国家教育部博士点基金(A032003149)
- 作品数：5 被引量：17H指数：3
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- Notch1蛋白在胚胎干细胞向神经细胞诱导分化过程中的表达及意义被引量：5
- 2007年
- 目的探讨胚胎干细胞(ESC)向神经细胞(NC)定向诱导分化过程中跨膜信号分子Notch1蛋白的表达情况及意义。方法体外培养ESC,在培养基内添加5×10-7mol/L维甲酸(RA)进行诱导分化。分别取ESC及RA诱导分化1、5、9d的细胞,倒置相差显微镜观察细胞形态变化,免疫细胞化学、Western Blot法及流式细胞术检测各相应时间点Notch1蛋白的表达。结果随诱导时间延长,ESC分化出的成熟神经元标志微管相关蛋白(MAP-2)阳性神经细胞逐渐增多,并形成较为单一密集的神经网络结构。ESC阶段Notch1蛋白为高水平表达,诱导分化后Notch1蛋白表达随时间延长逐渐下降。结论在ESC向NC的诱导分化过程中,Notch1信号逐渐关闭;Notch1可能对ESC向NC的特异性分化起重要作用。
- 肖迎王琪鲁凤菊唐仕波黄冰林少芬
- 关键词：干细胞细胞分化NOTCH
- Notch1蛋白在胚胎干细胞向神经细胞诱导分化过程中的表达(英文)被引量：4
- 2008年
- 背景:胚胎干细胞是体内各种成熟细胞的"种子"细胞,是神经移植和发育基因功能研究的有利工具。Notch1信号是多种神经细胞有序分化的关键性调控通路,目前对其在胚胎干细胞诱导分化过程中的动态表达尚无报道。目的:探讨胚胎干细胞向神经细胞定向诱导分化过程中,跨膜信号分子Notch1蛋白的表达。设计、时间及地点:细胞观察,于2003-10/2004-10在中山大学中山眼科中心完成。材料:中山大学实验动物中心自建BALB/C小鼠胚胎干细胞Ⅵ株,具备XY染色体,正常核型比例80%以上,由中山大学中山眼科中心黄冰教授惠赠。方法:胚胎干细胞复苏后,加入含20%胎牛血清、106 IU/L小鼠白血病抑制因子的高糖DMEM细胞培养基,置于37℃﹑5%CO2培养箱中,两三天常规消化传代。向传至11代的胚胎干细胞中加入含20%胎牛血清、5×10-7 mol/L维甲酸的高糖DMEM诱导分化培养基,设立诱导1,5,9 d 3个观察时间点。主要观察指标:倒置相差显微镜观察细胞形态变化。免疫荧光化学检测成熟神经元标志性抗原MAP-2的表达。免疫细胞化学、Western Blot法及流式细胞术检测Notch1蛋白的表达。结果:胚胎干细胞呈克隆样生长,至诱导第9天大部分克隆周围为单一密集的神经网络。随着诱导时间延长,胚胎干细胞分化出的MAP-2阳性神经细胞数逐渐增多。胚胎干细胞克隆内的细胞几乎均呈Notch1强阳性或阳性表达,诱导分化后Notch1蛋白的表达随时间延长而逐渐降低(P<0.01)。结论:在胚胎干细胞向神经细胞的诱导分化过程中,Notch1信号逐渐关闭,提示Notch1可能对胚胎干细胞向神经细胞的特异性分化起重要作用。
- 肖迎王琪唐仕波黄冰林少芬
- 关键词：胚胎干细胞细胞分化信号转导NOTCH
- 维甲酸对胚胎干细胞分化过程中Notch1表达的影响被引量：2
- 2005年
- 目的探讨维甲酸(RA)诱导胚胎干细胞(ESC)向神经细胞定向分化及自由分化过程中,Notch1蛋白和mRNA的时空表达以及RA对Notch1表达的影响。方法实验分两组:实验组用RA对ESC进行神经细胞定向诱导分化,对照组ESC进行自由分化。各组分别取ESC分化1、3、5、7、9d的细胞,倒置显微镜观察形态变化,免疫荧光观察MAP2表达,免疫细胞化学、流式细胞术及RTPCR检测Notch1蛋白和mRNA表达。结果实验组诱导分化的神经元逐渐增多并形成神经网络。对照组以圆形上皮样分化细胞为主。ESCNotch1蛋白及mRNA均为高表达,诱导分化或自由分化后蛋白表达降低(P<0.05)。实验组Notch1mRNA水平下降(P<0.05),对照组则无明显变化(P>0.05)。分化3d后,实验组各时间点Notch1的表达水平均低于对照组(P<0.05)。结论ESC分化时伴有Notch1信号的关闭。Notch1可能对ESC向神经元的特异性分化起重要作用。促进Notch1的下调可能是RA诱导分化的机制之一。
- 肖迎唐仕波王琪孟晶李斌林少芬
- 关键词：干细胞细胞分化NOTCH维甲酸
- 全神经球贴壁培养法体外长期扩增视网膜前体细胞被引量：1
- 2006年
- 目的:探寻一种既高效又能连续体外扩增视网膜前体细胞(RetinalProgenitorCell,RPC)的培养方法。方法:小鼠胚胎视网膜细胞采取神经球贴壁培养或直接贴壁培养法。神经球贴壁培养时,先经悬浮培养生成富含前体细胞的神经球,然后将低速离心分离出的神经球接种到Poly-D-Lysine包被的培养瓶,在前体细胞培养液中(含FGF-2、EGF和LIF)贴壁培养,头24h在培养液中添加10%的胎牛血清。直接贴壁培养法是将细胞悬液直接接种到预先包被Poly-D-Lysine的培养瓶。免疫组化和FACS分析神经球贴壁培养细胞的干细胞特性和分化能力,并与直接贴壁培养法得到的细胞进行比较。结果:神经球接种到预先包被Poly-D-Lysine的培养瓶后贴附到培养瓶底,逐渐形成贴壁生长的单层细胞。该法能够在体外长期扩增视网膜前体细胞,3个月内细胞能够传代10次以上。在RA诱导分化时,能够生成成熟视网膜细胞,表达视网膜细胞特异性标记。FACS分析和免疫组化染色显示神经球贴壁培养所得细胞在未分化时Nestin阳性率(92%)细胞率以及分化为成熟视网膜细胞的比率(53.7%),均高于直接贴壁培养法获得的细胞。结论:神经球贴壁培养法能够在体外长期大量扩增视网膜前体细胞,能较好地保持干细胞特性,并容易分化为成熟的视网膜细胞,较直接贴壁培养具有较大的优越性。
- 赖平红唐仕波林少芬朱晓波高艺孟晶
- 关键词：视网膜前体细胞细胞培养细胞扩增
- 胚胎干细胞直接向神经细胞诱导分化的实验研究被引量：5
- 2006年
- 目的:探讨不经拟胚体(EB)培养阶段,应用维甲酸(RA)在体外直接将胚胎干细胞(ESC)诱导分化为神经细胞的可行性和效果。方法:ESC消化后分为A、B、C、D 4组,A、B组进行EB培养后,A组用RA进行诱导分化,B组不添加RA使其自由分化,C、D组不经EB培养阶段,C组直接用RA诱导分化,D组自由分化。倒置相差显微镜及扫描电镜观察细胞形态变化,免疫细胞化学及流式细胞术观察各组第9 d分化细胞微管相关蛋白-2(MAP-2)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达情况。结果:A、C组诱导分化的神经样细胞逐渐增多,并形成密集的神经网络样结构,9 d时大部分为MAP-2阳性细胞,MAP-2阳性率显著高于B、D组(P<0.01)。B、D组以圆形上皮样分化细胞为主,9 d时绝大部分为GFAP阳性细胞,GFAP阳性率显著高于A、C组(P<0.01)。A、C组之间或B、D组之间的MAP-2及GFAP阳性率均无显著差异(P>0.05)。结论:在体外,可不经EB阶段,应用RA直接将ESC诱导分化为神经细胞,改良的ESC诱导分化方法与传统的RA4-/4+方法效果相同,可取代传统方法。
- 肖迎唐仕波黄冰王琪孟晶林少芬
- 关键词：干细胞细胞分化细胞培养神经元
