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国家自然科学基金(81301506)
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1
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2014
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血清循环 Bmi-1 mRNA 检测方法的建立及其在结直肠癌诊断中的应用
被引量:5
2014年
目的:建立一种血清循环B细胞特异性莫洛尼白血病毒插入位点1( Bmi-1)信使核糖核酸(mRNA)直接逆转录-实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR-D)检测方法,并运用该方法对结直肠癌血清循环Bmi-1 mRNA水平进行分析,探讨其在结直肠癌诊断中的价值。方法方法学建立。提取结直肠癌HT29细胞株RNA,建立Bmi-1、泛素C ( UBC)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶( GAPDH) mRNAs检测标准曲线,计算扩增效率。利用RT-qPCR-D方法对血清、准备液混合液中Bmi-1 mRNA进行直接检测,通过熔解曲线评价试验的特异性,以及血清样本稀释观察方法的检测下限。并且,用该方法检测2008年1月至2009年1月山东大学齐鲁医院158例结直肠癌患者,其中Ⅰ期26例、Ⅱ期53例、Ⅲ期47例和Ⅳ期32例,以及53例结直肠镜检查正常者血清循环Bmi-1 mRNA水平,采用Kruskal-Wallis H、Mann-Whitney U检验比较各组Bmi-1 mRNA表达水平,受试者工作特征曲线( ROC)分析其对结直肠癌的检测效能。结果 Bmi-1、UBC、GAPDH log值与定量循环( Cq )值间呈良好线性关系(R2=0.990、0.990、0.99,P均<0.001),扩增效率(E)分别为0.875、0.917、0.935。建立的RT-qPCR-D方法,检测Bmi-1、UBC、GAPDH mRNAs的熔解曲线峰值单一;检测下限可达1.25μl。运用该方法检测血清循环Bmi-1 mRNA水平,在结直肠癌Ⅰ期患者中为0.138(0.078-0.228),Ⅱ期患者中为0.163(0.067-0.287)、Ⅲ期患者中为0.217(0.072-0.267)、Ⅳ期患者中为0.273(0.139-0.419)以及对照者中为0.021(0.008-0.029),各组间比较差异有统计学意义(H=89.5,P<0.001)。结直肠癌各期组循环Bmi-1 mRNA水平明显高于对照组(U=58.0、287、246、72.5,P均<0.001);循环Bmi-1 mRNA在Ⅳ期患者中的水平明显高于其他各期患者(U=247、590、540,P=0.008、0.020、0.035),而在Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期患者间比较,差异无统计�
张欣
王海燕
郑桂喜
王丽丽
李培龙
刘童
杨咏梅
杜鲁涛
李娟
王传新
关键词:
结直肠肿瘤
逆转录聚合酶链反应
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