江苏省自然科学基金(BK2003422)
- 作品数：4 被引量：7H指数：2
- 相关作者：徐艳章锦才张蕴惠刘来奎江宏兵更多>>
- 相关机构：南京医科大学广东省口腔医院四川大学华西口腔医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人可溶性肿瘤坏死因子α受体真核表达载体pcDNA3.1(+)/sTNFR的构建被引量：4
- 2005年
- 目的构建人可溶性肿瘤坏死因子α受体(sTNFR)真核表达载体pcDNA3·1(+)/sTNFR,为研究人sTNFR在哺乳动物细胞中的合成与表达提供条件。方法采用体外重组技术,将sTNFR的RT-PCR纯化产物及质粒pcDNA3·1(+)DNA经kpnⅠ和xhoⅠ双酶切、胶回收纯化酶切片段后,体外连接这两个酶切片段进行定向重组,再将重组DNA转化感受态细胞E.ColiCompetent Cells JM109。复苏后,在含氨苄青霉素的LB固体培养基上筛选阳性克隆,进行酶切及测序鉴定。结果挑取的LB固体培养基上的6个单菌落经证实均为阳性克隆,即sTNFR与pcDNA3·1(+)体外重组成功。结论将sTNFR cDNA成功地插入了真核表达载体pcDNA3·1(+)中,构建了质粒pcDNA3·1(+)/sTNFR。
- 徐艳章锦才张蕴惠
- 关键词：真核载体质粒
- pEGFP-N1/hIL-1ra重组真核表达载体的构建及其在人牙龈成纤维细胞中的瞬时表达被引量：1
- 2008年
- 目的:构建重组人白细胞介素1受体拮抗剂(rhIL-1ra)基因真核表达载体pEGFP-N1/hIL-1ra,瞬时转染人牙龈成纤维细胞并检测其表达,为牙周炎症的基因治疗提供实验基础。方法:TRIzol法提取人乳腺癌组织总RNA进行RT-PCR,将纯化的扩增产物hIL-1ra与克隆载体pMD18-T连接、转化,测序正确后将重组体pMD18-T/hIL-1ra与真核表达质粒pEGFP-N1分别进行双酶切,连接后转化感受态细菌E.coliTOP10。将构建正确的pEGFP-N1/hIL-1ra重组质粒DNA瞬时转染人牙龈成纤维细胞,荧光显微镜观察绿色荧光的表达,RT-PCR方法检测其基因的表达。结果:构建的pEGFP-N1/hIL-1ra真核表达载体经PCR及双酶切鉴定均表明人IL-1ra基因已与pEGFP-N1正确重组。瞬时转染人牙龈成纤维细胞后能观察到绿色荧光,RT-PCR可得到目的片段。结论:成功构建了重组质粒pEGFP-N1/hIL-1ra,瞬时转染人牙龈成纤维细胞后检测到其基因水平的表达,为炎性细胞因子拮抗剂基因用于牙周炎抗炎治疗奠定了实验基础。
- 苏毅何雅丽王子露李建民徐艳
- 关键词：真核表达载体瞬时转染人牙龈成纤维细胞
- 重组质粒pcDNA3/sTNFR(p55)转染牙龈成纤维细胞的瞬时表达检测被引量：2
- 2005年
- 目的检测重组质粒pcDNA3/sTNFR(p55)对人牙龈成纤维细胞的转染效率及瞬时表达。方法人牙龈成纤维细胞体外原代培养并传代,重组质粒用脂质体包裹介导进行体外转染。双抗体夹心ELISA法对重组质粒在人牙龈成纤维细胞中表达产物的含量进行检测。结果人可溶性肿瘤坏死因子受体[sTNFR(p55)]在基因转染24 h后开始表达,72 h最高,转染组细胞培养液和冻融液中sTNFR(p55)表达量均高于对照组(P<0.05),1周后表达逐渐减弱,2周后仍有少量表达。结论重组质粒pcDNA3/sTNFR(p55)在人牙龈成纤维细胞系中具有表达功能,并且在细胞外及细胞内均具有特异性表达产物。
- 徐艳章锦才张蕴惠李谨刘来奎江宏兵马骏驰
- 关键词：人牙龈成纤维细胞体外转染
- 鼠胚髁突外植体无血清培养模型的建立与评价被引量：1
- 2007年
- 目的体外建立髁突软骨外植体无血清培养模型,为研究髁突软骨发育改建及各种因子对髁突软骨作用提供适宜手段。方法体外解剖分离鼠胚髁突,行外植体培养,通过组织学、免疫组织化学等方法观察髁突外植体在无血清和含血清体外培养系统中的生长和组织分化状况。结果在无血清培养20天后,髁突软骨膜与软骨层保持紧密结合,尽管部分肥大层软骨排列紊乱,阿辛蓝及Ⅱ、X型胶原染色显示培养软骨组织能形成软骨基质。在含血清的对照组中,软骨组织分化层次过程紊乱,纤维层过度增生并与软骨分离,软骨基质减少,软骨部分降解。结论此无血清培养髁突外植体模型中髁突软骨能正常发育,髁突软骨细胞增殖与分化与体内状态接近,此培养系统可用来体外研究髁突发育以及各种环境因子对髁突生长、发育、生理改建的影响。
- 刘来奎许小会徐艳江宏兵
- 关键词：髁突外植体无血清培养
