国家自然科学基金(81071717)
- 作品数：6 被引量：16H指数：3
- 相关作者：戴顺东王恩华刘树立唐娜王业林更多>>
- 相关机构：中国医科大学中国医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 结直肠癌中δ-catenin的表达与癌细胞增殖状态的相关性被引量：9
- 2013年
- 目的探讨在结直肠癌中δ-catenin表达的意义及其与结直肠癌细胞增殖活性的相关性。方法利用免疫组织化学Elivision^(TM)plus法检测结直肠癌组织芯片中120例结直肠癌组织中δ-catenin和Ki-67的表达情况,利用Western blot法检测30例正常结直肠组织和结直肠癌组织中δ-catenin的表达水平。结果结直肠癌组织中δ-catenin的阳性表达率为65.83%(79/120),显著高于正常结直肠组织(P<0.05)TNMⅢ/Ⅵ期的结直肠癌组织中δ-catenin的阳性表达率为78.05%(32/41),明显高于Ⅰ/Ⅱ期结直肠癌组织中的阳性表达率59.49%(47/79)(χ~2=4.132,P=0.042);低分化的结直肠癌组织中δ-catenin阳性表达率为82.14%(23/28),明显高于高、中分化结直肠癌组织中的阳性表达率60.87%(56/92)(χ~2=4.319,P=0.038);δ-catenin在有淋巴结转移的结直肠癌中的表达率为77.05%(47/61),明显高于无淋巴结转移的结直肠癌中的阳性表达率54.24%(32/59)(χ~2=6.939,P=O.008)结直肠癌组织中δ-catenin高表达同结直肠癌细胞的高增殖活性(用Ki-67标记)呈显著正相关(r=0.334,P<0.01)。结论δ-catenin高表达很可能参与了结直肠癌的发生、发展过程。
- 李明珠戴顺东齐新阳唐娜王业林王恩华刘树立
- 关键词：KI-67结直肠癌增殖
- 转录因子Kaiso真核表达载体的构建及鉴定
- 2012年
- 目的构建并鉴定转录因子Kaiso的表达质粒pEGFP-Kaiso。方法采用PCR的方法扩增pCS2-Kaiso中人Kaiso的全长序列,克隆至载体pEGFP-N1中,构建重组质粒pEGFP-Kaiso,以酶切及基因测序方法鉴定重组质粒的准确性。利用LipofectamineTM2000将重组质粒转染至肺癌细胞系A549,24 h后荧光显微镜观察绿色荧光信号,48 h后Western blot鉴定Kaiso蛋白表达变化。结果限制性双酶切及DNA测序分析结果显示插入的DNA片段长度约为2 022 bp,与预期Kaiso基因片段大小相同。转染pEGFP-Kaiso重组质粒后,荧光显微镜观察到明确的绿色荧光蛋白(GFP)的绿色荧光信号,Western blot证实转染pEGFP-Kaiso质粒后的Kaiso蛋白表达量显著上调(P<0.05)。结论成功构建了人Kaiso基因真核表达载体,为深入研究Kaiso的生物学功能提供了有力的实验工具。
- 曹红一唐娜林旭勇张迪苗原王恩华戴顺东
- 关键词：基因克隆真核表达载体
- δ-catenin和Ki67在非小细胞肺癌中的表达及意义被引量：3
- 2012年
- 目的探讨δ-catenin、Ki-67在非小细胞肺癌中的表达状况及其与临床病理学参数间的关系。方法利用免疫组织化学(ElivisionTM plus法),检测肺癌组织芯片中155例非小细胞肺癌患者δ-catenin、Ki-67的表达情况。结果肺癌组织的δ-catenin蛋白阳性表达率为61.30%(95/155),相应癌旁组织δ-catenin阳性表达率为35.6%(16/45),差别有显著意义(<0.05)。δ-catenin在TNM III/IV期的NSCLC组织中阳性表达率为73.2%(41/56),明显高于在Ⅰ/II期NSCLC组织中阳性表达率54.5%(54/99,=0.022);δ-catenin在出现淋巴结转移的表达率为72.3%(60/83),显著高于没有淋巴结转移的阳性表达率48.6%(35/72,=0.003);非小细胞肺癌中δ-catenin高表达同Ki-67高表达呈显著正相关关系(χ2=12.685,r=0.282,<0.01)。结论δ-catenin的高表达与非小细胞肺癌的分期,淋巴结转移及增殖有关。
- 赵月朱华倩崔东源戴顺东王恩华
- 关键词：KI-67非小细胞肺癌增殖
- 黏附调节因子p120ctn 1A细胞核定向表达质粒的构建及鉴定被引量：3
- 2012年
- 目的:构建并鉴定p120ctn 1A细胞核定向表达质粒pCMV/p120ctn 1A。方法:采用PCR的方法扩增人p120ctn 1A活性片段,将其插入细胞核定向表达载体pCMV/myc/nuc/GFP,构建重组质粒pCMV/p120ctn 1A,经脂质体介导转染肺癌细胞系SPC-A-1,用荧光显微镜观察绿色荧光信号,免疫细胞化学及蛋白质印迹法鉴定其在肺癌细胞SPC-A-1中的表达与定位,用Transwell小室法监测细胞侵袭能力的变化。结果:限制性双酶切及DNA测序分析结果显示,插入pCMV/p120ctn 1A的片段为2 798bp左右,与预期p120ctn 1A基因片段大小相同。转染pCMV/p120ctn 1A质粒后,荧光显微镜观察到绿色荧光信号特异性定位于细胞核内。免疫细胞化学结果显示,SPC-A-1细胞核内p120ctn的表达量显著增强。蛋白质印迹法检测证实,转染pCMV/p120ctn 1A质粒后的p120ctn 1A蛋白表达量显著上调。体外侵袭实验结果证实,转染后SPC-A-1细胞的侵袭能力明显增强。结论:成功构建了p120ctn 1A细胞核定向表达载体pCMV/p120ctn 1A,为深入研究p120ctn的核内功能提供了有力的实验工具。
- 唐娜朱华倩曹红一王业林林旭勇戴顺东
- 关键词：P120CTN重组质粒
- 肺癌中Kaiso的浆表达与人肺癌的恶性表型正相关被引量：2
- 2011年
- 目的研究BTB/POZ蛋白家族成员Kaiso在肺癌组织中的表达情况探讨其与临床病理参数、肺癌患者预后的相关性。方法应用免疫组织化学法检测Kaiso蛋白在100例原发性非小细胞肺癌组织(其中68例备有完整的预后资料)和30例相应癌旁肺组织中的表达情况,应用Westernblot的方法比较30例癌旁肺组织与配对肺癌组织中Kaiso相对表达量的差异。结果免疫组织化学染色表明Kaiso在正常支气管上皮细胞呈极微弱的浆表达,Westernblot检测结果表明肺癌组织中Kaiso蛋白的表达量显著高于正常肺组织的表达水平(n=30,P=0.000)。肺癌组织中浆阳性率为63.00%(63/100),Kaiso蛋白浆表达与高TNM分期(P=0.006)和淋巴结转移(P=0.004)成正相关。Kaiso蛋白浆表达与肺癌的不良预后有密切关系,阳性表达组术后5年生存率(22.22%)显著低于阴性组(64.00%,P=0.002,LogRank法)。Kaiso在细胞核中的阳性表达率仅为5.00%(5/100),但与临床病理因素无关。结论 Kaiso蛋白浆表达增强与肺癌患者的恶性表型及不良预后正相关。
- 刘树立张盛戴顺东王恩华
- 关键词：肺癌淋巴结转移预后
- 靶向Kaiso基因的shRNA技术对人肺癌细胞生物学行为的影响被引量：2
- 2011年
- 目的转录因子Kaiso是BTB/POZ蛋白家族的重要成员,能够调控多种重要的侵袭、增殖相关基因的表达。本研究拟通过shRNA(smallhairpinRNA)技术干扰Kaiso蛋白的表达,观察Kaiso对肺癌细胞系增殖和侵袭等生物学行为的影响。方法运用shRNA重组质粒转染肺癌细胞系LTE和SPC,特异性下调Kaiso的表达,免疫荧光观察核内Kaiso的表达情况,四甲基偶氮唑盐(MTT)和体外基质胶侵袭(Transwell)实验分别检测肺癌细胞系的增殖和侵袭能力,RT-PCR方法检测Kaiso下游靶基因Matrilysin的转录水平。结果转染shRNA质粒特异性地下调了Kaiso的mRNA和蛋白表达(P<0.05),LTE和SPC细胞核内Kaiso的荧光信号显著减弱甚至消失,肺癌细胞的增殖活性和侵袭能力明显增强,Matrilysin基因的转录水平显著上调。结论细胞核内Kaiso蛋白的表达下调,通过调控重要靶基因的表达,影响肺癌细胞系的增殖和侵袭能力。
- 刘树立张盛戴顺东王恩华
- 关键词：肺癌RNAI增殖
