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甘蔗单花粉全基因组扩增(WGA)与SCoT分子标记研究被引量：6: 2011年; 从一个完整的甘蔗花粉囊中分离出单个花粉粒．利用特制取样器进行收集，采用碱裂解法释放单花粉DNA．裂解液可以直接作为WGA模板进行全基因组扩增．制备出单个花粉粒大量DNA。通过5SrRNA—ITS鉴定WGA产物真实性．并以目标起始密码子多态性标记对真实的WGA产物进行分析，显示出丰富的多态性。利用NTSYSpc软件分析花粉粒间遗传距离，并进行聚类分析，显示单花粉间遗传距离变幅为0．0888-0．3654，在相似系数0．187处．受试花粉粒中的36个明显分为2组．占总数的69％。说明减数分裂染色体重组过程中，有一定比例的基因位点为多数花粉粒所共有。根据SCoT标记聚类图可将所有供试花粉分为4大类．不同类花粉粒的分布具有一定的规律性．; 陈平华陈如凯许莉萍王恒波陈利平林冰施桂姣张卓高三基郭晋隆潘永保; 关键词：甘蔗全基因组扩增

抗除草剂转基因作物实时荧光定量PCR检测被引量：3: 2009年; 建立了一种以SYBR Green Ⅰ为结合染料、快速准确检测转抗除草剂基因成分的实时荧光定量PCR方法.以转基因大豆与转基因玉米标准品为材料,通过使用特异性引物和SYBR Green I结合染料实时荧光定量PCR技术,对转基因农作物中外源抗除草剂基因进行了定量检测,绘制了两种基因扩增的标准曲线图,根据标准曲线方程计算外源基因含量;并作了溶解曲线、检测方法检测灵敏度和精密度的分析.研究发现,两者标准曲线方程线性关系良好,R2值分别达到0.9939与0.9924.通过已知标准品进行验证,实测值与真值接近,与实际含量的相对偏差是6.52%和7.90%.结果表明,SYBR Green I结合染料法完全可以用于转基因农作物定量PCR检测.; 王恒波陈如凯陈平华; 关键词：SYBR 实时荧光定量PCR

甘蔗转基因改良及转基因检测机构的角色被引量：1: 2009年; 我国甘蔗转基因研究取得了长足进展,现对我国甘蔗转基因研究实践中使用的改良方法进行回顾总结,并结合国际甘蔗转基因研究的现状指出未来甘蔗转基因研究的发展方向。针对转基因研究的高度社会敏感性,阐述法定转基因检测机构对保护和促进我国甘蔗转基因研究健康发展将起到的重要作用。; 陈平华许莉萍王恒波陈由强陈如凯; 关键词：甘蔗转基因

椰乳在甘蔗组培快繁中作用的研究被引量：5: 2009年; 以种性优良但组培分化困难的3个甘蔗品种FN95-1702、FN99-2308和FN99-20169的愈伤组织为材料,以2种常用的培养基为基本培养基,分别添加4种不同体积的椰乳,采用随机区组实验设计,进行分化阶段和生根阶段培养,并对移栽幼苗成活率进行了观察。结果表明:对于不同激素配方的培养基,在分化阶段添加椰乳后甘蔗愈伤组织的分化率和芽长势均明显提高,添加椰乳的适宜体积为10%～20%,其中,以15%为最佳添加体积,可使分化率提高100%。幼苗生根阶段,添加椰乳使幼苗生根的数量减少,对移栽成活率影响不明显。不同甘蔗品种适合的培养基略有差异,实验所选用的2种培养基与椰乳之间无交互作用。; 陈平华陈舜彬陈岚凤许莉萍王恒波陈由强陈如凯; 关键词：甘蔗组培快繁

碱裂解叶片两步快速制备PCR模板技术研究被引量：5: 2010年; 广泛采用提取DNA作为PCR模板的方法主要有CTAB和SDS法2种,但步骤烦琐、耗时长。根据Taq酶储存液和PCR反应缓冲液所含K+离子、Cl-离子和Tween-20等成分,以0.05mol/LKOH为强碱裂解物、2%Tween-20为稳定剂配制碱裂解液,以0.05mol/L三羟甲基氨基甲烷盐酸(Tris-HCl)和2mmol/LEDTA为中和液,经加热裂解和中和两步制备PCR模板。以甘蔗叶片为材料,用新鲜配制含KOH和Tween-20的裂解液,将适量叶片放入一定体积的裂解液中加热裂解,再中和,形成裂解混合物。直接以裂解混合物为模板,甘蔗内源基因为靶基因,在优化KOH裂解浓度、模板体积、加热裂解时间以及添加适量聚合酶稳定剂的情况下,PCR反应稳定,重复性强。以有代表性的单子叶和双子叶植物叶片为材料,经过多种内源基因PCR反应的反复验证,证实了这种方法的广泛适用性。该方法通过两步制备PCR模板,无需DNA提取过程,使用材料少,可以实现活体PCR检测,为遗传分析和分子诊断提供简便、快速和高效的分析方法。; 陈平华王恒波许莉萍陈由强陈如凯; 关键词：KOH 碱裂解 PCR模板

宿根矮化病菌的竞争定量PCR检测方法建立被引量：5: 2009年; 利用宿根矮化病菌的特异检测引物,构建竞争定量PCR检测的非同源模板,建立宿根矮化病菌的竞争定量PCR检测方法。实验中非同源模板(竞争模板)构建是采用PCR方法对大肠杆菌基因组进行低严谨度扩增,回收合适的DNA片段并将其构建到T-esay载体上,通过测序和序列比对,除两端引物序列完全相似外,其余部分没有同源性,因此可以作为定量检测的非同源模板。通过计算非同源模板的拷贝数,进行竞争定量PCR检测宿根矮化病,建立宿根矮化病菌的标准竞争曲线和直线回归方程。本研究建立的竞争定量PCR检测方法操作简单、特异性和敏感性高,适合于宿根矮化病菌的检测,并可为其它病菌竞争定量PCR检测方法的建立提供参考。; 王恒波郭晋隆陈平华阙友雄陈如凯许莉萍; 关键词：甘蔗

球磨机高通量提取甘蔗叶片DNA研究: 2010年; 简便快速地获得高质量、高纯度的DNA模板是进行分子遗传学研究和大批量分子检测的基础。常用的液氮手工研磨提取DNA方法存在着耗时、费力、污染等诸多不足。利用从美国引进的球磨机,根据甘蔗叶片的特点,采用国产钢珠,通过优化实验步骤,建立了一种高通量制备甘蔗叶片DNA的方法,其中,叶片快速研磨使用不锈钢珠的直径为4 mm,对叶片进行液氮预冻,时间为30～45 min,叶片用量为50～100 mg,打磨时间为30～40 s。这种方法缩短了提取DNA的时间,提高了效率,而DNA质量与经典方法相当,能够满足分子生物学研究的需要。; 陈平华方静平许莉萍王恒波高三基陈由强陈如凯; 关键词：球磨机高通量甘蔗叶片基因组DNA

转基因大豆GTS40-3-2转化事件特异性PCR检测被引量：6: 2010年; GTS40-3-2是抗草甘膦转基因大豆,为建立GTS40-3-2大豆转化体特异性PCR检测方法,本研究以GTS40-3-2标准品为实验材料,根据已公布转基因大豆GTS40-3-2基因与大豆基因组连接序列信息,利用Primer5.0软件设计了5对品系特异性引物,对每对引物进行了退火温度、特异性及扩增效率的PCR检测,结果显示,5对特异性引物均能够从GTS40-3-2中扩增出大小约279bp、238bp、470bp、490bp和257bp的预期产物,可用于特异性检测转基因大豆GTS40-3-2转化事件。以转基因大豆GTS40-3-2含量为5%、2%、1%、0.5%和0.1%的标准品进行PCR灵敏度检测,结果表明5对引物的检测灵敏度均能达到0.1%。通过荧光定量PCR对5对特异性引物的Ct值与溶解曲线比较,最后选择出RRS2引物对为转基因大豆GTS40-3-2品系特异性检测的最适引物。本文结果将为我国未来转基因生物产品成分检测提供科学合理的实验参考。; 王恒波陈平华郭晋隆陈如凯许莉萍; 关键词：转基因大豆

转基因大豆Roundup Ready的高通量PCR检测被引量：1: 2008年; 以转基因大豆标准品（BF410f）为材料，以标准PCR检测方法为基础，根据不同标准检测参数的兼容性和PCR对引物退火温度的要求，设计高通量的PCR检测方法，从大豆中快速准确地检测出Lectin、CaMV35S、CP4-PSPS、NOS等转基因元件，提高了PCR检测效率，节约了时间。另通过梯度PCR仪摸索出合适的反应体系t预变性T=94℃，5min；变性温度T=94℃，30s；退火温度T=58℃，30s；延伸温度T=72℃，延伸40s。35个循环后，所有受试元件均得到了扩增，很大程度地提高检测效率，该方法对于引物理论退火温度在50—60℃范围内具有广泛的适用性。; 王恒波陈平华陈如凯郭晋隆; 关键词：转基因大豆高通量 PCR检测

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福建省科技计划重点项目(2007I0036)

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