广东省科技计划工业攻关项目(2008B030301121)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 相关作者：付强徐亚娟李友瑞张艺平郭玲更多>>
- 相关机构：中山大学更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目广东省医学科学技术研究基金广东省卫生厅资助课题更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 小分子干扰核糖核酸转染小鼠成骨细胞的效率研究
- 2009年
- 目的研究直接转染化学合成小分子干扰核糖核酸(small interfering ribonucleic acid,siRNA)和通过质粒转导后在细胞内合成siRNA两种方法转染小鼠成骨细胞的转染效率,并优化实验条件。方法从无特定病原体(specefic pathogen free,SPF)级BALB/c新生鼠取材进行成骨细胞原代培养,经碱性磷酸酶(alkaline phospha-tase,ALP)和矿化结节检测鉴定为成骨细胞后传代至第3代,接种至24孔培养板。使用化学合成的经羧基荧光素标记的siRNA和带绿色荧光蛋白基因的质粒分别转染小鼠成骨细胞,在实验中改变siRNA和脂质体的用量,并改变转染时的细胞密度,通过荧光显微镜检测转染效率。同时,使用四甲基偶氮唑盐法检测不同浓度的转染试剂的细胞毒性。结果使用化学合成的siRNA转染原代培养的小鼠成骨细胞获得了较高的转染效率,其最大值达到90%以上,与质粒的转染效率相比有很大提高,且其细胞毒性在可接受的范围内。结论使用化学合成的siRNA转染原代培养的小鼠成骨细胞可以获得较高的转染效率,是一种理想的实验方法。
- 付强李友瑞徐亚娟张艺平沈韵吴昌敬
- 关键词：SIRNA转染成骨细胞质粒
- 细胞骨架完整性在流体剪切力诱导成骨细胞COX-2基因表达中的作用被引量：3
- 2009年
- 目的探讨细胞骨架完整性在流体剪切力诱导成骨细胞COX-2基因表达中的作用。方法原代培养BALB/c小鼠颅骨成骨细胞,采用细胞松弛素D(CD)破坏细胞骨架完整性;以12dyne/cm2的流体剪切力对成骨细胞加载1.5h;分别应用实时荧光定量巢式PCR和免疫荧光的方法检测COX-2基因mRNA和蛋白的表达水平,并对结果进行双因素方差分析。结果采用CD破坏细胞骨架完整性,可以对流体剪切力诱导成骨细胞COX-2mRNA和蛋白的表达起拮抗作用(P<0.05);在无流体剪切力加载条件下,CD处理对COX-2mRNA和蛋白的表达水平无显著影响(P>0.05);流体剪切力加载1.5h能使成骨细胞COX-2mRNA和蛋白的表达水平显著升高(P<0.05);CD处理可显著降低流体剪切力诱导成骨细胞COX-2mRNA和蛋白的表达水平(P<0.05)。结论保持细胞骨架完整性是流体剪切力诱导成骨细胞COX-2基因表达过程中所必需的。
- 吴昌敬李友瑞徐亚娟郭玲张艺平付强
- 关键词：COX-2基因流体剪切力细胞骨架成骨细胞
