广东省自然科学基金(06112013)
- 作品数：7 被引量：5H指数：2
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- AML-M5患者树突细胞诱导活化自体外周血T细胞增殖及克隆性分析
- 2009年
- AML—M5是急性髓系白血病各型中预后较差的一种，该病好发于老年人，患者常不能耐受高强度化疗，一般治疗预后较差。由于免疫细胞具有自动识别异己抗原（包括恶性转化的突变克隆肿瘤细胞）的特点，可以敏感地追踪、识别并杀伤少量残留的肿瘤细胞，在清除微量残留白血病（MRD）等方面具有天然的优势。在传统化疗等治疗的基础上联合应用过继性细胞免疫治疗，有可能提高白血病的预后。我们利用白血病树突细胞（DC）结合CD3、
- 毛平张玉平王彩霞许艳丽应逸杜庆华谢健晋王顺清
- 关键词：克隆性分析树突细胞T细胞增殖自体外周血诱导活化微量残留白血病
- 急性白血病错配修复基因表达及启动子甲基化被引量：1
- 2011年
- 目的探讨急性白血病患者DNA修复基因(hMSH2和hMLH1基因)mRNA、蛋白表达情况及其启动子甲基化状态。方法选取56例急性白血病患者和30名健康志愿者,用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹(western blot)检测其单个核细胞错配修复基因hMSH2和hMLH1的mRNA及蛋白表达,用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)法检测hMSH2和hMLH1启动子区甲基化状态。结果与健康志愿者组比较,急性白血病患者的错配修复基因hMSH2和hMLH1均明显低表达,差异有统计学意义(P<0.05);急性白血病患者hMSH2和hMLH1甲基化阳性率为66.1%(37/56)和55.4%(31/56),明显高于健康志愿者的10.0%(3/30)和6.7%(2/30),差异有统计学意义(P<0.05);急性白血病患者hMSH2和hMLH1表达与其甲基化状态呈负相关性(rhMSH2=-0.624,P=0.000;rhMLH1=-0.589,P=0.002)。结论急性白血病患者的hMSH2和hMLH1基因呈低表达,其启动子呈高甲基化水平,急性白血病患者hMSH2和hMLH1基因表达低下与其启动子甲基化状态有关。
- 王彩霞毛平杜庆华张玉平周志衡
- 关键词：DNA甲基化急性白血病错配修复基因
- 急性白血病组蛋白乙酰化修饰及其对错配修复基因表达的调控作用被引量：2
- 2011年
- 目的探讨急性白血病患者组蛋白乙酰化修饰规律，并探索组蛋白乙酰化对错配修复基因hMSH2和hMLH1差异表达的调控作用。方法用反转录-聚合酶链反应（RT．PCR）方法检测56例急性白血病患者和30名健康志愿者单个核细胞（MNC）的错配修复基因hMSH2和hMLH1mRNA的表达，用Western blot法检测组蛋白H3、H4、去乙酰化酶（HDAC1）、hMSH2和hMLH1基因的蛋白表达情况。用组蛋白去乙酰转移酶抑制剂（TSA）诱导30例白血病患者MNC乙酰化，并检测处理后MNC的组蛋白H3、H4、HDAC1、hMSH2和hMLH1的表达状态变化。结果急性白血病组的hMSH2和hMLH1、组蛋白H3、H4的蛋白表达量分别为0．4610±0．1211、0．4013±0．1143、0．4103±0．1241和0．4251±0．1081，均明显低于健康志愿者组的蛋白表达量（0．9461±0．1841、0．9960±0．2021、0．8971±0．1194、0．9513±0．1953），差异均有统计学意义（t值分别为3．341、3．935、2．843、3．575，P〈0．05）；而急性白血病患者组的HDAC1表达（0．8841±0．2018）高于健康志愿者组的表达量（0．5142±0．1340），差异有统计学意义（t=2．634，P〈0．05）；TSA作用于白血病单个核细胞后，组蛋白H3、H4、hMSH2和hMLH1的表达上调，分别比阴性对照组表达上调2．9倍、3．4倍、1．5倍和1．6倍，而HDAC1的蛋白表达出现明显的抑制，表达下调为阴性对照组的40％。结论急性白血病患者的组蛋白乙酰化呈低表达现象，组蛋白乙酰化在急性白血病患者中对错配修复基因差异表达具有调控作用。
- 王彩霞毛平杜庆华王顺清李庆山张玉平应逸莫文健周志衡
- 关键词：白血病急性组蛋白乙酰化错配修复基因
- 急性髓系白血病患者外周血T细胞TCR Vβ亚家族表达及克隆性增殖分析
- 2009年
- 本研究探讨AML患者在初发、治疗缓解后、复发等不同疾病状态下外周血T细胞TCRVβ亚家族表达及T细胞克隆性增殖的情况,分析不同白血病细胞负荷对患者外周血T淋巴细胞数量及功能,尤其是对抗白血病功能的影响。应用RT-PCR扩增11例AML白血病患者不同疾病状态下及3名正常供者外周血的TCRBV24个家族的基因序列,通过基因扫描(genescan)的方法判断TCRBV家族的克隆表达、CDR3克隆性质,比较不同疾病状态下白血病患者外周血T细胞的Vβ亚家族的应用、克隆性增殖、T细胞的复杂性以及T细胞免疫表型的变化。结果表明:11例AML白血病患者初诊时外周血T细胞均表达部分TCRVβ亚家族,经体外诱导后TCRVβ亚家族表达增加;完全缓解期患者外周血T细胞TCRVβ亚家族数量明显增多,但未达到完全正常;4例患者在复发时TCRVβ亚家族表达数量明显下降;11例患者中有9例在初诊时外周血有1至2个TCRVβ亚家族T细胞克隆性增殖,缓解期克隆性增殖的Vβ亚家族T细胞有增加趋势,在多数病例观察到部分Vβ亚家族T细胞在初发、缓解、体外诱导扩增以及复发时仍维持克隆性增殖状态;AML白血病患者初发及复发时T细胞CDR3复杂性明显降低,呈偏态分布,而疾病缓解时T细胞复杂性有所改善。结论:AML白血病患者外周血T细胞TCRVβ亚家族呈限制性表达;在大多数病例中无论是疾病初发抑或缓解及体外诱导、甚至在疾病复发时均可观察到克隆性T细胞的存在;在部分病例中某些Vβ亚家族在上述不同疾病状态下始终维持克隆性增殖状态,部分Vβ亚家族的克隆性增殖同白血病细胞的存在相关;在疾病状态下,AML白血病患者外周血T细胞的复杂性有所降低,而疾病缓解后可部分恢复。
- 毛平罗畅如张玉平王彩霞许艳丽应逸杜庆华谢健晋
- 关键词：VΒ亚家族克隆性增殖
- 脐血间充质干细胞支持下脐血单个核细胞扩增的研究
- 2009年
- 目的探讨脐血源间充质十细胞联合外源性细胞因子对脐血单个核细胞体外扩增的支持作用。方法从脐血中分离、培养出间充质干细胞并检测其细胞表面抗原；以此间充质干细胞作为细胞滋养层。将脐血单个核细胞接种于无血清培养体系中培养18天，在第0、7、10、14及18天检测有核细胞总数、CD34＋、CD133＋细胞数、集落形成单位数和（G2＋M＋S）期细胞含量变化。结果①从脐血中分离、培养出的间充质干细胞能稳定表达CD29、CD105和CD44，但不表达CD34和CD133；②外源性细胞因子及脐血源间充质干细胞均支持脐血间充质干细胞扩增，但以细胞因子联合脐血源间充质干细胞组效果最好，在第10天上述检测指标达到峰值，分别为第0天的（6．91±1．91）、（7．75±1.24）、（6．49±1．33）、（15．62±1．29）和（28．26±6．58）倍，且维持造血至少18天。结论①从脐血中能成功分离、培养血间充质干细胞，并完成细胞表型的初步鉴定；②外源性细胞网子联合脐血源间充质干细胞可有效扩增脐血单个核细胞。
- 邓婷芬毛平王彩霞
- 关键词：脐血细胞因子间充质干细胞细胞培养
- 脐血造血细胞体外扩增过程中DNA损伤的研究
- 2010年
- 本研究检测脐血(CB)单个核细胞(MNC)体外培养DNA损伤情况,以探讨体外培养的最佳收获时机。脐血MNC分别接种于含细胞因子无血清培养体系并进行集落接种,分别在0、7、14及21天收集细胞,用流式细胞仪检测CD34+及CD133+细胞数,采用单细胞凝胶电泳试验检测培养后不同时间点脐血造血细胞及集落细胞的DNA链断裂损伤情况。结果表明,体外短期培养(14天内)时,脐血CD34+及CD133+细胞数最多,脐血细胞DNA损伤率均低于5.0%,21天时CD34+及CD133+细胞数降到低于0天的比例,细胞DNA损伤率为28.2%,DNA损伤率比0天时高(p=0.000),损伤细胞彗星尾长度明显大于0天(p=0.000);而其余各培养时间点(7天和14天)损伤细胞彗星尾长度与培养0天组损伤细胞的彗星尾长度比较,差异无统计学意义(p=0.863及p=0.253);集落培养细胞DNA损伤率均低于5.0%。结论:利用本方法进行脐血造血细胞短期(14天)培养DNA损伤率均低于5.0%,但超过14天时DNA损伤明显增加,体外培养的最佳收获时机应在14天内。
- 王彩霞毛平张玉平段华新杜庆华
- 关键词：脐血造血细胞DNA损伤体外扩增
- AML-M5b外周血T细胞TCR Vβ亚家族表达及克隆性增殖特点被引量：2
- 2007年
- 目的研究AML-M5b患者外周血T细胞TCR Vβ亚家族表达及克隆性增殖特点,并分析分选的患者T细胞经体外诱导、活化及短期培养后其TCR Vβ亚家族的利用及克隆性增殖情况。方法运用RT-PCR-基因扫描技术分析初治AML-M5b患者外周血T细胞TCR Vβ亚家族利用和克隆性增殖,免疫磁珠分选患者T淋巴细胞,体外利用自体白血病DC细胞联合CD3单抗、CD28对T细胞进行诱导、活化,并对诱导后T细胞进行TCR Vβ亚家族表达和克隆性增殖分析。结果9例患者T细胞在体外获得增殖,TCR Vβ分析显示患者外周血T细胞均表达部分Vβ亚家族,体外诱导前后的T细胞TCR Vβ亚家族表达和克隆性增殖特点不完全相同,有部分出现新的Vβ亚家族表达及克隆性增殖,有部分Vβ亚家族在诱导前后始终表现为克隆性增殖,体外杀伤性分析发现诱导后的T细胞对自体白血病细胞具有一定的识别作用。结论AML-M5患者TCR Vβ亚家族T细胞的倾斜性分布和克隆性增殖,部分Vβ亚家族T细胞在诱导前后始终保持克隆性增殖状态,可能是机体针对白血病相关抗原的特异性CTL,体外诱导活化及短期培养后患者T细胞TCR Vβ亚家族表达数量增加,并出现新的克隆性增殖Vβ亚家族T细胞,提示体外诱导活化能够产生白血病患者自体的白血病特异性CTL。
- 张玉平王彩霞许艳丽王汉平王顺清杜庆华莫文健陈小卫李庆山毛平
- 关键词：急性单核细胞白血病VΒ亚家族克隆性增殖基因扫描
