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HLA-A*0201转基因小鼠侵袭性肺曲霉病模型的建立与鉴定被引量：1: 2014年; 【目的】建立HLA-A*0201转基因小鼠侵袭性肺曲霉病模型,并进行实验室鉴定。【方法】在真菌孢子感染前,给予HLA-A*0201转基因小鼠腹腔注射环磷酰胺。乙醚麻醉后,小鼠经鼻腔吸入3组不同浓度的(3×106、3×107、3×108mL-1)烟曲霉孢子悬液。阴性对照组小鼠吸入PBS。感染后36 h,处死各组小鼠,取肺组织病理行HE、PAS以及GMS染色分析,以验证感染是否成功并计算肺侵袭性肺烟曲霉感染小鼠模型成模率。肺组织研磨涂皿后行菌落计数,分析小鼠肺烟曲霉负载量。【结果】小鼠肺组织病理检查显示,正常肺组织结构遭到显著破坏,大量菌丝生长并可见菌丝侵犯血管现象,证实侵袭性肺曲霉病模型造模成功。在免疫抑制的方法和条件恒定时,3种孢子浓度由低到高成模率分别为36.7%、76.7%、96.7%。各实验组成模小鼠肺组织研磨液在PDA培养基上均有大量烟曲霉菌落生长,未感染小鼠组未见烟曲霉菌落生长。【结论】成功建立HLA-A*0201转基因小鼠侵袭性肺曲霉病模型,在免疫抑制的方法和条件恒定时,模型成模率与接种孢子悬液的浓度成正比,采用高浓度的孢子悬液(3×108mL-1)时,可以达到较高的成模率。; 赵作涛孙铮李丽丽万喆朱平李若瑜; 关键词：烟曲霉侵袭性肺曲霉病环磷酰胺

烟曲霉感染的宿主防御机制以及相关免疫学研究进展被引量：5: 2010年; 随着免疫抑制剂广泛应用和免疫抑制患者的不断增多,由烟曲霉引起的侵袭性感染病例逐渐增加,越来越引起医学界的关注。本文特此对烟曲霉感染的宿主防御机制以及免疫学研究进展作一综述。; 孙铮赵作涛万喆李若瑜; 关键词：烟曲霉真菌感染侵袭性曲霉病免疫抑制免疫学研究

烟曲霉抗原Asp f16 HLA-A~* 0201限制性的CD8^+ CTL抗原表位生物信息学预测与实验室鉴定被引量：2: 2011年; 目的预测与鉴定烟曲霉抗原Asp f16的HLA-A*0201限制性CD8+细胞毒性T细胞(CTL)抗原表位。方法以国人常见的HLA-A*0201位点为靶点,依据生物信息学软件扫描烟曲霉特异性抗原Asp f16的全部427个氨基酸序列。使用HLA-A*0201转基因小鼠制备骨髓来源的树突状细胞(DC)和CTL。流式细胞仪技术检测DC表面MHC II类抗原,CD80,CD86和CD11c的表达来验证其是否成熟。ELISPOT试验检测烟曲霉抗原多肽特异性CTL产生的细胞因子IFN-γ。四聚体(Tetramer)试验证实烟曲霉特异性CTL与抗原肽,HLA-A*0201分子复合体的亲和性。结果根据与MHC I类分子结合的半衰期评分,选择了3个HLA-A*0201限制性抗原表位。流式细胞仪分析示成熟DC高表达HLA II类抗原,CD80,CD86和CD11c。Tetramer试验证实烟曲霉特异性T细胞受体与抗原肽,HLA-A*0201分子复合体的高亲和性。ELISPOT实验结果表明烟曲霉抗原肽体外可以活化CD8+CTL,被负载了抗原肽的DC刺激活化后可以产生IFN-γ。结论本研究成功鉴定烟曲霉抗原Asp f16的HLA-A*0201限制性CD8+CTL表位,可作为疫苗设计的候选表位,为进一步研发新型抗烟曲霉疫苗提供参考。; 赵作涛孙铮万喆朱平李若瑜; 关键词：烟曲霉 ASP F16 抗原表位

肥大细胞在宿主真菌感染免疫反应中的作用被引量：2: 2014年; 肥大细胞除了在变态反应性疾病中发挥关键作用外,也是宿主针对病原感染固有免疫中重要的效应细胞。有关肥大细胞在病原感染中的作用机制已逐渐被揭示,如肥大细胞在细菌、病毒及寄生虫感染中的作用。然而,肥大细胞在真菌感染免疫反应(感染-变态反应)中的作用仍未明了。本文就近年有关肥大细胞在宿主对真菌感染免疫反应中的研究结果做一综述,包括肥大细胞分布与真菌感染、肥大细胞对真菌的识别、信号转导通路及释放炎症因子等方面分别阐释。; 王珊刘玲玲赵作涛; 关键词：肥大细胞真菌感染固有免疫变态反应

体外制备和增殖烟曲霉特异性T细胞的研究被引量：7: 2010年; 目的体外制备和增殖烟曲霉特异性T淋巴细胞。方法从健康志愿者外周抗凝血中分离并体外扩增DC,利用加热灭活的烟曲霉孢子作为抗原,体外共孵育制备烟曲霉孢子负载的DC,进一步将此成熟DC与源自同一个体的去除了DC细胞的外周血细胞共培养,体外诱导并扩增烟曲霉特异性T淋巴细胞。应用ELISPOT(酶联免疫斑点)技术检测活化T细胞IFN-γ的分泌情况,流式细胞仪检测细胞因子胞内合成情况,并分析功能细胞的类型和比例。结果 ELISPOT分析显示:PBMC+DC+Conidia实验组IFN-γ分泌(87.33±1.33/4.0×105)高于其他对照组,具有统计学意义(P<0.05)。细胞因子流式细胞仪分析显示:PBMC+DC+Conidia组中,2.76%的细胞分泌IFN-γ,其中1.61%为CD4+T细胞,与各对照组相比具有统计学意义(P<0.05)。获得的烟曲霉特异性T细胞可以在体外可进行大量增殖。结论本文结果显示烟曲霉孢子在体外可以作为变应原诱导产生烟曲霉特异性CD4+T细胞介导的Th1型免疫反应,为未来制备和扩增烟曲霉特异性T细胞及过继免疫治疗侵袭性曲霉病提供实验基础。; 赵作涛孙铮万喆王晓红李若瑜; 关键词：烟曲霉侵袭性曲霉病 Γ-干扰素

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国家自然科学基金(30800041)