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抗菌肽Alloferon-1串联式重组表达及其产物体外抗病毒活性的研究被引量：1: 2009年; 目的:构建串联式表达Alloferon-1的原核重组表达系统,检测合成及重组表达的Alloferon-1体外抗病毒活性。方法:采用基因工程技术构建含6×His-EK-8×Alloferon-1-EK-6×His序列的人工融合基因及其原核表达系统。采用SDS-PAGE和BioRad凝胶图象分析系统了解目的重组产物8×rAlloferon-1-EK表达情况和产量。采用Ni-NTA亲和层析及EK酶切和Sephadex G-50层析法,提纯8×rAlloferon-1-EK及rAlloferon-1-EK。采用CPE观察和MTT法检测rAlloferon-1-EK体外抗IV-A3、CV-B4和RSV-E6株的作用,并与直接合成的Alloferon-1(sAllofer-on-1)和Alloferon-1-EK(sAlloferon-1-EK)的抗病毒活性比较。结果:获得了序列正确的目的人工融合基因克隆及其原核表达系统pET42a-8×rAlloferon-1-EK-E.coliBLDE3。该原核重组表达系统串联式表达的目的重组蛋白8×rAlloferon-1-EK产量约为细菌总蛋白的30%。Ni-NTA和Sephadex G-50层析后可分别获得8×rAlloferon-1-EK和rAlloferon-1-EK。25μg/ml的各Alloferon-1s均无明显的抗病毒作用,50μg/ml和100μg/ml的各Alloferon-1s有抗IV-A3和RSV-E6株作用且活性相似(P>0.05),但各Alloferon-1s均无抗CV-B4株的作用。结论:本研究成功地构建了串联表达Alloferon-1的原核表达系统,其表达产物具有与合成的Alloferon-1和Alloferon-1-EK相似的体外抗病毒活性。; 孙琦孙爱华严杰; 关键词：抗菌肽抗病毒活性

不同Alloferon-1体外抗病毒效果: 2009年; Alloferon-1是Chernysh等于2002报道的一种由13个氨基酸组成、相对分子质量为1481．53的新型抗菌肽，动物实验证实该抗菌肽有较强的抗流感病毒和抗白血病细胞的活性。人工合成或重组表达的抗菌肽Magainin—Ⅱ的生物学活性与天然产物相同。本研究中构建了串联式表达Alloferon-1的原核重组表达系统得到rAlloferon-1-EK，同时人工合成了sAlloferon-1和sAlloferon-1-EK，比较重组及人工合成的3种Alloferon-1体外抗病毒活性，以期为抗病毒新药研发提供实验依据。; 孙琦孙爱华严杰; 关键词：MAGAININ 生物学活性相对分子质量

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浙江省科技厅科技计划项目(2008C33032)

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