国家质检公益性行业科研专项(201110034)
- 作品数：7 被引量：19H指数：3
- 相关作者：曾静魏海燕张海予张蕾程晋霞更多>>
- 相关机构：北京出入境检验检疫局北京农学院河北出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：国家质检公益性行业科研专项国家质检总局科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 环介导等温扩增方法在食品中沙门菌检测的应用和评价被引量：2
- 2013年
- 目的将环介导等温扩增检测方法应用于食品中沙门菌的检验,并在检测方法特异性、灵敏度等方面与实时荧光PCR和传统检测方法进行比较。方法针对沙门菌属高度保守的fimY基因设计环介导等温扩增检测引物并优化反应体系,在特异性、灵敏度和实际样品检测等方面与实时荧光PCR及传统检测方法比对。结果本研究建立的LAMP方法检测沙门菌93株和非目标菌31株,具有良好的特异性。在纯培养、无需增菌情况下,其检测灵敏度为6.4×102cfu/ml,与实时荧光PCR方法相当。食品基质添加试验中,环介导等温扩增方法检测低限为2 cfu/25 g样品;对45份实际食品样品检测结果表明,该方法实际样品检出率为11.1%,与实时荧光PCR及传统方法检测结果一致。结论本研究建立的沙门菌环介导等温扩增检测方法具有良好的特异性,检测灵敏度与实时荧光PCR相当,适用于沙门菌的快速筛选。
- 张蕾张海予魏海燕张西萌程晋霞曾静
- 关键词：沙门菌环介导等温扩增实时荧光PCR食源性致病菌
- 创伤弧菌鞭毛蛋白单克隆抗体的制备及在食品检测中的应用被引量：2
- 2013年
- 目的制备创伤弧菌鞭毛蛋白单克隆抗体（mAb）并建立双抗夹心ELISA。方法采用差速离心法提取创伤弧菌ATCC1．1758菌株的鞭毛蛋白，并以此为抗原免疫BALB／c小鼠，抗血清效价达到1：32000时，取脾细胞与生长良好的对数期Sp2／0骨髓瘤细胞进行融合。采用杂交瘤技术和ELISA制备并筛选分泌mAb的杂交瘤细胞株，有限稀释法对阳性孔克隆化培养。制备腹水，纯化以得到抗体。结果获得5株持续、稳定分泌抗创伤弧菌鞭毛蛋白mAb的杂交瘤细胞株，命名为VVN0．1～VVN0．5，抗体效价高达1：（2×10^6）。SDS—PAGE结果显示，提取出的鞭毛蛋白相对分子质量（丝）为44000并且纯度较高。采用VVN0．5抗体建立了创伤弧菌双抗夹心ELISA，该方法的检测灵敏度达到10^3CFU／mL菌液，通过采用12株创伤弧菌和130株非创伤弧菌进行特异性实验，12株创伤弧菌呈阳性反应，130株非创伤弧菌呈阴性反应，结果表明VVN0．5抗体具有良好的特异性。在基质添加试验中，通过增菌，最低检出限为2CFU／25g样品。结论成功制备了创伤弧菌鞭毛蛋白单克隆抗体，并将其应用于双抗夹心ELISA，该方法的检测灵敏度达到1×10^3CFU／mL菌液，与所测试的非目标菌没有交叉反应。
- 曾静程晋霞张蕾张琳张海予魏海燕刘雪松曹栋
- 关键词：创伤弧菌鞭毛蛋白单克隆抗体
- 海产品中副溶血性弧菌免疫磁分离和环介导等温扩增快速检测方法的建立被引量：4
- 2013年
- 目的采用纳米免疫磁珠分离副溶血性弧菌,建立副溶血性弧菌环介导等温扩增检测方法。方法采用副溶血性弧菌单克隆抗体,制备纳米免疫磁珠,特异性吸附副溶血性弧菌,结合环介导等温扩增技术,建立副溶血性弧菌快速检测方法。结果副溶血性弧菌纳米免疫磁珠在菌体浓度为103cfu/ml水平时,对副溶血性弧菌的捕获率达到74%。免疫磁分离结合环介导等温扩增技术,在纯培养、无需增菌情况下,检测灵敏度达到140 cfu/ml增菌液;通过对134株副溶血性弧菌和74株非目标菌的测试,环介导等温扩增技术具有良好的特异性;食品基质添加试验中,在增菌时间缩短至8 h的条件下,其检测限为2 cfu/25 g样品。结论副溶血性弧菌免疫纳米磁珠结合环介导等温扩增技术,有效缩短了增菌时间,适用于副溶血性弧菌的快速检测。
- 张蕾张海予曾静程晋霞魏海燕张西萌马丹
- 关键词：副溶血性弧菌海产品环介导等温扩增食源性致病菌
- 纳米免疫磁分离-实时荧光聚合酶链式反应快速检测海产品中副溶血性弧菌被引量：7
- 2014年
- 采用副溶血性弧菌单克隆抗体、纳米免疫磁分离技术,结合实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测方法,建立海产品中副溶血性弧菌纳米免疫磁分离-实时荧光PCR检测方法。副溶血性弧菌纳米免疫磁珠在菌体浓度为103 CFU/mL水平时,对副溶血性弧菌的捕获率达到74%。在纯培养、无需增菌情况下,该方法检测灵敏度达到140 CFU/mL;通过134株副溶血性弧菌和74株非目标菌的测试,实时荧光PCR技术具有良好的特异性;在食品基质添加实验中,其检测限为2 CFU/25 g样品,增菌时间缩短到8 h。
- 张蕾曾静魏海燕马丹程晋霞张西萌张海予
- 关键词：副溶血性弧菌
- 环介导等温扩增方法检测食品中单核细胞增生李斯特菌的效果和评价被引量：5
- 2014年
- 目的 将环介导等温扩增（loop-mediated isothermal amplification,LAMP）方法应用于食品中单核细胞增生李斯特菌的检验,并在检测方法特异性、灵敏度等方面与实时荧光PCR和传统方法进行比较.方法 针对单核细胞增生李斯特菌hly溶血素基因设计LAMP引物,应用LAMP方法对88株单核细胞增生李斯特菌、1株单核细胞增生李斯特菌参考菌株ATCC 15313、33株非目标菌进行检测；并进行食品基质添加实验及对样品进行检测,同时应用实时荧光PCR方法和ISO 11290-1方法进行平行检测.对3种检测方法的特异性、灵敏度、检测低限及实际样品检验的结果进行比较.结果 LAMP和荧光PCR对89株单核细胞增生李斯特菌的检验结果均为阳性（100％,89/89）,33株非目标菌的检测结果均为阴性（100％,33/33）.LAMP方法的检测灵敏度为2×102 CFU/ml,与实时荧光PCR方法（2×102 CFU/ml）相同,且优于ISO 11290-1方法（2×104 CFU/ml）.食品基质添加实验结果显示,3种检测方法的检测低限均为3 CFU/25 g样品.实际食品样品检测结果显示,3种方法单核细胞增生李斯特菌的检出率均为4％（2/45）.结论 本研究建立的单核细胞增生李斯特菌LAMP检测方法具有良好的特异性,检测灵敏度与实时荧光PCR相当,适用于单核细胞增生李斯特菌的快速筛选.
- 张蕾曾静马丹程晋霞张海予
- 关键词：核酸扩增技术聚合酶链反应食品单核细胞增生李斯特菌环介导等温扩增
- 采用高级微生物基因分型系统对食品中单核细胞增生李斯特菌进行同源性分析
- 2014年
- 目的采用高级微生物基因分型系统(DiversiLab系统)对食品中单核细胞增生李斯特菌进行基因型分析,将分型结果与血清型和菌株的耐药性进行比对研究。方法 DiversiLab系统是基于rep-PCR原理对微生物进行分型,将分型结果与菌株的血清型进行比较研究,同时对菌株的耐药性与rep-PCR型别进行研究。结果采用DiversiLab系统将46株单核细胞增生李斯特菌分为9个型别A^I。血清型为1/2a的分离株以A型为主,所测试的6株血清型为4b的分离株均为H型;14株呋喃妥因耐受菌株9株为A型、1株为B型、3株为C型、1株为F型,除2株血清型为3a外,其余均为1/2a。结论 DiversiLab系统分析结果,揭示了46株从食品中分离的单增细胞增生李斯特菌间的亲缘关系,rep-PCR分型结果与H抗原结合位点存在一定联系,呋喃妥因耐受菌株的DNA指纹图谱相似度高,与耐药基因有关。
- 曾静周雪婷张锡全张琳张西萌魏海燕周熙城马丹倪元颖
- 关键词：单核细胞增生李斯特菌同源性分析食源性致病菌
- 单核细胞增生李斯特氏菌食品分离株协同溶血现象研究
- 2015年
- 目的对从食品中分离的88株单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)进行协同溶血(christie,atkins and munch-petersen,c AMP)测试。方法根据食品安全国家标准食品微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌检验GB 4789.30-2010的方法进行c AMP测试。结果所测试的88株单核细胞增生李斯特氏菌分离株与GB 4789.30中描述的结果一致,即在靠近金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的接种端溶血增强,78株靠近马红球菌一端呈阴性反应。同时,发现10株分离株c AMP测试结果与传统的测试结果不同,在靠近马红球菌(Rhodococcus equi)的接种端溶血增强。结论对88株单核细胞增生李斯特氏菌分离株c AMP测试结果表明,有大约11%的菌株在靠近马红球菌的接种端溶血增强。
- 曾静刘莉周雪婷周熙城张琳张西萌魏海燕马丹倪元颖
- 关键词：单核细胞增生李斯特氏菌金黄色葡萄球菌马红球菌
