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儿童原发性肾病综合征尿源干细胞生物学特征研究被引量：5: 2018年; 目的:探讨正常儿童尿源干细胞(urine-derived stem cell,USCs)与原发性肾病综合征(primary nephrotic syndrome,PNS)患儿尿源干细胞(p-USCs)生物学特征差异。方法:收集正常儿童及PNS患儿清洁中段尿液,分离培养USCs及p-USCs,观察细胞形态差异;CCK-8检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡及干细胞表面标志物(CD24、CD29、CD34、CD73、CD90、CD105、CD146);免疫荧光及Western blot检测细胞肾系标志物(Pax2)表达;Western blot检测细胞自噬水平。结果:PNS患儿尿液中存在2种形态p-USCs:p-USCsⅠ及p-USCsⅡ。p-USCsⅠ形态与正常USCs相似:米粒样、胞体较小、排列紧密。p-USCsⅡ胞体可见少量空泡,胞体较大,散在排列。USCs、p-USCsⅠ及p-USCsⅡ最大传代次数分别为11代、8代及5代。与USCs比较,p-USCs增殖能力减弱,且p-USCsⅡ减弱更加明显(F=217.300,P=0.000);p-USCs细胞凋亡无明显差异;p-USCs干细胞表面标志物及周细胞表面标志物表达无统计学差异;p-USCs肾系标志物表达水平下降,且p-USCsⅡ下降更明显(F=26.930,P=0.001);p-USCs自噬水平下降,差异有统计学意义(F=15.060,P=0.000)。结论:PNS患儿体内存在2种不同形态尿源干细胞:pUSCsⅠ及p-USCsⅡ。与USCs相比,p-USCs形态有差异、自我更新能力降低、肾系标志物表达下降、自噬水平减弱。; 李昊石冬梅张元原龚梦佳阳海平陶立王墨李秋; 关键词：自噬

IL-1β通过加重脂质诱导的内质网应激导致人系膜细胞损伤被引量：3: 2013年; 目的:探讨白细胞介素1β(IL-1β)加重脂质诱导的内质网应激(ERS)而导致人肾小球系膜细胞(HMCs)损伤的分子机制。方法:将HMCs分为对照组、高脂组(LDL)、IL-1β+高脂组(IL-1β+LDL)及4-苯基丁酸(4-PBA)干预组(4-PBA+IL-1β+LDL)。油红O染色检测HMCs胞内脂质沉积;real-time PCR检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA水平;免疫细胞化学分析GRP78蛋白水平;Western blotting检测NF-κB p65水平;ELISA法测定细胞培养上清IL-6和TGF-β1含量。结果:与LDL组相比,IL-1β+LDL组胞内脂质沉积、GRP78 mRNA与蛋白水平、PERK mRNA水平、NF-κB p65水平及IL-6分泌量均显著增高(均P<0.05);4-PBA可减少胞内脂质沉积,降低GRP78 mRNA与蛋白及PERK mRNA水平,抑制NF-κB p65的表达,减少IL-6的分泌(均P<0.05 vs IL-1β+LDL组)。与LDL组相比,IL-1β+LDL组α-SMA mRNA表达增高(P<0.05),4-PBA可显著降低其表达(P<0.05 vs IL-1β+LDL组)。结论:IL-1β可加重脂质诱导的ERS,从而导致细胞损伤。; 施静崔晶晶阳海平刘玮万俊丽王志铁邱桂霞李秋; 关键词：炎症系膜细胞脂质沉积内质网应激

炎症状态下高脂通过NPC1介导内质网应激致足细胞损伤机制研究被引量：3: 2016年; 该研究观察了炎症状态下高脂介导的内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)在足细胞损伤中的作用,并探讨了胞内胆固醇转运蛋白C型1类尼曼-匹克蛋(Niemann-pick C1protein,NPC1)介导脂质紊乱致ERS的分子机制。将足细胞分为对照组、高脂组(low-density lipoprotein,LDL)、高脂+炎症因子组(LDL+IL-1β)、衣霉素干预组(TM)、4-苯基丁酸(4-PBA)干预组、辛伐他汀干预组(Statin)。流式细胞术检测足细胞凋亡,油红O染色检测足细胞胞内脂质沉积,荧光定量PCR检测NPC1、葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)、蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase R-like endoplasmic reticulum kinase,PERK)和活化转录因子6(activating transcription factor 6,ATF6)m RNA水平;荧光免疫技术分析GRP78的表达。结果表明,在高脂基础上,随炎症因子浓度增大和处理时间延长,足细胞的凋亡率明显上升。胞内脂质沉积以及GRP78、PERK、ATF6、NPC1 m RNA的表达在高脂加炎症因子组明显上升。与高脂加炎症因子组比较,小剂量衣霉素预处理和4-PBA能降低细胞凋亡比例,降低GRP78、PERK和ATF6 m RNA的表达,且4-PBA明显减弱GRP78荧光表达。辛伐他汀和4-PBA可以降低胞内脂质沉积和NPC1 m RNA的表达。以上结果说明,炎症状态下脂质可能通过NPC1过度转运到内质网并诱发ERS引起足细胞损伤,缓解内质网应激和降低胞内脂质沉积能减轻足细胞损伤。; 熊晓肖蕾杨雪钧闫俊丽阳海平李秋; 关键词：炎症高脂足细胞胆固醇转运内质网应激

炎症状态下高脂介导的内质网应激在系膜细胞损伤中的作用及机制被引量：2: 2013年; 目的观察炎症状态下高脂介导的内质网应激在人肾脏系膜细胞(HMCs)损伤中的作用,并探讨高脂在肾脏损伤中的作用机制。方法体外培养HMCs,分为对照组、高脂组、炎症组、高脂+炎症组、高脂+炎症+4-苯基丁酸(4-PBA)干预组(4-PBA干预组),分别培养24、48和72h。用油红O染色观察HMCs胞内脂质沉积水平;四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖变化;实时荧光定量PCR检测GRP78、纤连蛋白(FN)mRNA水平;免疫细胞化学半定量分析糖调节蛋白78(GRP78)蛋白水平。结果 (1)与对照组比较,高脂组、炎症组、高脂+炎症组HMCs胞内脂质沉积增多(P均<0.01),细胞增殖增快,且呈时间依赖性(P均<0.01),同时FN mRNA表达升高(P均<0.01);与高脂+炎症组比较,4-PBA干预组胞内脂质沉积减少(P均<0.01),细胞增殖减慢(P均<0.01),且FN mRNA表达降低(P<0.05,P<0.01)。(2)与对照组比较,高脂组、炎症组、高脂+炎症组GRP78mRNA和蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01);而4-PBA干预组GRP78mR-NA和蛋白表达较高脂+炎症组降低(P均<0.01)。(3)在24、48及72h,细胞脂质沉积水平与其增殖、GRP78蛋白及FN mR-NA水平均呈正相关(P均<0.01),GRP78蛋白表达水平与细胞增殖和FN mRNA水平呈正相关(P均<0.05)。结论炎症状态下,高脂可通过启动HMCs内质网应激致细胞损伤。; 崔晶晶施静李秋阳海平刘玮; 关键词：内质网应激肾小球系膜细胞高脂炎症

白蛋白过载加重阿霉素肾病小鼠肾损害及辛伐他汀的肾脏保护作用被引量：1: 2017年; 目的:探讨白蛋白过载是否可以通过脂质肾毒性加重阿霉素肾病小鼠肾脏损害及辛伐他汀的肾脏保护作用。方法:雄性BALB/c小鼠随机分为对照组、阿霉素肾病组(ADR组)、白蛋白过载阿霉素肾病组(ADR+BSA组)和白蛋白过载阿霉素肾病辛伐他汀治疗组(ADR+BSA+SIMV组),所有小鼠行左肾切除术,第2周末构建阿霉素肾病模型,第6周末开始构建白蛋白过载模型。0、2、6、10、14周末检测24 h尿蛋白;14周末收集标本,检测血清生化指标;光镜和电镜观察肾脏组织病理;酶比色法和油红O染色法检测肾脏组织脂质水平;real-time PCR法检测肾组织IL-1β、TGF-β1和低密度脂蛋白受体(LDLr)的mRNA表达;免疫组化法检测IL-1β和IL-17的蛋白水平;ELISA检测肾组织匀浆上清IL-17的分泌。结果:与对照组相比,ADR组肾组织IL-1β、TGF-β1、IL-17和LDLr的表达增高(P<0.05),肾组织内胆固醇含量升高(P<0.05)。ADR+BSA组较ADR组尿蛋白及血清肌酐水平增加,IL-1β、IL-17及LDLr表达均显著增加(P<0.05),肾组织脂滴沉积及肾小球硬化加重。而ADR+BSA+SIMV治疗组上述炎症因子表达下调,肾组织内胆固醇含量减少,肾小球硬化程度降低。结论:阿霉素肾病小鼠肾组织内炎症介质可能通过上调LDLr导致肾脏局部脂质沉积,加重肾脏损害;白蛋白过载可进一步加重这一进程;而辛伐他汀可通过降低炎症介质及LDLr的表达减少脂质沉积,对肾脏起保护作用。; 李瑶魏心怡闫俊丽王墨吴道奇张高福阳海平李秋; 关键词：蛋白尿阿霉素肾病低密度脂蛋白受体辛伐他汀

炎症干扰NPC1介导的胆固醇稳态平衡在原发性肾病综合征发生发展中的分子机制: 第一部分阿霉素肾病小鼠模型的建立及其体内胆固醇稳态失衡与内质网应激的关系　　目的：观察阿霉素肾病小鼠血清、肾脏组织和内质网胆固醇水平及内质网应激的情况，了解胆固醇稳态失衡与原发性肾病综合征发生发展的关系。　　方法：6-...; 杨雪钧; 关键词：原发性肾病综合征内质网应激阿霉素肾病足细胞

儿童原发性肾病综合征患者尿源干细胞分离培养技术研究被引量：2: 2016年; 该研究探讨建立儿童原发性肾病综合征(primary nephrotic syndrome,PNS)尿源干细胞(urine-derived stem cells from pediatric patients with PNS,p-USCs)分离培养技术。体外分离培养细胞,进一步观察细胞形态、分析细胞生长曲线及细胞周期、检测细胞表面标志物表达。采用茜素红及油红O染色检测细胞成骨和成脂分化潜能。结果显示,通过离心、贴壁方法从PNS患儿尿液中分离出的细胞,外观米粒样并呈对数生长;细胞表达间充质干细胞表面标志物CD24(cluster of differentiation 24)、CD29、CD73、CD90,但少数细胞表达CD105,周细胞标志物CD146表达阳性,造血干细胞标志物CD34表达阴性;细胞经成骨成脂诱导后,茜素红和油红O染色均呈阳性。以上结果表明,该研究成功建立了PNS患儿p-USCs分离培养的方法,为探讨p-USCs用于儿童PNS早期肾损伤的诊断及难治性肾病的治疗研究提供前期技术方法。; 石冬梅李昊张原元龚梦嘉阳海平杨宝辉王墨李秋; 关键词：原发性肾病综合征儿童尿液

炎症上调NPC1加重高脂负荷下HMCs胆固醇积聚致细胞损伤机制被引量：1: 2019年; 该研究观察炎症因子IL1-β对高脂负荷下人肾脏系膜细胞(human glomerular mesangial cells, HMCs)C型尼曼匹克蛋白1(Niemann-pick protein c1, NPC1)表达水平的影响,并初步探讨NPC1介导的胆固醇积聚致细胞损伤的作用机制。体外培养HMCs分为正常对照组、高脂组、高脂+炎症组。Western blot测NPC1蛋白含量;酶法测细胞及内质网胆固醇水平;CCK8法测细胞增殖;流式细胞术测细胞周期;荧光定量PCR测NPC1、GRP78、PERK、ATF6、FN、Col IV mRNA;免疫荧光技术测GRP78、FN的表达水平。予U-18666A干预NPC1的功能,观察内质网胆固醇水平、细胞增殖能力、GRP78、FN、Col IV mRNA水平的变化。结果显示,高脂促进NPC1蛋白及mRNA的表达水平,同时细胞总胆固醇及内质网胆固醇浓度增加,增殖加快、S期比例增加、内质网应激相关分子—GRP78、PERK、ATF6 mRNA及系膜基质成分—FN、Col IV mRNA水平均增加, GRP78、FN的荧光强度也增加;炎症进一步上调高脂负荷下上述各指标水平。U-18666A干预后可减轻高脂和炎症导致的内质网胆固醇积聚及细胞损伤。综上,炎症可通过上调NPC1的表达水平,加重高脂负荷下肾系膜细胞及内质网胆固醇积聚,诱发细胞损伤。; 李倩倩杨雪钧阳海平陈压西张高福李秋; 关键词：炎症高脂胆固醇沉积内质网应激系膜细胞

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国家自然科学基金(81270802)

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