国家自然科学基金(39870301)
- 作品数：12 被引量：112H指数：6
- 相关作者：高春芳孔宪涛王皓伍严安万伟东更多>>
- 相关机构：第二军医大学福建省立医院中国人民解放军海军总医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Matrine inhibits proliferation of mouse skin fibroblasts induced by platelet-derived growth factor-BB
- 2001年
- Objective:To studythe effectof matrineon proliferationof mouseskinfibroblastsinducedby platelet-derivedgrowthfactor-BB(PDGF-BB).Methods :MouseskinfibroblastswereobtainedfromnewbornI-CRmiceandpropagatedin vitro.Proliferationof cellwasanalyzedby mitochondrialreductionof tetrazoliumsalt MTT andactualcellcount.Re sults:Matrine(50to500μg/ml)causeddose-dependentreductionof serum-stimu-latedcellgrowth.Growthinhibitionwas totallyreversedafterremovalof the drug.Matrinealso inhibited PDGF-BBinducedcellgrowthdose-dependently.Conclusion:Matrineexhibitspotentanti-proliferationeffecton mouseskinfibroblast.Thiseffectappearsto be mediatedby decreaseof PDGF-inducedgrowth.Theseresultssug-gestthatmatrinemighthavepreventiveandtherapeuticimplicationin skinfibrosis.
- 伍严安
- 关键词：皮肤成纤维细胞增殖血小板衍生生长因子
- 己酮可可碱对人α1(Ⅰ)前胶原基因启动子活性的影响被引量：8
- 2001年
- 目的 探讨己酮可可碱（ｐｅｎｔｏｘｉｆｙｌｌｉｎｅ，ＰＴＸ）对人α１（Ⅰ）前胶原（ＣＯＬ１Ａ１）基因启动子活性的作用及其机制。方法 构建含人ＣＯＬ１Ａ１基因启动于序列－２４８３－＋４２ ｈｐ片段与氯霉素乙酰基转移酶（ＣＡＴ）报告基因的重组体ｐＣＯＬＨ２．５，将其瞬时转染至人皮肤成纤维细胞，加入ＰＴＸ或／和胰岛素样生长因子－１（ＩＧＦ－１）及胰岛素，测定ＣＡＴ活性。结果 ０．４ｍｍｏｌ／Ｌ、２ｍｍｏｌ／Ｌ和１０ｍｍｏｌ／Ｌ的ＰＴＸ使ｐＣＯＬＨ２．５的活性降至对照的（８２±９）％、（５８±８）％与（３２±１３）％。ＩＧＦ－１与胰岛素能促进ｐＣＯＬＨ２．５的活性。ＰＴＸ能拮抗ＩＧＦ－１与胰岛素的这一促进作用。结论 ＰＴＸ能下调人ＣＯＬ１Ａ１启动子的活性，而ＩＧＦ－１与胰岛素能上调该启动子的活性。ＰＴＸ能拮抗ＩＧＦ－１与胰岛素的这一上调作用。
- 伍严安高春芳万伟东仲人前孔宪涛
- 关键词：己酮可可碱胰岛素样生长因子-1胰岛素启动子
- 正常皮肤与瘢痕组织成纤维细胞对细胞因子、细胞外间质和胶原基因启动子反应性比较研究被引量：8
- 2003年
- 目的比较正常和病理增生性瘢痕皮肤成纤维细胞对细胞因子、细胞外间质和胶原基因启动子的不同反应性。方法进行原代正常和增生性瘢痕皮肤的成纤维细胞培养,两种细胞分别用重组人干扰素(IFN-αA,hIFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNFα)和层黏连蛋白(LN)处理24h,BrdU-ELISA测定细胞增殖活性。两种细胞分别转染含人α1(Ⅰ)前胶原上游调控序列和报告基因氯霉素乙酰基转移酶(CAT)的重组体,48h后测定并比较两种细胞报告基因CAT的活性。结果正常成纤维细胞对IFN-αA、hIFN-γ、TNFα、LN出现增殖反应,而瘢痕成纤维细胞则对IFN-αA和LN出现抑制效应,对hIFN-γ和TNFα表现为微弱抑制或无反应性。人α1(Ⅰ)前胶原上游启动序列(-2483^+42bp,-1448^+42bp)在瘢痕细胞中启动活性低于其在正常成纤维细胞。结论正常与病理性瘢痕成纤维细胞对细胞因子、细胞外间质成分的增殖反应性及对人胶原基因启动子活性反应性上存在差异,这种反应性差异与机体的自身反馈调节及增生性瘢痕形成的病理机制和特点有关。
- 高春芳徐玲玲王皓赵文静孔宪涛
- 关键词：瘢痕组织成纤维细胞肿瘤坏死因子-Α层黏连蛋白细胞外间质
- 人皮肤成纤维细胞中α1(Ⅰ)前胶原基因转录调控研究被引量：7
- 2002年
- 为寻找纤维化形成中调控人Ⅰ型前胶原基因高水平转录的启动序列及其DNA结合蛋白 ,以人皮肤成纤维细胞α1(Ⅰ )前胶原基因转录起始点上游 - 2 5kb至 + 4 2bp的片段为靶序列 ,采用PCR、基因重组、报告基因测活、细胞基因转染技术比较不同长短启动子活性 .凝胶滞留实验 (EM SA)研究高启动活性片段相应的DNA结合蛋白 .基因转染高活性转录因子识别序列至靶细胞 ,探讨前胶原基因激活阻断的新手段 .结果表明 ,- 2 4 83～ + 4 2bp、 - 2 6 8～ + 4 2bp序列具有强启动调控活性 ,而 - 10 5～ + 4 2bp片段启动活性最低 .EMSA对高启动活性小片段DNA结合蛋白的分析提示 ,- 2 6 8～ + 4 2bp序列中存在转录因子Ap 1、Sp 1、NF 1的特异结合位点 .转染高活性转录因子识别序列Ap 1、Sp 1至靶细胞可竞争性阻断胶原基因启动转录激活 .研究提示 ,人α1(Ⅰ )前胶原基因 - 2 4 83～ + 4 2bp、 - 2 6 8～ + 4 2bp片段有高启动活性 .转录因子Ap 1、Sp 1、NF 1与 - 2 6 8～ + 4 2bp序列中相应识别序列的结合与其基础高转录活性有关 .转染高活性转录因子识别序列Ap 1、Sp
- 高春芳王皓徐玲玲赵文静孔宪涛
- 关键词：人皮肤成纤维细胞基因转录纤维化
- 非同位素法分析序列特异性DNA结合蛋白的三种方法被引量：2
- 2001年
- 目的为在转录调控水平研究蛋白质异常表达机制,利用核转录因子与相应DNA调控序列特异结合的原理,非同位素法分析细胞内序列特异性DNA结合蛋白。方法凝胶滞留实验(EMSA)采用Dig-ddUTP末端标记DNA,核蛋白粗提或纯化产物与之液相结合后,PAGE分离核蛋白并转印至尼龙膜,化学发光法检测结果,Southwestern分析方法首先采用SDS-PAGE分离核蛋白粗提或纯化产物,蛋白转印至膜上后与Dig-dUTP末端标记的DNA杂交,酶免疫学检测结果,磁性DNA结合蛋白纯化法则将靶DNA与商品化磁性DNA粒子相连,用不同的连接、洗脱条件得到序列特异性靶DNA结合蛋白,银染显示核蛋白纯化结果。结果 EMSA中由于游离DNA与DNA-蛋白复合物有不同电泳迁移率,出现滞后DNA条带提示有识别该特定DNA序列的核蛋白存在,Southwestern分析除能提示核抽提物中有无可与DNA结合的核蛋白外,还提示其中核蛋白分子质量,核蛋白粗提物经磁性DNA亲和层析后DNA结合蛋白在银染时出现较纯的特异识别该DNA序列的核蛋白条带。结论 EMSA,Southwestern分析及磁性DNA层析是3种实用的研究DNA结合蛋白的方法,配伍应用具有简便、重复性好、敏感性和特异性高、无同位素污染等优点,是转录调控水平研究疾病相关基因异常表达的有效方法。
- 高春芳王皓高国华宓庆梅孔宪涛
- 关键词：遗传学转录因子细胞病理
- 胰岛素样生长因子1和胰岛素对人α1(Ⅰ)前胶原启动子活性的影响被引量：9
- 2001年
- 目的 :探讨胰岛素样生长因子 1(IGF 1)和胰岛素对人α1(Ⅰ )前胶原 (COL1A1)基因启动子的调控作用及肿瘤坏死因子α(TNFα)、干扰素γ(IFNγ)、干扰素α(IFNα)对这一作用的影响。方法 :构建含COL1A1基因启动子序列与氯霉素乙酰基转移酶 (CAT)报告基因的重组体pCOLH0 2 7与pCOLH2 5 ,它们分别含该启动子序列 2 68～ + 4 2bp( 0 2 7kb)与 2 4 83～ + 4 2bp( 2 5kb)片段。将这 2个重组体瞬时转染人皮肤成纤维细胞 ,加入IGF 1或胰岛素 ,部分细胞还加入TNFα或IFNγ或IFNα,测定CAT活性。结果 :13nmol/LIGF 1使转染后的这 2个重组体活性分别增高 3 68倍与 4 0 4倍。 2 5 μmol/L的胰岛素亦使之分别增高 3 69倍与 3 93倍。TNFα、IFNγ、IFNα能降低IGF 1与胰岛素诱导的pCOLH2 5活性。结论 :IGF 1和胰岛素能在转录水平促进COL1A1基因的表达 ,TNF α、IFNγ、IFNα能抑制IGF 1和胰岛素的这一作用。
- 伍严安高春芳王皓万伟东仲人前孔宪涛
- 关键词：胰岛素活性启动子胰岛素样生长因子1TNFAA干扰素
- 人α2(Ⅰ)型胶原基因启动子活性研究被引量：3
- 2002年
- 目的 探索器官纤维化形成中调控Ⅰ型胶原基因高水平转录的启动片段及TGF β、PDGF BB、IGF 1等细胞因子对其活性的影响。方法 从人α2 (Ⅰ )胶原基因转录起始点上游 - 2 .4kb至+5 8bp的片段中 ,取长度不等的片段作为启动子与含氯霉素乙酰基转移酶 (CAT)报告基因的质粒组成5个重组体 ,转染上述重组体至正常人原代培养皮肤成纤维细胞 ,测定细胞CAT表达水平以比较各重组体的启动子活性 ,同时加入细胞因子 ,以测定其对Ⅰ型胶原启动序列的影响。结果 除 - 12 9～ +5 8bp序列外 ,其余 4个重组体CAT表达水平均较高 ,其中 - 2 2 92～ +5 8bp、- 1476～ +5 8bp序列具较强启动CAT表达活性 ,- 339～ +5 8bp、- 6 16～ +5 8bp片段次之。TGF β、IGF 1均能在一定程度上调人α2(Ⅰ )胶原基因启动活性。结论 人α2 (Ⅰ )胶原基因片段 - 2 2 92～ +5 8bp、- 1476～ +5 8bp、- 339～ +5 8bp有高启动活性 ,是进一步研究纤维化相关DNA结合蛋白的重要调控靶序列。TGF β、IGF 1促进胶原表达 。
- 王皓高春芳万伟东赵文静孔宪涛
- 关键词：胶原启动子转录器官纤维化基因
- 改良EMSA法分析人α1(Ⅰ)胶原基因序列特异性DNA结合蛋白被引量：6
- 2000年
- 目的 :分析人α1( )胶原基因 5′侧翼区具有较高启动调控活性序列的 DNA结合蛋白。方法 :以原代培养人瘢痕皮肤成纤维细胞为胶原产生细胞 ,采用限制性内切酶消化、DNA混合片段末端标记和增强化学发光的改良电泳迁移率改变实验(EMSA)分析人 α1( )胶原基因 5′侧翼区 - 2 6 8～ + 42 bp序列 DNA结合蛋白。结果 :在胶原产生细胞——人瘢痕成纤维细胞中存在 α1( )胶原基因 - 2 6 8～ + 42 bp序列的 DNA结合蛋白 ,其结合活性具有特异性 ,并能被 Sp- 1,NF- 1,NF- κB识别序列所竞争。结论 :改良 EMSA法可用于分析较长序列的 DNA结合蛋白 ,人 α1( )胶原基因 - 2 6 8～ + 42 bp序列中存在转录因子Sp- 1,NF- 1,NF- κB结合序列 ,这些转录因子结合位点可能与人 α1( )胶原基因 - 2 6 8～ + 42 bp序列的高启动活性有关。
- 高春芳李德岩万伟东伍严安王皓孔宪涛
- 关键词：DNA结合蛋白
- 人α1(Ⅰ)胶原基因启动子活性研究被引量：19
- 2000年
- 目的 :探索器官纤维化形成中调控 型胶原基因高水平转录的启动片段。方法 :从人α1( )胶原基因转录起始点上游 - 2 .5 kb～ + 42 bp的片段中 ,取长度不等的片段作为启动子与含氯霉素乙酰基转移酶 (CAT)报告基因的质粒组成 6个重组体 ,脂质体法转染上述重组体至正常人原代培养皮肤成纤维细胞 ,CAT- EL ISA测定细胞 CAT表达水平以比较各重组体的启动子活性。结果 :- 2 483～ + 42 bp,- 2 6 8～ + 42 bp序列具有强启动 CAT表达活性 ,而 - 10 5～ + 42 bp片段启动CAT活性最低。结论 :人α1( )胶原基因 - 2 483～ + 42 bp,- 2 6 8～ + 42 bp片段有高启动活性 ,是进一步研究纤维化相关DNA结合蛋白的重要调控靶序列。
- 王皓高春芳万伟东伍严安赵文静孔宪涛
- 关键词：启动子器官纤维化基因转录
- 苦参碱抑制血小板衍生生长因子诱导的小鼠皮肤成纤维细胞增殖被引量：55
- 2000年
- 目的 :探讨苦参碱对血小板衍生生长因子 - BB(PDGF- BB)诱导的小鼠成纤维细胞增殖的影响。方法 :取新生 ICR小鼠皮肤细胞培养成纤维细胞。用四甲基偶氮唑盐 (MTT)法和细胞计数法分析细胞增殖情况。结果 :5 0～ 2 5 0 μg/ ml的苦参碱能剂量依赖地降低血清刺激的细胞增殖 ,撤除苦参碱后抑制作用能完全逆转。苦参碱 (10 0～ 5 0 0 μg/ ml)亦能剂量依赖地抑制PDGF- BB诱导的细胞增殖。结论 :苦参碱显示了很强的抗小鼠皮肤成纤维细胞增殖的作用 ,可能通过抑制 PDGF- BB诱导增殖作用来介导的。提示苦参碱可能对皮肤纤维化疾病有潜在的预防和治疗作用。
- 伍严安高春芳王皓黄超孔宪涛
- 关键词：苦参碱皮肤成纤维细胞细胞增殖PDGF-BB
