国家自然科学基金(39870366)
- 作品数：3 被引量：9H指数：2
- 相关作者：柳惠图高萍冯怡李娜庞宇更多>>
- 相关机构：北京师范大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 蛋白激酶Cα对人正常肝和肝癌细胞中Ha-ras基因表达的影响被引量：3
- 2002年
- 运用基因转染技术 ,将蛋白激酶C(PKCα)cDNA正向插入的真核表达重组质粒pXJ4 1 PKCα ,导入人正常肝细胞 (L 0 2 ) ,经蛋白质免疫印迹等检验 ,表明成功构建了稳定过表达PKCα的人正常肝细胞模型 (LT3) ,用LT3和表达反义PKCα的人肝癌细胞HT6为细胞模型 ,通过RT PCR ,蛋白质印迹 (Westernblot)等分析和进一步运用自行构建的真核表达质粒prasGL3,进行荧光素酶活性检测表明 :过表达PKCα可以促进L 0 2细胞的增殖速率 ,并引起Ha ras基因转录水平上升和Ha ras启动子活性升高 ;反之 ,表达反义PKCα的BEL 74 0 2细胞增殖被抑制 ,Ha ras基因转录水平下降 ,Ha ras启动子活性降低 .通过实验我们首次观察到 ,PKCα亚类对Ha ras癌基因表达的影响与其对Ha ras启动子活性的作用有关 ,PKCα可能参与了对Ha
- 冯怡柳惠图高萍
- 关键词：蛋白激酶CΑ肝癌细胞HA-RAS基因表达
- 佛波酯对人胃癌细胞Ha-ras基因启动子及启动子结合蛋白的影响
- 2006年
- 目的探讨佛波酯(PMA)对人胃癌细胞BGC-823 Ha-ras基因启动子活性及启动子结合蛋白活性的影响。方法通过RT-PCR和运用自行构建的真核表达载体prasEYFP转染细胞进行荧光细胞检测,并应用凝胶电泳移动检测S、outhwestern blotting等方法检测PMA(100μg/L)处理BGC-823细胞72和96 h后,对Ha-ras基因表达水平、Ha-ras基因启动子活性以及对Ha-ras启动子结合蛋白的影响。结果经PMA(100μg/L)处理72和96 h,与未处理细胞相比,BGC-823细胞中Ha-ras基因表达显著降低,Ha-ras基因启动子活性分别被抑制65.2%和71.8%;同时两个Ha-ras启动子结合蛋白活性也显著降低,经检测,其分子量分别约为18 kD,35 kD。结论PMA长期处理通过降低人胃癌细胞中Ha-ras启动子结合蛋白活性使Ha-ras启动子活性被抑制,从而在转录水平上调节Ha-ras基因表达。
- 高萍王永军柳惠图
- 关键词：佛波酯人胃癌细胞BGC-823
- PMA对人肝癌细胞中Ha-ras基因启动子活性的影响及与PKC活性的相关性被引量：6
- 2002年
- 为探讨佛波脂PMA的生物作用与癌基因ras表达及与PKC信号通路的相关性,用人肝癌细胞BEL-7402为模型,以荧光素酶为报告基因观察了PMA对Ha-ras启动子活性的影响.当用100μg/L PMA长期处理人肝癌细胞BEL-7402时,可明显抑制肿瘤细胞生长,通过RT-PCR和Western Blot分析发现,PMA处理后的BEL-7402细胞中Ha-ras mRNA和蛋白水平均明显下降,进一步观察了PMA对Ha-ras基因启动子活性的影响。通过构建含有Ha-ras启动子序列的、以荧光素酶为报告基因的pGL3-ras真核表达载体,利用脂质体瞬时转染技术将其转入BEL-7402细胞中,并通过荧光素酶活性的检测,发现PMA作用48和72h后的BEL-7402细胞中,Ha-ras启动子活性分别被抑制了55％和54％,同时PKC活性分别下降了76.7％和75.7％。并进一步观察到PKCα和βⅠ蛋白水平明显降低。实验结果表明,PMA长期处理的人肝癌细胞可通过抑制Ha-ras启动子的活性使Ha-ras基因表达被抑制,并且可能与PKC信号通路有关。
- 柳惠图冯怡李娜庞宇高萍
- 关键词：PMA人肝癌细胞PKC活性蛋白激酶
