教育部科学技术研究重点项目(207136)
- 作品数：5 被引量：12H指数：2
- 相关作者：郑勇李睿陈卫刚火睿周婷更多>>
- 相关机构：石河子大学医学院第一附属医院石河子大学更多>>
- 发文基金：教育部科学技术研究重点项目兵团博士基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Smad-7与Timp-1siRNA质粒联合作用对大鼠肝纤维化的影响被引量：5
- 2011年
- 目的观察Smad-7与Timp-1siRNA真核细胞表达质粒联合作用对大鼠肝纤维化的影响。方法采用已构建的重组Smad-7与Timp-1siRNA真核细胞表达质粒,用脂质体包埋法通过腹腔注射将其导入肝纤维化模型大鼠体内。通过病理形态学、Western blot法及半定量RT-PCR法观察两种质粒联合作用对大鼠肝纤维化的影响。结果 两种质粒联合治疗组与各单一治疗组之间病理学分级有显著性差异(P<0.05);两种质粒联合治疗组中Ⅰ型胶原表达量显著低于单一治疗组(P<0.05),并较单一治疗组明显抑制Smad-2、Timp-1mRNA在肝纤维化肝脏中的表达(P<0.05)。结论 Smad-7与Timp-1siRNA表达质粒联合抑制大鼠肝纤维化的疗效优于各单一治疗组。
- 陈燕郑勇李睿徐丽红陈卫刚火睿宋丽秀李文娟刘维国
- 关键词：肝纤维化TIMP-1
- 外源Smad7基因对肝星状细胞Smad7 mRNA及蛋白表达的影响被引量：2
- 2008年
- 目的观察外源Smad7基因能否有效转染肝星状细胞及其对Smad7 mRNA和蛋白表达的影响。方法构建鼠Smad7真核表达重组质粒,脂质体介导转染HSC-T6细胞,以RT-PCR和Western blot检测正常对照组、空质粒组及转染组中Smad7表达情况。结果Smad7真核表达质粒构建成功;外源Smad7体外转染肝星状细胞后,Smad7 mRNA和蛋白水平均显著上调,Smad7转染组与正常对照、空质粒组比较:Smad7 mRNA表达显著增加(P=0.009,0.011),蛋白水平显著上调(P=0.020,0.026),正常对照组、空质粒组Smad7 mRNA和蛋白水平表达差异无统计学意义(P=0.944,0.644)。结论Smad7真核表达质粒构建成功,外源Smad7基因可有效转染肝星状细胞,并显著上调Smad7 mRNA和蛋白水平。
- 杨小艳郑勇杨勇李睿孙侃陈卫刚常向云褚云香
- 关键词：SMAD7真核表达质粒抗纤维化
- 特异性siRNA对大鼠肝星状细胞TIMP-1表达的影响被引量：2
- 2009年
- 观察金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)小干扰RNA真核表达载体转染肝星状细胞株HSC-T6后TIMP-1基因表达的情况。构建携带绿色荧光蛋白(GFP)基因的小干扰RNA真核表达载体pGCsi-U6/TIMP-1 shRNA,利用该载体介导四个特异性和一个非特异性的TIMP-1 shRNA,分别为TIMP-1 shRNA1、TIMP-1shRNA2、TIMP-1shRNA3、TIMP-1shRNA4和TIMP-1 shRNA-NON。采用阳离子脂质体介导法转染HSC-T6细胞,激光共聚焦显微镜观察GFP表达,荧光实时定量PCR方法检测TIMP-1 mRNA表达情况。质粒转染HSC-T6细胞后,激光共聚焦显微镜观察转染组细胞内均见绿色荧光,未转染组未见绿色荧光;mRNA水平检测显示:与正常对照组相比,TIMP-1 shRNA1、TIMP-1 shRNA2和TIMP-1shRNA4对TIMP-1基因表达较强的抑制作用,尤TIMP-1 shRNA1抑制作用最强(P<0.01)。pGCsi-U6介导的TIMP-1shRNA1能更加有效的抑制肝星状细胞中TIMP-1的表达。
- 火睿郑勇田书信周婷孙侃常向云陈卫刚
- 关键词：金属蛋白酶组织抑制因子-1小干扰RNA肝星状细胞
- TIMP-1特异性小干扰RNA真核表达载体转染肝星状细胞效率的检测被引量：2
- 2009年
- 目的提高TIMP-1小干扰RNA真核表达载体pGCsi-U6/TIMP-1 shRNA在大鼠肝星状细胞HSC-T6中的转染效率。方法构建携带绿色荧光蛋白(GFP)基因的小干扰RNA真核表达载体pGCsi-U6/TIMP-1 shRNA,采用阳离子脂质体介导法将pGCsi-U6/TIMP-1 shRNA质粒转染入HSC-T6细胞,实验根据质粒DNA和阳离子脂质体LipofectamineTM2000的不同比例分为5组:2μg/0μL、2μg/4μL、2μg/6μL、2μg/8μL、2μg/10μL,同时设空白对照组。转染48 h后,应用激光共聚焦显微镜观察各组转染情况,同时用流式细胞仪计算转染效率。结果激光共聚焦显微镜观察和流式细胞仪检测均说明质粒与脂质体比例为2μg/8μL组转染效率显著高于其余各比例组,差异具有统计学意义。转染效率与脂质体和质粒的比例有关。结论按照合适的质粒和脂质体比例,质粒pGCsi-U6/TIMP-1 shRNA转染HSC-T6可达较高转染效率,是转染HSC-T6较为理想的瞬时表达载体。
- 火睿郑勇田书信周婷孙侃常向云陈卫刚李睿
- 关键词：TIMP-1肝星状细胞基因转染
- 外源Smad7转染肝星状细胞及对转化生长因子β1和Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达的影响被引量：5
- 2009年
- 背景:Smad7是转化生长因子β信号转导途径的主要抑制性蛋白,具有抗纤维化的作用。目的:构建并鉴定大鼠Smad7真核表达质粒,观察外源Smad7可否有效转染肝星状细胞T6,并进一步研究其对转化生长因子β及Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达水平的影响。设计、地点:基因重组及细胞观察实验,于新疆石河子大学医学院第一附属医院完成。材料:pcDNA3.1(+)质粒为课题组保留;大肠杆菌DH5α系石河子大学医学院新疆地方与民族高发病教育部重点实验室所赠;肝星状细胞T6细胞由中国医学科学院肿瘤医院肿瘤研究所提供品。方法:采用基因重组技术将Smad7cDNA插入真核表达载体pcDNA3.1(+),构建大鼠Smad7真核表达质粒。脂质体介导转染肝星状细胞T6细胞,分为正常对照、空质粒及转染组,G418筛选,挑取阳性细胞。主要观察指标:反转录-聚合酶链反应法检测各组中Smad7、转化生长因子β及Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达水平。结果:酶切和测序结果证实Smad7真核表达质粒构建成功。Smad7转染组与正常对照组、空质粒组比较:Smad7mRNA表达显著增加(P<0.01);转化生长因子β、Ⅰ型胶原mRNA表达减少(P<0.01);Ⅲ型胶原mRNA表达差异无显著性意义(P>0.05)。正常对照组、空质粒组Smad7、转化生长因子β及Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达差异无显著性意义(P值均>0.05)。结论:大鼠Smad7真核表达质粒构建成功,外源Smad7转染肝星状细胞T6细胞后可有效表达,并能降低转化生长因子β及Ⅰ型胶原mRNA表达水平。
- 杨小艳杨勇郑勇李睿周婷
- 关键词：SMAD7真核表达质粒转染肝星状细胞
