国家自然科学基金(81301560)
- 作品数：6 被引量：48H指数：3
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- 相关机构：四川大学华西医院四川大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中国博士后科学基金更多>>
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- BMP-12重组腺病毒载体转染外周血MSCs向肌腱/韧带细胞分化研究被引量：2
- 2015年
- 目的探讨携带BMP-12基因的腺病毒载体转染诱导外周血MSCs向肌腱/韧带细胞分化的效果。方法取3～4月龄新西兰兔外周血,体外分离培养外周血MSCs至第3代。采用Ad Easy腺病毒载体系统制备BMP-12重组腺病毒载体。将BMP-12重组腺病毒体体外转染第3代外周血MSCs,转染后24 h通过流式细胞术（flow cytometry,FCM）检测转染效率,倒置相差显微镜观察细胞形态变化,转染后8、24 h在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白（green fluorescent protein,GFP）表达;转染后0、7、14 d,采用免疫组织化学染色观察I型胶原表达情况;实时定量PCR检测肌腱/韧带特异基因Tenomodulin、Tenascin-C和Decorin m RNA表达水平,并设未转染细胞作为对照组。结果转染后24 h,倒置相差显微镜观察示细胞生长增殖缓慢,细胞形态清晰;FCM检测示,转染组转染效率为99.57%,未转染组为2.46%;转染后8 h,荧光显微镜下即可见GFP表达,随培养时间延长GFP表达逐渐增多,24 h时几乎所有细胞均可见GFP表达。免疫组织化学染色示,随转染时间延长,Ι型胶原表达逐渐增强;转染组转染后14 d,肌腱/韧带特异基因Tenomodulin、Tenascin-C和Decorin m RNA表达水平分别为0.061±0.013、0.029±0.008、0.679±0.067,均显著高于未转染组的0.004±0.002、0.003±0.001、0.142±0.024,差异有统计学意义（t=—7.700,P=0.031;t=—5.741,P=0.020;t=—12.998,P=0.000）。结论 BMP-12重组腺病毒载体可明显促进外周血MSCs向肌腱/韧带成纤维细胞表型分化,并促进肌腱/韧带特异基因表达和细胞外基质产生,为外周血MSCs用于肌腱/韧带再生提供了依据。
- 付维力陈刚唐新李棋李箭
- 关键词：重组腺病毒载体
- 半月板碎片来源间充质干细胞样细胞的分离培养及多向分化潜能被引量：2
- 2015年
- 目的：探讨半月板碎片来源间充质干细胞（MSC）样细胞的分离培养和多向分化潜能。方法：通过酶消化的方法分离半月板碎片来源细胞,体外培养至第3代,显微镜下观察其形态和生长状态。取第3代细胞并对其进行向成骨、成脂和成软骨诱导分化。结果：经酶消化的方法分离半月板碎片来源细胞4～6天可见少量的长梭形贴壁,10～14天细胞成簇生长,克隆集落形成。第3代细胞形态较均一,生长增殖良好。成骨诱导14天后ALP和茜素红染色阳性,有矿化结节形成。成脂诱导14天后油红O染色阳性提示细胞内有脂滴形成。采用细胞微团无血清成软骨诱导21天后甲苯胺蓝染色呈阳性,细胞外有蛋白多糖形成;免疫组织化学染色示特异软骨基质Ⅱ型胶原表达阳性。结论：采用混合胶原酶消化的方法分离获得的半月板碎片来源的细胞贴壁生长,呈典型的长梭形的MSC样细胞形态,在体外适当的诱导条件下具有分化成骨、成脂、成软骨的潜能,有望成为半月板再生的种子细胞来源。
- 付维力陈刚李棋唐新李箭
- 关键词：间充质干细胞多向分化潜能
- 富血小板血浆制备技术及其组分的研究进展被引量：15
- 2014年
- 目的总结富血小板血浆(platelet rich plasma,PRP)的制备技术及其组分的研究进展。方法广泛查阅近年国内外有关PRP的作用机制、制备方法以及组成等相关文献,并进行总结分析。结果 PRP促进生物学修复作用的发挥依赖于一系列序贯发生的级联细胞分子事件。PRP中含有高浓度血小板,其激活后释放大量活性因子,还含有少量的白细胞和红细胞。PRP的制备基于血小板的浓缩技术,不同的制备技术获得的血小板浓度、复苏率和组分也不相同。结论 PRP的制备技术目前尚无统一标准,不同的制备方法获得的不同成分和不同浓度的PRP,为临床患者选择最适合的个体化PRP产品奠定基础。
- 付维力李棋李箭
- 关键词：富血小板血浆
- 壳聚糖/聚磷酸钙复合支架的生物相容性研究被引量：3
- 2015年
- 目的：评价比较不同配比壳聚糖/聚磷酸钙（Chitosan/Calcium polyphosphate,CS/CPP）复合支架的细胞相容性和组织相容性,探讨其应用于组织工程半月板支架材料的可行性。方法：采用扫描电镜检测半月板细胞在支架材料上的生长情况。采用MTT法检测不同配比CS/CPP支架材料浸提液对第3代半月板细胞的毒性,通过肌袋内植入试验评价支架材料的体内组织相容性。结果：扫描电镜下可见：不同比例CS/CPP复合支架材料呈三维多孔的结构。复合第3代半月板细胞体外培养7 d,细胞在支架材料上均匀分布,紧贴支架铺展伸长,生长良好。MTT法显示不同浓度支架浸提液与对照DF培养液吸光度值比较,差异无统计学意义（P〉0.05）,支架无细胞毒性。肌袋内植入试验评价：肌袋内植入实验显示动物术后生存良好,各植入部位均未见组织坏死、积液及化脓感染。术后1周植入体周围有较多中性粒细胞浸润;术后2~8周植入体周围中性粒细胞浸润逐渐减少,出现淋巴细胞浸润,淋巴细胞多于中性粒细胞,纤维囊壁厚薄不均;3个月后植入体周围未见炎症细胞浸润,主要为胶原纤维和成纤维细胞。随植入时间的延长,炎症细胞浸润逐渐减少,浸润范围逐渐缩小,包膜先逐渐变厚再变薄,植入材料内部逐渐有组织长入,并且逐渐降解。结论：CS/CPP具有良好的细胞相容性和组织相容性,有望成为半月板组织工程的支架材料。
- 付维力李箭王践云万昌秀
- 关键词：细胞相容性组织相容性
- 富血小板血浆在临床骨科中的应用进展被引量：25
- 2014年
- 目的总结富血小板血浆(platelet-rich plasma,PRP)在临床骨科中的应用现状及进展。方法查阅近年国内外有关PRP在临床骨科中应用的相关研究,并进行总结分析。结果近年来有大量PRP应用于骨、软骨、韧带、肌腱、肌肉和其他软组织的临床研究报道,涉及骨缺损/骨不连、脊柱融合、骨关节炎和软骨损伤、韧带重建后的愈合、肌肉拉伤、肌腱末端病和各种急慢性软组织损伤等多种疾病,但其结果不一。结论 PRP因来源于自体、取材简便、以生物学修复为目标及肌肉骨骼系统组织修复潜能等优点被广泛应用于骨科临床,但目前PRP应用于骨科实践仍缺乏统一公认的应用标准和可靠的临床指南,尚需要更大样本、更高质量的临床证据来进一步支持其应用于骨科临床各种疾病的安全性和有效性。
- 付维力李棋李箭
- 关键词：富血小板血浆骨愈合软骨修复韧带重建
- 兔半月板纤维软骨细胞的体外去分化研究被引量：1
- 2015年
- 目的：比较研究不同代次间兔半月板纤维软骨细胞生物学特性的改变,为构建组织工程半月板和细胞治疗中的种子细胞优选提供进一步的理论和实践基础。方法：采用机械分离与酶连续消化相结合的方法体外分离兔半月板纤维软骨细胞,单层培养传代至第5代。采用相差倒置显微镜和SEM观察各代细胞的形态变化和超微结构,MTT法检测细胞增殖情况并描绘生长曲线,采用细胞化学染色和免疫组化鉴定细胞分泌的蛋白聚糖和Ⅰ、Ⅱ型胶原蛋白。结果：半月板纤维软骨细胞原代接种后8～12 h开始贴壁,48～72h大部分细胞贴壁,胞质逐渐展开,细胞变大伸长,形成突起,呈多角形,细胞形态规则,轮廓清晰,镜下观察有立体感,7～10 d后,细胞长满传代。传代后细胞贴壁生长能力和增殖速度明显加快,原代至第2代细胞形态较规则,多呈多角形,大小均一。第3代后随着传代次数的增加,细胞中梭形细胞增多,分泌和增殖能力下降,传代周期延长。第5代分裂相少见,密度稀疏,细胞形态不佳,约80%呈长梭形,分泌和增殖能力下降。SEM示第1代半月板细胞形态规则,呈多极性,表面有突起;第5代细胞形态不规则,多呈梭形。生长曲线可见第4代前半月板细胞生长速度及生长周期均相似,第5代后细胞生长速度减慢,增殖减缓。细胞化学和免疫组化染色分析胶原和蛋白聚糖的表达：随传代的进行,Ⅱ型胶原蛋白和蛋白聚糖的表达逐渐减弱而Ⅰ型胶原表达逐渐增强。结论：体外单层培养条件下,随着传代的进行,细胞活力逐渐下降,生长速度减慢,传代周期延长,逐渐变为梭形,形态不规则。体外单层培养系统中半月板纤维软骨细胞表型随传代的进行,Ⅱ型胶原蛋白和蛋白聚糖的表达逐渐减少而Ⅰ型胶原表达逐渐增多,体外单层培养条件下培养的半月板纤维软骨细胞从第3代开始逐渐失去其特异性表型,发生�
- 付维力李箭李棋唐新陈刚
- 关键词：体外培养去分化传代
