国家自然科学基金(30100073)
- 作品数：3 被引量：7H指数：2
- 相关作者：尹芳谢政军周淑芸郑维扬易正山更多>>
- 相关机构：南方医科大学南方医院成都军区昆明总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省医学科学技术研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 重组腺相关病毒载体介导的绿色荧光蛋白在急性髓性白血病患者骨髓间充质干细胞中的表达被引量：4
- 2005年
- 目的探讨重组腺相关病毒载体(rAAV-2-eGFP)是否可高效转导入骨髓间充质干细胞(BMSCs).方法从初发的急性髓性白血病(AML)患者骨髓中分离培养出BMSCs,在不同的感染复数(MOI=102,103,104,105,106,107)下用包含增强型绿色荧光蛋白(eGFP)的rAAV-2-eGFP感染BMSCs,寻找最佳的感染条件,并在转染后的不同时间点用倒置荧光显微镜以及流式细胞仪观察其表达情况.结果转染后10～14 d,eGFP在BMSCs中表达,转染效率为0.3%～2%,增加MOI亦不能明显增加转染效率.在MOI=105的条件下转染后观察了61 d,eGFP保持低水平长期稳定表达,在转染后的12～33 d,eGFP阳性的BMSCs从起始时的1.16%下降到(0.5～0.6)%,33～61 d一直维持在这一水平.结论rAAV-2-eGFP和BMSCs可用于体外基因治疗,但极低的转染效率可能是其进一步应用的障碍.
- 谢政军郑维扬徐兵宋兰林易正山尹芳周淑芸
- 关键词：重组腺相关病毒
- 重组腺相关病毒载体2型转染骨髓间充质干细胞的体外实验(英文)被引量：3
- 2005年
- 背景:目前应用于基因治疗的病毒载体中,重组腺相关病毒载体2型载体与腺病毒和反转录病毒载体比较,由于其无致病性,引起学者们的关注。目的:观察体外重组腺相关病毒载体2型转染骨髓间充质干细胞,并用其作为携带基因表达的载体进行急性髓性白血病基因治疗的可能性。设计:开放性实验。单位:南方医科大学南方医院的血液科。材料:实验于2004-02/07在南方医科大学南方医院的血液科实验室完成。本实验所用的骨髓间充质干细胞来自急性髓性白血病6例初发患者和4名健康成年志愿者的第3～5代传代细胞。方法:从初发的急性髓性白血病患者和正常健康志愿者髂后上棘做骨髓穿刺抽取6～10mL肝素抗凝的骨髓,分离培养出间充质干细胞,用包含增强型绿色荧光蛋白的重组腺相关病毒载体2型感染间充质干细胞,将获取的骨髓间充质干细胞加入含一定感染复数(感染复数=1×102,1×103,1×104,1×105,1×106,1×107)的增强型绿色荧光蛋白的重组腺相关病毒载体2型病毒载体的不完全培养液,10～14d后在相差荧光显微镜下或用流式细胞仪观测绿色荧光蛋白的表达。在体外培养条件下观察绿色荧光蛋白在经过重组腺相关病毒载体2型转导的骨髓间充质干细胞中的表达。体外观察经增强型绿色荧光蛋白的重组腺相关病毒载体2型转导并被新霉素筛选后绿色荧光蛋白在被转导的骨髓间充质干细胞中的表达。通过相差荧光显微镜下确证绿色荧光蛋白表达后,在BD流式细胞仪上检测绿色荧光蛋白的表达。主要观察指标:①增强型绿色荧光蛋白的重组腺相关病毒载体2型对骨髓间充质干细胞的转染率分析。②在转染后的不同时间点用相差荧光显微镜和流式细胞仪观察绿色荧光蛋白的表达情况。结果:①转染率分析:增强型绿色荧光蛋白的重组腺相关病毒载体2型对来源于健康志愿者和急�
- 谢政军尹芳郑维扬宋兰林易正山伍志坚周淑芸
- 关键词：基因疗法腺相关病毒载体
- rAAV-2-hGM-CSF体外转导对骨髓间充质干细胞的影响
- 2008年
- 骨髓间充质干细胞（BMSC）由于易于从骨髓分离，且经体外培养20代内其干细胞特性不变，同时体外培养的BMSC经过静脉回输后可归巢定位到骨髓、肝、脾等器官，并在体内长期生存，这些特征使其在诸多方面都存在应用的潜力。有资料表明，体外用病毒载体对BMSC进行基因修饰后，可将基因表达系统携带到体内表达。重组腺病毒由于其在基因治疗中的作用，被认为是最为安全有效的病毒载体。如携带治疗基因的重组腺病毒载体在体外能有效导入BMSC，则会为以该系统为基础的基因治疗临床应用提供实验依据和进一步研究的基础。
- 谢政军尹芳周淑芸
- 关键词：骨髓间充质干细胞重组腺病毒载体基因表达系统BMSC体外培养
