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曲美他嗪对缺氧/复氧诱导人心肌细胞凋亡的影响被引量：9: 2006年; 目的研究曲美他嗪(trimetazidine)对缺氧/复氧致人心肌细胞凋亡及其信号改变的效应。方法通过采用胶原酶/胰酶联合消化法获取人心肌细胞,采用缺氧/复氧模拟缺血/再灌注诱导细胞凋亡,选取最佳凋亡时间为缺氧24h和复氧4h,并用免疫细胞化学法检测bcl-2、bax、细胞色素C和caspase-3蛋白的变化,用原位杂交法检测bcl-2mRNA和caspase-3mRNA表达的变化,用脂肪代谢试剂曲美他嗪不同剂量干预,观察对缺氧/复氧诱导人体外培养心肌细胞凋亡及其信号bcl-2、bax、细胞色素C和caspase-3蛋白及bcl-2mRNA和caspase-3mRNA表达的影响。凋亡信号表达用平均光密度表示。用SPSS10.0进行统计分析。结果①缺氧24h/复氧4h后细胞凋亡率明显升高(18.50%±1.00%);bcl-2(0.189±0.006)下降;bax(0.240±0.002)、caspase-3(0.230±0.002)和细胞色素C(0.225±0.003)升高;bcl-2mRNA(0.300±0.003)下降;caspase-3mRNA(0.307±0.004)升高;分别与对照组比较,差异均有显著性(P<0.01)。②曲美他嗪呈剂量依赖性明显降低细胞凋亡率,降低bax、caspase-3和cytochromeC蛋白阳性率和升高bcl-2蛋白阳性率,降低caspase3mRNA表达阳性率和升高bcl-2mRNA表达阳性率(均P<0.01)。结论曲美他嗪具有抗凋亡作用,可能与升高bcl-2蛋白和bcl-2mRNA表达与降低bax、caspase-3、cytochromeC蛋白和caspase-3mRNA表达水平有关。; 杨胜利何作云刘惠亮张华冯兵王慧春肖颖彬; 关键词：细胞凋亡曲美他嗪细胞色素C

DCA干预对缺氧复氧肥大心肌细胞能量代谢及细胞凋亡的影响: 2008年; 目的:探讨缺氧复氧损伤诱导体外培养的新生大鼠肥大心肌细胞凋亡及能量代谢途径变化及药物干预的作用。方法:取体外培养的新生大鼠心肌细胞,以血管紧张素Ⅱ诱导其肥大,分4组:一组于3%O_2、5%CO_2、92%N_2三气培养箱中培养12 h,再恢复正常条件培养4 h,建立缺氧复氧损伤的肥大心肌细胞模型;另三组加入二氯乙酸盐(DCA)使其终浓度分别为10^(-3)mmol/L、10^(-4) mmol/L和10^(-5)mmol/L,再缺氧复氧相同时间。电镜观察肥大心肌细胞及凋亡细胞的超微结构变化,Hochest33342/PI荧光染色识别凋亡细胞;TUNEL法观察心肌细胞凋亡形态学特征,并记数凋亡心肌细胞数,检测心肌细胞凋亡率;以同位素液闪计数法测定丙酮酸脱氢酶(PDH)肉碱脂酰转移酶-1(CPT-1)活性,以及葡萄糖有氧氧化率,葡萄糖酵解率和脂肪酸有氧氧化率。结果:肥大心肌细胞在缺氧12 h复氧4 h,TUNEL法可检测到阳性的凋亡细胞,凋亡率为(19.99±4.88)%,肥大心肌细胞缺氧培养12h后加入DCA10^(-3)mmol/L、10^(-4)mmol/L和10^(-5)mmol/L再复氧4 h检测其凋亡率分别为(16.5±3.24)%、(17.4±3.72)%和(18.4±3.44)%;与正常心肌细胞比较,肥大心肌细胞总的PDH活性没有明显改变,但活化型PDH活性和葡萄糖氧化代谢率(GOR)显著增强,CPT-1活性和脂肪酸有氧氧化代谢率(FOR)显著降低;与对照肥大心肌细胞比较,二氯乙酸(DCA 10^(-3)mmol/L～DCA 110^(-3)mmol/L)呈剂量依赖性的升高PDH活性和GOR,抑制CPT21活性,FOR和葡萄糖酵解率(glucolysis rate,GLR)。结论:DCA对缺氧复氧损伤引起的肥大心肌细胞凋亡有抑制作用。肥大心肌细胞能量代谢向糖代谢转化,DCA可进一步增强糖有氧氧化代谢抑制脂肪酸代谢。; 徐静冯兵王建徐梓辉何作云; 关键词：二氯乙酸心肌肥大能量代谢

血管紧张素-(1-7)对二肾一夹高血压大鼠肾保护作用及其机制探讨被引量：2: 2004年; 目的　观察血管紧张素 (1 7) [Ang (1 7) ]对二肾一夹 (2K1C)高血压大鼠肾保护作用 ,并探讨其机制。方法　采用微渗泵植入技术 ,建立Ang (1 7)对高血压大鼠干预模型 ,光镜下观察肾脏病理变化 ,免疫组化法检测肾组织转化生长因子 β1 (TGF β1 ) ,放免法测定血浆及肾组织血管紧张素Ⅰ (AⅠ )、血管紧张素Ⅱ (AⅡ )浓度 ,RT PCR检测肾组织内血管紧张素Ⅱ 1型受体 (AT1 )受体mRNA水平。结果　Ang (1 7)能减轻 2K1C高血压大鼠肾小球、肾小管间质和肾血管病变 ,减少肾组织TGF β1 表达 ,对血浆及肾组织AⅠ、AⅡ浓度无显著影响 ,减少肾组织内AT1 受体表达。结论　Ang (1 7)对 2K1C高血压大鼠肾损害具有保护作用 ,其机制之一是通过下调肾组织内AT1 受体及TGF β1 表达而实现。; 叶自林何作云袁发焕于学军; 关键词：高血压 1型受体肾脏转化生长因子Β1

细胞凋亡与心力衰竭被引量：5: 2003年; 杨胜利何作云冯兵; 关键词：细胞凋亡心力衰竭心血管疾病心肌细胞

缺氧/复氧诱导培养人肥大心肌细胞凋亡模型的建立被引量：17: 2004年; 目的　建立缺氧 /复氧诱导体外培养的人肥大心肌细胞模型并观察凋亡情况。方法　用 0 .2 %胰蛋白酶 (trypsin)和0 .1 %胶原酶 (collagenase)进行消化 ,用差速粘附贴壁法、Brdu加入和人为破坏成纤维细胞法纯化心肌细胞 ,用IMDM (Iscove′s改良的Dulbecco′smedium )培养基培养 ,4～ 6d后将体外培养的人肥大心肌细胞置于 92 %氮气及 5 %二氧化碳孵箱中 ,6、1 2、2 4、4 8h缺氧后再恢复正常条件培养 4h ,造成缺氧 /复氧损伤所致细胞凋亡模型 ,分别用倒置显微镜、电镜、TUNEL法技术检测凋亡发生的情况。结果　心肌细胞经历缺氧 /复氧损伤后 ,倒置显微镜、电镜、TUNEL染色均观察到凋亡阳性细胞。TUNEL法定量检测 ,心肌细胞缺氧培养 6、1 2、2 4、4 8h后复氧 4h ,其凋亡率分别为 :(4 .5± 1 .5 ) %、(1 0 .1± 2 .0 ) %、(1 7.3± 2 .3) %和 (1 8.4± 1 .9) %。结论　缺氧 /复氧一定时间可以诱导体外培养的人肥大心肌细胞凋亡。; 杨胜利何作云冯兵王慧春肖颖彬张华; 关键词：细胞培养细胞凋亡

心脏组织工程学研究的进展:成人体外心肌细胞原代与传代培养(英文)被引量：2: 2003年; 目的:建立成人心肌细胞原代培养和传代培养的方法。方法:用0.2%胰蛋白酶(trypsin)和0.1%胶原酶(collagenase)进行消化,用差速黏附贴壁法纯化心肌细胞,用IMDM(Iscove's改良的Dul-becco'smedium)培养基培养,倒置显微镜下观察,用苔盼蓝(trypan)染色法做心肌细胞质量评价,心肌细胞进行Actin免疫组化、Myoglobin荧光免疫组化和电镜分析。结果:心肌细胞存活率为99%,24h后见有95%细胞贴壁,心肌细胞达95%,心肌细胞为圆形状、梭形状、椭圆状、棒状、星状及分叉状等;Actin免疫组化和Myoglobin荧光免疫组化强阳性,电镜见心肌细胞结构存在;原代培养第30天和传代培养第15天心肌细胞生长良好。结论:本方法可很好的用于成人心肌细胞原代培养和传代培养,为进一步建立心肌病理模型打好基础。; 杨胜利何作云冯兵张华肖颖彬王惠春; 关键词：心肌细胞原代培养传代培养

肥大心肌细胞缺氧复氧损伤特点及干预能量代谢的作用被引量：4: 2007年; 目的:探讨肥大心肌细胞缺氧复氧损伤与能量代谢途径转换的关系。方法:应用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ,0.1μmol/L)+去甲肾上腺素(NE1μmol/L)诱导培养大鼠心肌细胞肥大,以同位素液闪计数法测定葡萄糖有氧氧化率(GOR)、葡萄糖酵解率(GLR)和脂肪酸有氧氧化率(FOR),TUNEL法测定细胞凋亡。结果:(1)常氧培养时,肥大心肌细胞的葡萄糖氧化率(GOR)、糖酵解率(GLR)均高于正常心肌细胞,而脂肪酸氧化率(FOR)低于正常心肌细胞,但与细胞凋亡率一样,与正常心肌细胞比较无显著差异。(2)肥大心肌细胞缺氧6h后细胞凋亡率显著高于缺氧前,复氧后不仅细胞凋亡更显著高于缺氧前,还出现了细胞坏死。(3)正常心肌细胞和肥大心肌细胞缺氧后GLR无明显变化,GOR、FOR均低于缺氧前,缺氧6h时出现显著差异,但肥大心肌细胞GOR在缺氧2h时即显著低于缺氧前。缺氧复氧后,正常心肌细胞和肥大心肌细胞GOR均低于对应单纯缺氧时间组,而GLR和FOR轻度高于对应单纯缺氧2h组,在肥大心肌细胞均显著高于对应单纯缺氧时间组,并随缺氧时间延长更明显。(4)二氯乙酸(DCA)和曲美他嗪(TMZ)预处理后的肥大心肌细胞缺氧复氧后的GOR显著高于对应的无干预肥大心肌细胞组,GLR、FOR和细胞凋亡率均显著低于无干预肥大心肌细胞组。结论:肥大心肌细胞更易于受到缺氧复氧刺激的损伤,活化糖代谢可部分抑制这种损伤。; 冯兵徐静刘伟杨晓何作云杨惠标; 关键词：心肌肥大缺氧细胞凋亡能量代谢

缺氧复氧时肥大心肌细胞凋亡及其与能量代谢途径转换的关系被引量：7: 2005年; 心肌细胞凋亡是心肌肥大向心力衰竭转化的重要机制,因此,抑制肥大心肌细胞凋亡可能是防治心力衰竭的有效药物靶点之一。本研究以0．1μmol／L血管紧张素Ⅱ和1 μmol／L去甲肾上腺素刺激培养心肌细胞,复制心肌细胞肥大模型,用三气孵箱培养。缺氧条件是95％N2和5％CO2,控制氧分压低于5 mmHg以下,8 h后常氧培养,液闪计数法测定丙酮酸脱氢酶(pyruvate dehydrogenase,PDH)和肉碱脂酰转移酶-1(carnitine palmitoyltransferase 1,CPT-1)活性,糖氧化、糖酵解、脂肪酸氧化率,以及细胞凋亡百分率,分析肥大心肌细胞能量代谢变化与细胞凋亡间的关系。结果如下:(1)与常氧培养比较,缺氧8 h后,活化型丙酮酸脱氢酶(PDHa)和CPT-1活性均有显著下降,但复氧早期肥大心肌细胞PDHa活性有轻度进一步降低(P>0．05),而CPT-1活性却较快恢复。(2)缺氧时,正常和肥大心肌细胞葡萄糖氧化代谢率均有降低[分别下降(16±0．9)％、(48±1．1)％];复氧时,正常心肌细胞糖氧化代谢较快恢复,而肥大心肌细胞在复氧早期,糖氧化率进一步降低,此后才逐渐恢复。(3)在缺氧时,肥大心肌细胞糖酵解率仅轻度下降,但在复氧后糖酵解率迅速升高,呈爆发样达峰值后又逐渐恢复到缺氧前水平。(4)肥大心肌细胞在缺氧后脂肪酸代谢明显降低,但复氧后脂肪酸代谢呈爆发式上升,并大大高于缺血前的代谢水平。(5)缺氧时肥大心肌细胞凋亡率即显著增加,在复氧早期细胞凋亡率继续大幅度上升,此后逐渐减少。(6)预先用二氯乙酸处理肥大心肌细胞,可显著逆转缺氧复氧导致的细胞糖氧化受抑、糖酵解和脂肪酸代谢活化,同时,抑制细胞凋亡的发生。上述结果提示,缺氧复氧后的肥大心肌细胞能量代谢途径转换是导致细胞凋亡的重要原因。; 冯兵刘伟徐静何作云杨惠标; 关键词：心肌肥大细胞凋亡缺氧复氧能量代谢

能量代谢途径改变对心肌细胞凋亡的影响被引量：12: 2004年; A Review Many studies indicate that apoptosis is involved in the progression of congestive heart failure. At present, mechanisms that mitochondria regulates cell apoptosis is widely accepted.Cardiac myocytes have abundant mitochondria,which plays an important role in maintenance of cell physiological function. Recent studies find that cardiac energy metabolic shifts occur as a normal response to diverse physiologic and dietary conditions and as a component of the pathophysiologic processes which accompany cardiac hypertrophy, heart failure, and myocardial ischemia.Both clinical and experimental studies show that cardiac function can be improved and apoptosis is inhibited by intervention in energetic metabolism of myocytes. [; 刘伟冯兵; 关键词：能量代谢心肌细胞凋亡

缺氧与缺氧/复氧诱导肥大的心肌细胞凋亡: 2008年; 目的探讨缺氧与缺氧/复氧诱导肥大的心肌细胞凋亡效应。方法应用血管紧张素Ⅱ诱导培养的新生小鼠心肌细胞肥大,并给予缺氧、缺氧/复氧刺激,用Hoechst33258染色法检测细胞凋亡率。结果肥大心肌细胞在缺氧8h时即出现显著的细胞凋亡。缺氧时间延长至12h时其凋亡率较8h时显著增加(P<0.05)。肥大心肌细胞在缺氧后/复氧4h,细胞凋亡率比单纯缺氧时进一步增加(P<0.05)。缺氧或缺氧/复氧时,肥大的心肌细胞组的凋亡率均较正常心肌细胞组显著增高(P<0.05)。结论缺氧可诱导肥大的心肌细胞凋亡,且在缺氧后复氧可加重肥大心肌细胞凋亡的程度;与正常心肌细胞相比,缺氧及缺氧/复氧刺激更易引起肥大的心肌细胞凋亡。; 周小波何作云冯兵于学军; 关键词：肥大心肌细胞缺氧细胞凋亡

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