广东省自然科学基金(9151008901000058)
- 作品数：4 被引量：18H指数：4
- 相关作者：来伟刘璐褚忠华李守峰伍衡更多>>
- 相关机构：中山大学孙逸仙纪念医院中山大学附属第三医院更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金广东省社会发展科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 蛋白质组学方法分析PRL-3功能相关蛋白被引量：6
- 2011年
- 目的蛋白质组学方法分析转染肝再生磷酸酶-3（PRL-3）后结肠癌细胞kVo的蛋白表达改变。方法构建绿色荧光蛋白载体PAcGFP—C3-PRL-3并转染至结肠癌细胞LoVo中，获得稳定表达GFP—PRL-3的结肠癌细胞LoVo—PRL-3。Westernblot检测转染后细胞的PRL-3表达。采用双向凝胶电泳（2-DE）分离LoVo—PRL-3细胞及转染空载体PAcGFP—C3的LoVo-Control细胞总蛋白，从中选取差异表达蛋白质点，通过基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱（MALDI-TOF-TOF-MS）鉴定差异表达的蛋白质。结果Westernblot结果显示PRL-3在LoVo—PRL-3细胞中高表达，而未检测到在LoVo—Control细胞中表达。通过双向凝胶电泳图谱分析发现20个差异蛋白质斑点，质谱成功鉴定出17种蛋白。与LoVo—Control细胞比较，10种蛋白在LoVo-PRL-3细胞中高表达，而7种蛋白在 LoVo—PRL-3细胞中表达降低。结论成功鉴定出PRL-3功能相关蛋白，为进一步研究PRL-3促进结直肠癌转移机制奠定基础。
- 关玉峰刘璐伍衡来伟李守峰褚忠华
- 关键词：结肠癌蛋白质组学肝再生磷酸酶-3
- Fractalkine对类风湿关节炎患者成纤维样滑膜细胞中NF-κB活化及内源性fractalkine mRNA表达的影响被引量：5
- 2011年
- 目的:观察Fractalkine(FKN)对类风湿关节炎(RA)患者成纤维样滑膜细胞(FLS)核转录因子κB(NF-κB)活化以及内源性FKN mRNA表达的影响。方法:通过组织块法培养RA-FLS。在RA-FLS中加入100μg/L FKN,分别作用0 h、1 h及2 h,用Western blotting检测RA-FLS胞浆及胞核中NF-κB p65蛋白表达量变化以明确NF-κB的活化情况;加入100μg/L重组人FKN分别作用0 h、12 h、18 h后,用RT-PCR检测FKN mRNA表达的变化。结果:重组人FKN刺激1 h后,RA-FLS胞浆中NF-κB p65蛋白水平明显低于无FKN刺激的对照组(P<0.05);FKN刺激后2 h,细胞核中NF-κB p65蛋白水平较对照组明显升高(P<0.05)。100μg/L重组人FKN刺激RA-FLS,呈时间依赖方式诱导内源性FKN mRNA表达。FKN刺激RA-FLS18 h,细胞中FKN mRNA的表达水平明显升高(P<0.05)。结论:外源FKN可刺激RA-FLS内源性的FKN mRNA表达上升,提示RA-FLS中可能存在FKN的正反馈现象。FKN对NF-κB有活化作用,可能对RA患者关节中炎症的启动、血管生成和骨质破坏有重要作用。
- 郭兴华潘云峰宋泽蓉王昆古洁若
- 关键词：FRACTALKINE成纤维样滑膜细胞NF-ΚB
- 特异性小干扰RNA靶向沉默KCNN4基因对LoVo细胞生物学影响被引量：4
- 2011年
- 目的观察小分子干扰RNA（siRNA）对结肠癌细胞LoVo的KCNN4基因表达及其生物学行为的影响。方法将实验分别空白对照组和实验转染组进行实验。合成针对KCNN4基因的特异性siRNA并转染至结肠癌细胞LoVo中，实时定量逆转录．聚合酶链式反应以及Westernblot分别检测KCNN4mRNA以及蛋白的变化，CCK-8法检测LoVo细胞增殖的变化以及Transwell检测LoVo细胞增殖和侵袭的能力的变化。结果成功合成KCNN4-siRNA并转染人LoVo细胞中。RT—PCR以及Western blot结果提示与对照组比较，KCNN4-siRNA可以明显抑制KCNN4 mRNA以及蛋白的表达，抑制率分别为72．0％、49．6％（P〈0．05）。同时KCNN4-siRNA可以明显抑制LoVo细胞的增殖（P〈0．05）。另外KCNN4-siRNA可以明显抑制LoVo细胞的迁移能力（45．23±3．52比66．42±1．47）和侵袭能力（28．13±1．64比42．78±2．33）。结论KCNN4-siRNA可以有效抑制结肠癌LoVo细胞KCNN4基因的表达，从而有效的抑制肿瘤的增殖、迁移和侵袭。
- 褚忠华林显敢刘璐伍衡来伟
- 关键词：结肠癌小分子干扰RNA
- 受翻译调节的肿瘤蛋白在PRL-3促进结肠癌转移中的作用被引量：5
- 2011年
- 目的:研究受翻译调节的肿瘤蛋白(TCTP)在肝再生磷酸酶-3(PRL-3)促进结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭中的作用。方法:构建载体pAcGFP-C3-PRL-3及pAcGFP-C3并分别转染至结肠癌LoVo细胞中,获得稳定表达PRL-3的LoVo-PRL-3细胞及对照细胞LoVo-control。Western blotting及real-time PCR检测2种细胞PRL-3及TCTP表达。设计并合成特异性干扰TCTP mRNA的siRNA序列(TCTP-siRNA)和阴性对照序列(control-siRNA),并将siRNA瞬时转染至LoVo-PRL-3细胞。在转染siRNA后24 h、48 h和72 h,Western blot-ting及real-time PCR检测LoVo-PRL-3细胞TCTP表达。CCK8-8和Transwell方法检测LoVo-control、LoVo-PRL-3及转染TCTP-siRNA和转染control-siRNA的LoVo-PRL-3细胞间增殖、迁移和侵袭能力差异。结果:转染PRL-3可以显著上调LoVo细胞TCTP mRNA和蛋白的表达(P<0.05)。TCTP-siRNA在转染后的24 h、48h和72 h可以有效抑制LoVo-PRL-3细胞TCTP mRNA表达(P<0.01),同样TCTP蛋白在转染后的48 h和72 h也显著受到抑制(P<0.01)。转染PRL-3能显著促进LoVo细胞增殖、迁移和侵袭能力(P<0.05),然而siRNA干扰抑制上调的TCTP表达后又能显著抑制LoVo-PRL-3细胞增殖、迁移和侵袭能力(P<0.05)。结论:PRL-3通过上调TCTP表达促进结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭。用siRNA靶向抑制TCTP表达可能是预防和治疗结肠癌转移的有效手段。
- 褚忠华刘璐来伟李守峰曾育杰关玉峰
- 关键词：肝再生磷酸酶-3结肠肿瘤肿瘤转移
