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北京市教委科技发展计划(2002KJ085)
北京市教委科技发展计划(2002KJ085)
- 作品数：6 被引量：21H指数：4
- 相关作者：赵文明李蕴刘振龙张新梅马丽平更多>>
- 相关机构：首都医科大学更多>>
- 发文基金：北京市教委科技发展计划北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 大鼠TCR Vβ8.2基因真核表达质粒的构建及表达被引量：4
- 2006年
- 目的:构建含大鼠TCRVβ8.2基因的重组真核表达质粒,并检测其在体内外的表达。方法:以RTPCR法分离Lewis大鼠脾淋巴细胞中的TCRVβ8.2基因片段,插入到真核表达载体pTARGET中,构建重组表达载体pTARGETTCRVβ8.2,并转化E.coliJM109,经蓝白斑筛选阳性菌落,进行菌落PCR和测序鉴定。将重组质粒以肌注法免疫BALB/c小鼠,采集注射部位股四头肌处的肌肉,用RTPCR及免疫组化染色法检测TCRVβ8.2基因在注射部位的转录和表达。通过脂质体介导,将重组质粒导入COS7细胞中进行瞬时表达,用免疫细胞化学染色法检测靶基因在真核细胞内的表达。结果:测序鉴定证实,TCRVβ8.2基因已被正确插入到pTARGET载体中,并检测到在肌肉组织和COS7细胞内重组蛋白的表达。结论:成功地构建重组真核表达质粒pTARGETTCRVβ8.2,并在体内体外均可检测到其转录和表达,为进一步进行TCRVβDNA疫苗的研究奠定了基础。
- 李蕴马丽平赵文明刘振龙
- 关键词：胶原诱导性关节炎自身反应性T细胞TCRVΒ基因
- T细胞受体DNA疫苗对胶原诱导性关节炎大鼠保护性作用的研究被引量：2
- 2007年
- 目的纯化制备含有编码T细胞受体（TCR）Vβ5．2和TCRVβ8．2基因片段的DNA疫苗，研究其对胶原诱导性关节炎（CIA）的保护性作用。方法大量纯化制备重组DNA疫苗pTargeT—TCR Vβ5．2、pTargeT-TCR Vβ8．2和空质粒pTargeT，观察重组DNA疫苗对CIA的保护效果，包括关节炎指数评分、大鼠后肢足关节的病理学分析、用Eli—spot法观察脾细胞分泌的干扰素（IFN）-γ和白细胞介素（IL）-4水平的改变、用流式细胞术分析外周血CD4^＋t细胞和CD8^＋T细胞亚群及其比值的变化、用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定血清中抗Ⅱ型胶原（CⅡ）抗体水平的改变等。用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）及免疫组织化学染色法检测目的基因的转录和表达。结果重组TCRDNA疫苗pTargeT-TCRv135．2和pTargeT—TCRV138．2对CIA大鼠有较好的保护性作用，关节炎指数明显下降（P〈．05），炎性细胞因子IFN-γ水平（P〈0．05）、CD4^＋／CD8^＋比值（P〈0．05）和抗CⅡ抗体水平（P〈0．01）降低，而抑制性细胞因子IL-4水平升高（P〈0．05），病理改变亦较CIA对照组轻。且两种重组质粒联合治疗较单种重组质粒的效果更好。并且在注射部位的肌肉组织内检测到重组蛋白的转录和表达。结论重组表达载体pTargeT-TCR V β5．2和pTargeT-TCR Vβ8．2能明显减轻CIA大鼠的关节炎症状和体征，且二者联合应用效果更佳。
- 葛平玲李蕴赵文明刘振龙肖婧何文晓
- 类风湿性关节炎免疫治疗的研究进展被引量：7
- 2004年
- 张新梅赵文明
- 关键词：类风湿性关节炎免疫治疗单克隆抗体基因疗法
- T淋巴细胞与胶原诱导性关节炎被引量：4
- 2004年
- 胶原诱导性关节炎是应用较广泛的人类风湿性关节炎动物模型 ,二者在发病机制及病理学改变上极为相似。近年来研究证实激活的某些T细胞在胶原诱导性关节炎的发病过程中起着重要作用 ,尤其在疾病的起始阶段 。
- 张新梅赵文明
- 关键词：T淋巴细胞胶原诱导性关节炎类风湿性关节炎自身免疫性疾病
- pTARGET-TCR Vβ5.2真核表达质粒的构建及表达被引量：4
- 2007年
- 目的构建含大鼠TCR Vβ5.2基因的重组真核表达质粒。方法以RT-PCR法扩增Lewis大鼠脾脏淋巴细胞的TCR Vβ5.2基因片段,将目的基因直接克隆到真核表达载体pTARGET中,构建重组质粒pTARGET-TCR Vβ5.2。连接产物转化E.coliJM109细胞后进行蓝白斑筛选,并经菌落PCR和DNA测序进行鉴定。将重组质粒以肌注法免疫Balb/c小鼠,用RT-PCR和免疫组化方法分别检测重组质粒在注射部位的转录和表达。通过脂质体介导,将重组质粒转染COS-7细胞进行瞬时表达,用免疫细胞化学染色法检测目的基因在真核细胞内的表达。结果测序鉴定证实,TCR Vβ5.2基因已被正确插入到pTAR-GET载体中,并检测到肌肉组织和COS-7细胞内目的蛋白的表达。结论成功构建了重组真核表达质粒pTARGET-TCR Vβ5.2,为进行TCR VβDNA疫苗对胶原诱导性关节炎大鼠保护作用的研究提供了基础。
- 马丽平李蕴赵文明刘振龙
- 关键词：T细胞受体真核表达载体胶原诱导性关节炎
- 胶原诱导的关节炎大鼠关节中浸润的T细胞TCR Vβ克隆型分析被引量：9
- 2005年
- 目的:研究胶原诱导的关节炎(CIA)大鼠关节中局部浸润的T细胞TCRVβ克隆型。方法:用II型胶原(CII)诱导Lewis大鼠发生关节炎后,经流式细胞术分析大鼠外周血CD4+和CD8+细胞的变化。提取CIA大鼠关节组织的总RNA,通过RT-PCR/SSCP方法分析大鼠两后肢足关节中TCRVβ克隆型的一致率。将CIA大鼠脾淋巴细胞转移至同系正常大鼠,观察发病情况。结果:从注射CII的第30天起,大鼠后爪出现红、肿等症状。流式细胞术分析显示,与正常大鼠相比较,CIA大鼠外周血CD8+T细胞的降低有显著性意义(P<0.01),CD4+T/CD8+T的比值大于2(P<0.01),提示CIA大鼠体内存在T淋巴细胞亚群的比例失调。CIA大鼠两后肢足关节中聚集的TCRVβ克隆型的一致率,以TCRVβ5.2和8.2最高,分别为78.89%和72.23%。脾淋巴细胞转移试验显示,受者发病的大鼠关节中,出现与供者CIA大鼠一致的TCRVβ克隆型条带,表明关节局部聚集的TCRVβ克隆型与关节炎(RA)的发病有关。结论:CIA大鼠关节局部存在以TCRVβ5.2和8.2为主的致病性的T细胞TCRVβ克隆型,可将其作为治疗CIA的靶物质,进行实验动物RA治疗的研究。
- 张新梅赵文明李蕴刘振龙
- 关键词：胶原诱导性关节炎T细胞TCR
