“十一五”国家科技支撑计划(2009BAK61B04)
- 作品数：16 被引量：48H指数：4
- 相关作者：邹明强薛强杜景娇郭浩张学梅更多>>
- 相关机构：中国检验检疫科学研究院大连医科大学内蒙古医学院更多>>
- 发文基金：“十一五”国家科技支撑计划国际科技合作与交流专项项目中国检验检疫科学研究院基本科研业务费专项资金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学轻工技术与工程更多>>
- 单克隆抗体在狂犬病预防治疗中的研究进展被引量：3
- 2012年
- 体液免疫是机体对抗病毒感染的自然选择之一,抗狂犬病毒(RV)抗体在狂犬病的预防和治疗中都发挥着重要作用。现在,抗RV抗体已由传统的多克隆免疫球蛋白过渡到各种单克隆抗体(mAb)、基因工程抗体,抗RV糖蛋白mAb主要应用于RV接触后预防及治疗中,其辅助狂犬病早期诊断,抗RV糖蛋白不同表位的mAb联合应用比多克隆免疫球蛋白更具优越性。目前,抗RV糖蛋白mAb在狂犬病治疗中还面临着很多困难,如血脑屏障的生理性阻隔、难以清除寄生在神经元细胞内部的病毒等。现就mAb在狂犬病预防治疗中的研究进展予以综述。
- 张海玉李娜张学梅
- 关键词：单克隆抗体狂犬病狂犬病毒
- 小牛肠碱性磷酸酶活性检测方法的建立
- 2014年
- [目的]建立适用于科研用小牛肠碱性磷酸酶活性的检测方法。[方法]通过模拟科研中小牛肠碱性磷酸酶的使用条件及缓冲液，并研究不同底物浓度、反应时间、显色时间、缓冲液pH等对酶活性检测的影响。[结果]使用不同缓冲液对酶活性进行检测，其测量值差异较大。若使用添加硼酸的铁氰化钾溶液，则可以实现颜色的稳定显示。最佳水浴时间为10min，最佳底物浓度为0．04mol／L。随着温度的增加，对低浓度酶活性的影响不大，但对高浓度酶活性的影响逐渐增大。当缓冲液pH为7．O～8．0时，能够较好维持酶活性的稳定性。缓冲液粒子强度对酶活性的影响不大。[结论]成功建立了科研用小牛肠碱性磷酸酶的活性检测方法。
- 赖晓芳林霖李意刘奕雄兰全学赖心田杨国武
- 关键词：碱性磷酸酶活性检测紫外分光光度法
- 环介导等温扩增(LAMP)技术的应用现状被引量：1
- 2012年
- LAMP技术具有简便、快速、高效、特异性强等优点,尤其适用于人类和动物疾病的检测,本文重点论述了目前LAMP方法在病原微生物检测、临床诊断、胚胎性别鉴定以及转基因食品等领域的应用及研究情况。表明该方法已具有成功应用的现实性,为快速基因检测提供了一种新的技术途径,可望作为常规检测工具。
- 郭浩杜景娇云彩麟刘小雷于东升
- 关键词：环介导等温扩增病原微生物检测胚胎性别鉴定转基因食品
- 3种新城疫病毒核酸扩增检测方法的比较研究
- 2012年
- 本研究利用3种方法对新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)进行检测,并对这3种检测方法的灵敏度和特异性作出比较。根据新城疫病毒的融合蛋白基因(F基因)设计合成6条特异性引物,利用水浴LAMP法、PCR及LAMP实时浊度仪进行检测。通过对恒温水浴中的反应温度、反应时间及反应液中Mg2+浓度进行优化获得最佳反应条件,结果用凝胶电泳分析;用优化的温度进行LAMP实时浊度仪检测,同时都与PCR方法进行比较。结果显示,获得了最佳反应条件,水浴LAMP方法最低检测限是1.58pg,比PCR高100倍,而LAMP实时浊度仪检测灵敏度比水浴LAMP方法高10倍,最低检测限是0.158pg。3种方法对其他非新城疫病毒均无检出。结果表明,新城疫病毒水浴LAMP检测方法速度快、不需要高精密的仪器,而且具有灵敏度高、特异性强、操作简单等特点,有望在核酸扩增领域取代PCR技术,LAMP浊度仪法检测灵敏度更高,但是所需仪器和试剂比较昂贵。
- 杜景娇薛强邹明强郭浩滕文锋
- 关键词：环介导等温扩增技术新城疫病毒聚合酶链反应
- 抗人大肠癌P-gp_(185)Fab抗体的制备
- 2013年
- 针对人大肠癌P-gp(P-glycoprotein),获得用于研究其功能的抗某一线性表位的单克隆Fab抗体.以原核表达的P-gp185为抗原,对前期所构建的库容量为2.47×106cfu的抗人大肠癌Fab抗体库进行5轮的淘选和富集.ELISA法鉴定获得的各级抗P-gp185Fab抗体库.利用化学合成的膜表位P-gp10肽(ANDAAQVKGA)从五级库中获得表达阳性Fab抗体的克隆及该Fab抗体的基因序列.结果显示,成功富集、淘选获得各级抗人大肠癌P-gp185Fab抗体库;成功获得抗线性表位P-gp10肽的阳性克隆——24号菌株及其表达的Fab抗体基因序列.该Fab抗体的后续制备有望用于大肠癌P-gp功能的研究,该方法也为研究其它目标蛋白的功能提供了有价值的线索.
- 李俊蔺娜卞威张学梅
- 关键词：P-GPFAB抗体大肠癌
- ^(13)C-甲醇的制备被引量：1
- 2012年
- 采用自制的催化剂和自行设计的高效催化反应器,用催化加氢的方法,以Ba13 CO3为原料制备了13 C-甲醇。所得甲醇水溶液在微型高效精馏反应器中进一步提纯后,得到的13 C-甲醇化学纯度>99.5%。实验设计的合成路线反应条件温和,同位素利用率>90%。13 C-甲醇经色质联用(GC-MS)和核磁(1 H NMR)检测,13 C同位素丰度>97%,13 C-甲醇的同位素丰度与原料相比降低<1%。以上结果表明,采用自制的催化剂和自行设计的高效催化反应器,成功地用催化加氢的方法,制备得到了13 C-甲醇。
- 罗勇杜晓宁宋家龙陆平晔李美华
- 关键词：甲醇催化加氢
- 溶壁微球菌对溶菌酶活性检测的影响被引量：3
- 2013年
- 溶菌酶在基础研究领域、医药保健和食品工业中有着广泛的应用。采用以溶壁微球菌(Micrococcus Lysodeikticus)为底物的比色法为溶菌酶活性检测主要方法,且为食品添加剂专家联合委员会推荐方法。由于国内检测标准的缺乏,各个厂家均采用自己的一套检测方法,酶活性单位定义各不相同,使用时其效果也各不相同。其中由于不同生长阶段细菌细胞壁状态不同,因此方法中底物状态对检测结果影响最大。通过采用不同增菌时间、不同浓度的溶壁微球菌作为底物进行检测,摸索出一套稳定的用于制备溶菌酶活性检测底物(溶壁微球菌悬液)的方法。若采用此套标准化程序可实现规范各厂家溶菌酶活性检测方法,并为溶菌酶活性检测方法国家标准制定提供参考。
- 林霖张宇兰全学严琼英陈晶赖心田杨国武
- 关键词：溶菌酶
- 改良逆转录环介导等温扩增检测技术快速实时检测H9亚型禽流感病毒被引量：4
- 2012年
- 利用改良逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)技术建立一种快速、灵敏的检测方法用于H9亚型禽流感病毒检测。根据H9亚型禽流感病毒血凝素(HA)基因保守区序列中的8个区段设计6条特异性引物,在恒温条件下进行核酸扩增反应,并以琼脂糖凝胶电泳和目视检查绿色荧光两种方法对扩增结果进行判定。结果表明,RT-LAMP的最小检测限为100 fg,灵敏度比PT-PCR高100倍,且与H5亚型、H7亚型禽流感病毒,新城疫病毒(NDV)无交叉反应。目视检查绿色荧光与常规琼脂糖凝胶电泳的判定结果一致。整个扩增检测过程在35 min内即可完成。利用临床样本对RT-LAMP法进行验证,结果与RT-PCR一致。由实时浊度分析得到的标准曲线,计算出临床样本中的病毒质粒拷贝数均在2×107-2×104之间。因此,本研究建立的RT-LAMP方法快速、灵敏、特异性强,是H9亚型禽流感病毒的一种高效检测方法。
- 但晓雅董英邹明强薛强杜景娇
- 关键词：H9亚型禽流感病毒
- 新城疫检测技术的研究新进展被引量：10
- 2012年
- 新城疫作为禽类重要的传染病之一,从发现至今已有80多年的历程,给养殖业带来不可估量的经济损失,因此对于该病的研究具有重要的意义。文章简要介绍了新城疫的几种免疫分析方法和分子生物学检测方法。
- 杜景娇薛强邹明强郭浩
- 关键词：新城疫免疫分析分子生物学技术
- 鼠源抗人乳腺癌MRP1/ABCC1噬菌体Fab抗体库的构建
- 2014年
- 鼠源抗人乳腺癌多药耐药相关蛋白1(multidrug resistance-associated protein 1,MRP1/ABCC1)噬菌体Fab抗体库的构建首先是利用乳腺癌组织匀浆液作为免疫原免疫BALB/c小鼠,成功免疫后提取小鼠脾组织的总RNA逆转录为cDNA。然后设计小鼠IgG各亚型的特异性Fab引物,PCR扩增Fd和L基因并依次连接到噬菌体载体pComb3中。重组体pComb3-Fab转化至E.coli XL1-Blue菌中,最后经辅助噬菌体VCSM13超感染,成功构建噬菌体Fab抗体库。以化学合成的MRP1/ABCC1膜表位10肽为抗原进行3轮淘选、富集,对淘选后获得的各级噬菌体抗体库进行ELISA检测和鉴定。成功获得的抗MRP1/ABCC1-10肽三级噬菌体Fab抗体库将为抗人乳腺癌MRP1/ABCC1 Fab抗体的制备提供保障。
- 张学梅赵彩红李俊罗晓蒋葵
- 关键词：FAB抗体乳腺癌
