辽宁省教育厅课题基金(L2010260)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
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- 单增李斯特菌溶血素O的原核表达及纯化
- 2012年
- 目的原核表达并纯化单增李斯特菌溶血素O(Listeriolysin O,LLO)。方法 PCR扩增LLO hly基因,并插入pET-32a载体,构建重组表达质粒pET-hly,转化入大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,切胶纯化重组蛋白,并进行Westernblot分析。结果克隆的hly基因长1 515 bp,与GenBank中登录的hly基因的核苷酸序列同源性为99%;重组表达质粒pET-hly经酶切鉴定构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为55 000,表达量占细菌总蛋白的45.2%;纯化的重组蛋白可与单增李斯特菌阳性血清反应。结论已成功原核表达并纯化了LLO,为下一步诊断试剂盒的研制奠定了基础。
- 曲祖乙杨松
- 关键词：单增李斯特菌原核细胞基因表达纯化
- 单增李斯特菌定量检测方法研究被引量：3
- 2012年
- 为了建立针对动物性产品的快速、准确、定量检测单增李斯特菌的方法。根据GenBank中单增李斯特菌hlyA基因序列设计引物,以普通PCR产物10倍比例稀释液为标准品,进行Real-timePCR定量检测方法的研究。以单增李斯特菌hly基因为目标的Real-timePCR反应制得标准曲线方程为Y=-3.311X+41.162,相关系数R2=0.991,扩增效率E=96.528%。通过特异性和灵敏度试验,确定Real-timePCR检测方法特异性好、灵敏度高,最低检出剂量达到29个菌/mL。Real-timePCR检测单增李斯特菌具有快速、灵敏、高效的优点,适宜于食品中单增李斯特菌污染的调查及监测。
- 杨松曲祖乙刘永华
- 关键词：李斯特菌REAL-TIMEPCR
