国家自然科学基金(30900725)
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
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- 细胞周期重启与阿尔茨海默病被引量：2
- 2011年
- 阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是最常见的神经退行性疾病,占成人痴呆症的60%以上。研究表明在受到异常刺激时分化成熟的细胞可以跨过G0/G1检查点进入G1期,并在S期发生DNA复制,有的细胞甚至能够到达G2期,但是最终却不能进入M期完成有丝分裂的整个过程。中枢神经元通常被认为处于终末分化状态,意味着它们不再进入细胞周期。然而,越来越多的研究显示AD患者脑中神经元存在细胞周期的重启,细胞周期重启可导致神经元死亡,细胞周期重启与AD的病理变化关系密切。
- 李妍王海红董为人
- 关键词：阿尔茨海默病TAU蛋白
- Tau蛋白过度表达促进细胞重新进入细胞周期
- 2011年
- 目的探讨tau蛋白过度表达对细胞重新进入细胞周期的影响。方法采用免疫印迹和免疫荧光细胞化学的方法,分别检测稳定转染质粒pcDNA3.1-tau和空载体pcDNA3.1的HEK293细胞(HEK293/tau和HEK293/vec)中tau的表达,用细胞周期抑制剂Aphidicolin处理细胞抑制细胞周期,在Aphidicolin处理20h和撤药6h时应用流式细胞术检测细胞周期。结果 tau蛋白在HEK293/tau细胞中过度表达;Aphidicolin作用20h使62.33%的HEK293/tau和69.98%的HEK293/vec细胞停留在G0/G1期,两者之间差异没有统计学意义;撤药6h时,与HEK293/vec细胞相比,HEK293/tau细胞处于G0/G1期的比率显著减少,处于S期的比率显著增多。结论 Tau蛋白过度表达促进细胞重新进入细胞周期。
- 王海红张琳董为人刘忠英张磊李妍
- 关键词：TAU蛋白细胞周期阿尔茨海默病
- 真核表达质粒pcDNA3.1-tau的构建及在HEK293细胞中的稳定表达
- 2011年
- 背景:阿尔茨海默病患者的痴呆症状严重程度与脑组织中的神经原纤维缠结数量呈正相关,神经原纤维缠结的主要蛋白成分为过度磷酸化的蛋白tau,tau蛋白的病理改变出现在痴呆症状之前并独立于β-淀粉样多肽的异常。目的:构建tau基因的真核表达质粒,建立稳定表达tau的稳转细胞株。方法:采用反转录-聚合酶链反应方法,从反转录反应合成的人成神经瘤细胞(SH-SY5Y)的总cDNA中,扩增出约1.0kb的tau cDNA片段,用BamHⅠ和XhoⅠ双酶切后定向克隆到真核细胞表达载体pcDNA3.1中,用限制性内切酶酶切分析和DNA序列分析鉴定重组质粒;用脂质体介导法将质粒转染入培养的人胚肾细胞,并利用G418进行稳定表达tau的稳转细胞株的筛选,免疫印迹和免疫荧光细胞化学方法检测tau基因的表达。结果与结论:人tau cDNA已克隆到真核细胞表达载体pcDNA3.1中;免疫印迹和免疫荧光细胞化学结果显示人tau基因在人胚肾细胞中获得表达,tau蛋白表达的阳性信号主要位于细胞胞质,说明成功构建了pcDNA3.1-tau的真核表达质粒,建立了稳定表达tau的稳转细胞株。
- 王海红董为人张琳晏芳刘忠英李妍
- 关键词：基因克隆TAU转染真核表达质粒
- 大鼠海马tau蛋白过度磷酸化时细胞周期蛋白cyclin D1的表达
- 2011年
- 目的：探讨大鼠海马tau蛋白过度磷酸化时细胞周期蛋白cyclin D1的表达。方法：用cAMP-依赖性蛋白激酶A（PKA）的激动剂Forskolin注射大鼠侧脑室，免疫印迹和免疫组织化学技术检测大鼠海马tau蛋白的磷酸化水平，同时采用免疫印迹、免疫组织化学和RT-PCR方法检测海马cyclin D1和cyclin D1 mRNA。结果：侧脑室注射Forskolin 48 h，大鼠海马tau蛋白Ser214、Ser396和Ser202／Thr205位点的磷酸化水平升高，同时检测到细胞周期蛋白cyclin D1和cyclin D1 mRNA。结论：侧脑室注射Forskolin诱导大鼠海马tau蛋白过度磷酸化的同时，大鼠海马出现细胞周期蛋白cyclin D1的表达，提示了tau蛋白过度磷酸化与细胞周期相关蛋白cyclin D1之间可能的内在联系。
- 李妍董为人王海红刘忠英晏芳
- 关键词：TAU磷酸化CYCLIND1
