广西青年科学基金(0339001)
- 作品数：2 被引量：13H指数：2
- 相关作者：吴全理钟宇华孙芸温济民曾达才更多>>
- 相关机构：北海市人民医院北京大学临床肿瘤学院更多>>
- 发文基金：广西青年科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 甲状旁腺激素基因治疗甲状旁腺功能低下症被引量：3
- 2006年
- 目的观察甲状旁腺激素(PTH)基因和蛋白体外表达情况,并评价其基因治疗甲状旁腺功能低下模型鼠的作用。方法(1)以脂质体将质粒pcDPG分别1次和多次转染293细胞,观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达并计算转染率;(2)转染24、48、72和96h后real-ti me定量PCR和Western blot法检测PTH基因与蛋白表达,并活性鉴定;(3)建立甲状旁腺功能低下症模型,将pcDPG质粒多次肌肉注射治疗,监测血钙和PTH值、存活时间及各器官病理变化。结果转染后24h即见GFP表达,72h达高峰,96h开始减少;多次转染后GFP表达率可达90%以上;PTHcD-NA拷贝数转染24h为5×103,72h达最高为8×104,多次转染显著增高(P<0.01);Western blot见48h和72h有PTH蛋白表达,其可对抗甲状旁腺切除小鼠抽搐症状;术后第2天血钙与PTH明显低于术前(P<0.05),pcDPG质粒大、中剂量组连续治疗48h后血钙与PTH值均恢复正常。结论重组PTH基因治疗甲状旁腺功能低下模型鼠有较好的疗效。
- 温济民钟宇华孙芸于春梅吴全理
- 关键词：甲状旁腺激素基因治疗甲状旁腺功能低下症绿色荧光蛋白用药剂量
- pcDPG基因治疗甲状旁腺功能减退症的实验研究被引量：12
- 2006年
- 目的构建甲状旁腺激素(PTH)基因的重组真核表达质粒,评价体外转染后PTH基因的表达与生物学活性,同时观察其对甲状旁腺功能减退动物的基因治疗作用。方法(1)从人胚甲状旁腺组织中克隆PTH基因,拓扑法构建其重组真核表达质粒pcDNA3.1-PTH-GFP(pcDPG),并采用酶切、聚合酶链反应(PCR)及DNA测序鉴定;(2)用脂质体转染pcDPG入293细胞,观察绿色荧光蛋白(GFP)表达并计算转染率,同时逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)验证PTH基因的表达;(3)纯化转染细胞上清中PTH蛋白,进行生物学活性鉴定;(4)建立甲状旁腺功能减退症的家兔模型,将pcDPG质粒以肌肉注射进行分组治疗,监测血钙、磷和PTH值及存活时间,通过形态学观察各器官的病理变化。结果(1)酶切与PCR结果与预期相同,测序结果与文献中序列同源性为99.3%;(2)细胞转染后24h即可见GFP表达,随时间延长而表达增强,48h转染率达38.9%和62.5%,同时RT-PCR见PTH基因表达;(3)纯化的PTH蛋白可对抗甲状旁腺切除小鼠的抽搐症状;(4)模型兔术后第2d血钙(1.71mmol/L±0.09mmol/L,1.73mmol/L±0.03mmol/L,1.75mmol/L±0.03mmol/L,1.65mmol/L±0.04mmol/L)明显低于术前(2.82mmol/L±0.21mmol/L,P<0.05),术后第2d PTH值(5.03pg/ml±0.05pg/ml,5.04pg/ml±0.05pg/ml,5.03pg/ml±0.07pg/ml,5.29pg/ml±0.03pg/ml)也明显低于术前(11.63pg/ml±1.60pg/ml),但是术后第2d血磷增高(P<0.05),pcDPG质粒大、中剂量组治疗后48h血钙、磷与PTH值均恢复至正常。结论脂质体介导的质粒pcDPG体外转染率较高,能表达有活性的PTH蛋白,同时对甲状旁腺功能减退家兔有较好的疗效,从而为甲状旁腺功能减退症基因治疗的进一步研究奠定了基础。
- 温济民钟宇华孙芸黄忠张陵武吴全理曾达才
- 关键词：甲状旁腺激素类基因疗法基因表达甲状旁腺功能减退症
