电磁场成骨细胞骨质疏松成骨分化
- 不同时间正弦交变电磁场对大鼠骨密度及骨形态计量指标的影响被引量：5
- 2014年
- 目的研究不同时间正弦交变电磁场对SD大鼠骨密度及骨形态计量指标的影响,为临床骨质疏松的预防提供新思路。方法 6周龄健康雌性SD大鼠随机抽样法分为5组:对照组(n=10)、45 min组(n=10)、90 min组(n=10)、180 min组(n=10)和270 min组(n=10)。除对照组外,每天给予各时间组大鼠50 Hz 0.1 m T磁场强度相应时间的磁场干预。8周后采用双能X射线骨密度仪检测全身骨密度、左侧股骨骨密度和椎骨骨密度;分离左侧胫骨及第5腰椎进行骨组织静态和动态的分析。结果与对照组相比,90 min组和180 min组大鼠全身骨密度值差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05),45 min组和270 min组差异均无统计学意义(P均>0.05);90 min组、180 min组、270 min组左侧股骨、椎体骨密度、左侧胫骨、血清生化指标及第5腰椎骨组织静态参数差异均有统计学意义(P均<0.01),45 min组差异无统计学意义(P>0.05);观察双荧光标记,按照距离大小排序为90 min组>180 min组>270 min组>45 min组>对照组。结论 50 Hz 0.1 m T正弦交变电磁场能够有效增加大鼠骨密度,提高大鼠骨形态计量指标,但是不同干预时间产生的效果不同,其中以90 min效果最佳。
- 高玉海甄平周建马小妮闫娟丽李少锋周延峰陈克明
- 关键词：骨密度骨形态计量学
- 淫羊藿苷促进大鼠骨髓基质细胞成骨性分化过程中对p-AKT及eNOS、iNOS表达量的影响被引量：7
- 2013年
- 目的研究淫羊藿苷(Icariin,ICA)促进体外培养大鼠骨髓基质细胞(Bone marrow stromal cells,BMSCs)的成骨性分化机理。方法贴壁分离法培养大鼠骨髓基质细胞并用流式检测细胞纯度。骨髓基质细胞传代至第2代时分别用含有成骨性诱导剂的1×10-5mol/L ICA和LY294002处理24 h后用Real-time RT-PCR检测ALP、eNOS和iNOS的mRNA表达水平,Western blotting检测ALP、p-AKT、eNOS和iNOS的蛋白表达量。结果原代骨髓基质细胞体外培养传代至第2代时纯度可达95%以上。基因和蛋白质检测均显示ICA可极显著的促进碱性磷酸酶(ALP)的表达(P<0.01),PI3K的特异性抑制剂LY294002会抑制ICA对ALP的提高,ICA+LY294002组与CON组的表达差别不明显。p-AKT的蛋白表达变化与ALP相似。ICA可以提高eNOS表达(P<0.01),加抑制剂能使其降低(P<0.01),而iNOS的ICA组与ICA+LY294002组无明显差别。结论 ICA促进BMSCs成骨性分化过程涉及到PI3K/AKT通路,且AKT位于eNOS的上游;eNOS和iNOS共同作用,但iNOS起主要作用。
- 郭晓宇葛宝丰陈克明甄平周建马小妮
- 关键词：大鼠骨髓基质细胞淫羊藿苷
- 低频脉冲电磁场对青年大鼠峰值骨量的影响研究被引量：2
- 2020年
- 目的:比较1 h和1.5 h下低频脉冲电磁场对生长期大鼠骨质量的影响。方法 :选取4周龄30只雄性SPF级SD大鼠,体重(115.8±1.5) g,采用随机数字表法将大鼠分为对照组、1 h组和1.5 h组,每组10只。对照组大鼠在电磁场装置中每天静置1.5 h,1 h组和1.5 h组均使用50 Hz 0.6 mT强度脉冲电磁场每天分别干预大鼠1 h和1.5 h。每2周称量大鼠体重,检测大鼠全身骨密度值,6周后处死大鼠检测右侧股骨和腰椎离体骨密度和生物力学值。ELISA法测定血清骨钙素(osteocalcin,OC)和抗酒石酸酸性磷酸酶5b(tartrate-resistant acid phosphatase 5b,TRACP 5b)浓度。品红-苦味酸染色后观察其右侧胫骨微组织结构,IPP 6.0软件对骨小梁相关参数进行分析。结果:各组不同时间点大鼠体重和脏器指数比较差异无统计学意义。骨密度结果显示:与对照组相比,6周时1.5 h组的全身骨密度、股骨和椎骨离体骨密度显著增加;且1.5 h组股骨和椎骨骨密度高于1 h组。股骨三点弯曲和椎骨压缩试验结果显示:与对照组相比,1.5 h组股骨和椎骨最大载荷值明显增加,且1.5 h组股骨最大载荷值显著高于1 h组,而3组弹性模量值比较差异无统计学意义。血清生化指标结果显示:与对照组相比,1.5 h组大鼠OC水平明显提升,且显著高于1 h组,而各组TRACP 5b值比较差异无统计学意义。骨形态计量学分析显示:与对照组相比,1 h组骨小梁厚度、数目和分离度不具有统计学差异,而1.5 h组骨小梁厚度和骨小梁数目均显著增加,骨小梁分离度显著下降;1.5 h组较1 h组骨小梁厚度和数目也明显增加,分离度减小。结论:50 Hz 0.6 mT低频脉冲电磁场干预大鼠1.5 h可以有效提高青年大鼠峰值骨密度和骨微结构,增强骨生物力学性能,促进大鼠血液中骨形成标记物的浓度,表明脉冲电磁场可作为预防和治疗骨质疏松的良好方法。
- 田永辉李文苑高玉海周建陈克明李雪雁
- 关键词：电磁场骨密度
- 淫羊藿苷促进体外培养骨髓间充质细胞成骨性分化活性强于蛇床子素被引量：5
- 2013年
- 比较研究蛇床子素与淫羊藿苷处理对体外培养的大鼠骨髓间充质细胞(rat bone marrow stromal cell,rBMSC)成骨性分化的影响.从体外分离培养的大鼠骨髓间充质细胞,筛选出最佳的蛇床子素和淫羊藿苷处理的浓度为1×10-5mol/L,然后用最佳的浓度对体外培养的大鼠骨髓间充质细胞进行药物干预;在药物干预后的第3、6、9、12和15 d后测定碱性磷酸酶活性(alkalinephos phatase,ALP)和钙含量;第12 d进行钙化结节茜素红染色;第12 h、24 h、48 h、72 h和96 h对OXS、Runx-2、骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein,BMP-2)和collagen-I mRNA表达水平进行real-time RT-PCR检测.结果显示,浓度为1×10-5mol/L蛇床子素和淫羊藿苷干预均可提高体外培养的骨髓间充质细胞ALP活性,增加Ca含量,提高Runx、OXS、BMP-2和collagen-1 mRNA的表达水平.同时,淫羊藿苷在促进体外培养骨髓间充质细胞成骨性分化活性强于蛇床子素.
- 周建葛宝丰陈克明马小妮郭晓宇成魁高玉海闫娟丽石文贵
- 关键词：淫羊藿苷蛇床子素成骨性分化
- 口服淫羊藿苷可提高大鼠的峰值骨密度和骨质量被引量：20
- 2014年
- 目的研究口服淫羊藿苷(Icariin,ICA)是否能提高大鼠的峰值骨密度和骨质量,起到预防骨质疏松症的作用。方法 1月龄雌性健康SD大鼠随机分为两组,每组12只。服药组每日灌服25 mg/kg淫羊藿苷,对照组(CON)灌服给予等体积蒸馏水。每周监测大鼠体重。每月检测实验鼠的骨密度,3个月后处死所有大鼠。取血测血清骨钙素(OC)和抗酒石酸性磷酸酶5b(TRACP 5b)的含量。取双侧股骨和胫骨分别进行骨密度检测、μCT扫描和生物力学评价。剥离心、肝、胃、肾、肾上腺和子宫后称重,计算器官指数,并做常规病理学检测。结果两组大鼠的体重始终无显著性差异(P>0.05);各脏器的器官指数均无明显差异,病理学观察未见异常改变。第1、第2月的全身骨密度无明显差别(P>0.05),但3个月后,ICA组显著高于CON组,股骨骨密度存在相同趋势(P<0.05);ICA组的血清OC水平升高,而TRACP 5b含量下降(P<0.05);μCT检测结果是:ICA组的骨体积百分率、骨小梁厚度和骨小梁数量均高于CON组,但骨小梁分离度和模型系数显著低于CON组(P<0.05);股骨最大载荷、弹性模量和屈服强度均是ICA组显著高于CON组(P<0.05)。结论口服淫羊藿苷可通过抑制骨吸收而促进骨形成,提高大鼠的峰值骨密度和骨质量,对预防各种原因引起的骨质疏松及骨质疏松性骨折具有十分重要的意义。
- 成魁葛宝丰甄平陈克明马小妮周建宋鹏马慧萍
- 关键词：淫羊藿苷骨密度骨质量生物力学
- 淫羊藿苷与金雀异黄酮对大鼠峰值骨量的影响被引量：4
- 2013年
- 目的研究淫羊藿苷(ICA)是否比金雀异黄酮(GEN)能更有效地提高大鼠峰值骨密度与骨质量,探寻更有效地预防骨质疏松发生的药物。方法 1月龄健康SD雌性大鼠随机抽样法分为3组:对照组(n=12)、淫羊藿苷组[n=12,25 mg/(kg·d)灌胃]和金雀异黄酮组[n=12,10 mg/(kg·d)灌胃]。每周称量体重,每月测量全身骨密度,3个月后处死所有大鼠,取血测定血清骨钙素、抗酒石酸性磷酸酶5b、Ⅰ型前胶原氨基端前肽和Ⅰ型胶原C末端肽的含量,取双侧股骨与胫骨分别进行骨密度检测、显微CT扫描、骨形态计量和生物力学测量。剥离心、肝、脾、肺、胃、肾、肾上腺和子宫后称重,计算器官指数,并做常规病理学检测。结果大鼠体重3组间差异无统计学意义(P>0.05);各器官指数差异均无统计学意义(P>0.05),病理学观察无异常改变。第1、2个月大鼠全身骨密度差异无统计学意义(P>0.05),但3个月后,ICA组显著高于GEN组与对照组(P<0.05),股骨骨密度与全身骨密度存在相同变化趋势(P<0.05);ICA组血清骨钙素水平高于对照组,而抗酒石酸性磷酸酶5b含量较GEN组和对照组显著降低(P<0.05);ICA组的骨体积百分率、骨小梁厚度和骨小梁数量均高于对照组,但骨小梁分离度和模型系数显著低于对照组(P<0.05),ICA组与GEN组比较差异无统计学意义(P>0.05);ICA组与GEN组的股骨最大载荷、弹性模量和屈服强度均显著高于对照组(P<0.05),ICA组与GEN组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论口服淫羊藿苷比金雀异黄酮更强地抑制骨吸收和促进骨形成,从而提高大鼠的峰值骨密度和骨质量,具有比金雀异黄酮更强的药效。
- 成魁葛宝丰甄平陈克明马小妮周建宋鹏马慧萍
- 关键词：淫羊藿苷金雀异黄酮骨密度骨质量
- 不同类型低频电磁场抵抗失重引起的骨流失被引量：6
- 2019年
- 目的研究和比较50 Hz 0. 6 m T低频脉冲电磁场(PEMFs)和50 Hz 1. 8 m T正弦交变电磁场(SEMFs)防止尾吊大鼠骨量下降的效果,为失重引起的骨流失防治提供理论参考和科学依据。方法采用尾吊模型大鼠在地面模拟微重力,将40只SD大鼠随机分为对照组、后肢悬吊(HLS)组、HLS+PEMFs组和HLS+SEMFs组4组,每组10只。HLS+PEMFs组和HLS+SEMFs组分别采用50 Hz 0. 6 m T的PEMFs和50 Hz 1. 8 m T的SEMFs两种电磁场进行治疗,每天干预90 min,4周后处死大鼠。采用双能X射线吸收测定法检测大鼠股骨和椎骨骨密度(BMD),AG-IS型生物力学仪检测生物力学强度,ELISA法检测血清骨钙素(OC)、抗酒石酸酸性磷酸酶5b (Tracp 5b)浓度、甲状旁腺激素(PTH)和环磷酸腺苷(cAMP)的含量,Micro-CT和HE染色观察骨组织微结构。结果 HLS组股骨(P=0. 000)和椎骨(P=0. 001)的BMD显著低于对照组; HLS+PEMFs组股骨(P=0. 001)和椎骨(P=0. 039)的BMD显著高于HLS组; HLS+SEMFs组股骨的BMD明显高于HLS组(P=0. 003),但椎骨的BMD与HLS组差异无统计学意义(P=0. 130); HLS+PEMFs组和HLS+SEMFs组股骨(P=0. 818)和椎骨(P=0. 614)的BMD差异均无统计学意义。HLS组股骨和椎骨的最大载荷(P=0. 000,P=0. 009)和弹性模量(P=0. 015,P=0. 009)显著低于对照组; HLS+PEMFs组股骨(P=0. 038)和椎骨(P=0. 087)的最大载荷显著高于HLS组,但弹性模量与HLS组相比差异无统计学意义(P=0. 324,P=0. 091); HLS+SEMFs组股骨和椎骨的最大值载荷(P=0. 190,P=0. 222)和弹性模量(P=0. 512,P=0. 437)与HLS组相比差异均无统计学意义。HLS+PEMFs组和HLS+SEMFs组股骨(P=0. 585,P=0. 948)和椎骨(P=0. 668,P=0. 349)的最大载荷和弹性模量差异均无统计学意义。HLS组的血清OC水平显著低于对照组(P=0. 000),HLS+PEMFs组(P=0. 000)和HLS+SEMFs组(P=0. 006)的OC水平显著高于HLS组。HLS组的血清Tracp 5b浓度显著高于对照组(P=0. 011),HLS+PEMFs组(P=0. 459)和HLS+SEMFs组(P=0. 469)与对照组相比差异无统计学意义; HL
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- 关键词：低频脉冲电磁场微重力尾吊大鼠骨形成骨重建
