国家重点基础研究发展计划(2011CB910604)
- 作品数：5 被引量：15H指数：3
- 相关作者：刘银坤郭坤陈冰琳江凯张舒更多>>
- 相关机构：复旦大学复旦大学上海医学院教育部更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 不同转移潜能人肝癌细胞系中GP73糖基化修饰水平比较
- 2014年
- 利用抗体亲和层析纯化不同转移潜能人肝癌细胞系中的高尔基体蛋白73(GP73),比较不同转移潜能人肝癌细胞系中GP73糖基化修饰水平,为GP73成为肝癌标志物提供依据。纯化的GP73通过质谱鉴定后,分别进行蛋白印迹(western blot)和凝集素印迹(lectin blot)分析,比较其在不同转移潜能肝癌细胞系的糖基化修饰水平。实验发现,GP73含有伴刀豆凝集素(ConA)、橙黄网胞盘菌凝集素(AAL)、小扁豆凝集素(LCA)和红腰果E型凝集素(PHA-E)识别的糖型,且单位GP73的LCA、PHA-E识别的岩藻糖和平分型糖型含量在肝癌细胞Huh7、MHCC97L、MHCC97H、HCCLM3中有升高趋势。研究表明,单位GP73岩藻糖和平分型聚糖结构随肝癌细胞的转移潜能升高而增多。
- 张舒江凯茅晓意刘银坤
- 关键词：糖基化人肝癌细胞系GP73凝集素聚糖
- 黏附分子CD44的表达及其糖基化与肝癌转移的相关性被引量：8
- 2011年
- 目的探讨CD44S及其变异体CD44v分子的表达和其糖基化与肝癌细胞侵袭转移的关系。方法用免疫组织化学法、量子点、RT—PCR、Westernblot、细胞免疫荧光染色、甲基化特异性聚合酶链反应等技术检测转移与非转移陛肝癌组织、不同转移潜能人肝癌细胞株中CD44S及其变异体CD44v的定位与表达；并应用多重凝集素印迹法检测这些细胞株中CD44v6的糖基化差异。组间均数比较应用方差分析及t检验，多组间等级资料的比较采用Wilcoxon秩和检验，各组间率的比较采用x2检验。结果免疫组织化学结果显示，CD44S蛋白定位以细胞质为主；CD44v3、CD44v4／5蛋白定位于细胞膜与细胞质；而CD44v6主要定位于细胞膜。组织芯片结果显示，相对于CD44S及其他CD44v，CD44v6在转移组的表达水平高于非转移组（阳性率为75％与46%），差异具有统计学意义（X。=8．828，P〈0．05）；量子点检测（t=2．392，P〈0．05）与血清学检测（t=2．56，P〈0．05）也证实这一结果。Westernblot结果显示，CD44v6的表达与肝癌细胞转移潜能呈正相关。此外，在MHCC97L、MHCC97H肝癌细胞中CD44v6基因启动子发生不完全甲基化，而在Hep3B细胞中则发生完全甲基化。而且，相对于Hep3B细胞，MHCC97L及MHCC97H细胞中CD44v6蛋白对朝鲜槐凝集素、黑接骨木凝集素及麦胚凝激素的亲和力较高。结论在CD44S及其变异体CD44v中，CD44v6蛋白的高表达与肝癌转移潜能的增强呈正相关；其高表达可能与基因启动子低甲基化有关。此外，CD44v6蛋白唾液酸寡糖链的增加可能与肝癌细胞转移潜能增高有关。
- 陈冰琳郭坤刘银坤
- 关键词：肿瘤转移糖基化CD44V6DNA甲基化
- 肝癌转移相关的骨桥蛋白表达及其糖基化的改变被引量：5
- 2011年
- 目的检测骨桥蛋白（OPN）在不同转移潜能肝癌细胞株及肝癌组织中的蛋白表达水平及其糖基化水平，探讨OPN糖基化改变与肝癌转移的相关陛及其意义。方法用免疫组织化学和Westemblot法检测人肝癌组织（非转移组6例、转移组7例）及不同转移潜能人肝癌细胞株（L02、Hep3B、MHCC97L、MHCC97H、HCCLM3、HCCLM6）中OPN蛋白水平l采用免疫沉淀技术纯化肝癌组织中的OPN蛋白，并采用多重凝集素印迹技术检测转移与非转移肝癌组织中OPN糖基化水平差异。数据统计采用t检验和方差分析。结果OPN在不同转移潜能肝癌细胞株的表达差异具有统计学意义（F=5．04，P〈0．01）。在肝癌组织中，转移组OPN蛋白表达水平明显高于非转移组（t=2．447，P〈0．05），相对吸光度值分别为0．69±0．21和0．45±0．14。免疫沉淀技术成功纯化肝癌组织中的OPN蛋白，后续的凝集素印迹结果显示：与非转移组相比，转移组OPN蛋白对凝集素朝鲜槐、红腰果E型、蔓陀罗、刀豆素A的亲和力较低（P值均〈0．05）。结论OPN蛋白表达水平与肝癌转移潜能增强呈正相关；OPN蛋白的α2，3-唾液酸、平分型GlcNAc、多天线、偏二天线的糖链、高甘露糖型N一糖等糖基化水平改变可能与肝癌转移潜能增高有关。
- 孙海艳李岩郭坤康晓楠孙淳王存刘银坤
- 关键词：肿瘤转移糖基化凝集素类骨桥蛋白
- CD44v6与肝细胞癌转移的关系
- 2011年
- 1991年Günthert等[1]采用针对大鼠转移性胰腺癌细胞表面糖蛋白的一种单抗,其相关抗原的cDNA序列与CD44同源,后证实为CD44v6,将这种单抗与肿瘤细胞同时注入裸鼠体内,可延缓甚至完全阻断其淋巴结和肺转移灶形成。他们最早提出了CD44v6与肿瘤转移相关,而1998年李祖国等[2]首次证明在肝细胞癌（HCC）细胞中CD44v6可能通过细胞内羧基端结构影响细胞内骨架蛋白的构象和分布，
- 陈冰琳郭坤刘银坤
- 关键词：CD44V6癌转移转移性胰腺癌CDNA序列相关抗原
- 肿瘤中糖蛋白糖链结构与功能变化的研究进展被引量：3
- 2011年
- 在多种多样的蛋白质翻译后加工中,糖基化修饰是最普遍的一种,约50%的蛋白质是糖基化修饰的。如果把O连接的葡萄糖胺修饰的细胞核内蛋白和胞质蛋白包括进来,其比例会更多;尤其是那些涉及细胞与细胞相互作用的许多分子,它们都是糖蛋白。糖蛋白糖链参与诸如细胞生长、细胞黏附、肿瘤转移等许多重要的生理和病理过程。以糖蛋白N-糖链为例,分支结构可从蛋白表面伸出〉3 nm的大型的具有分支的可移动糖簇结构,足够长的糖簇结构可形成必须的独立结构域,从而发挥重要功能。
- 江凯张舒刘银坤
- 关键词：糖链结构肿瘤转移细胞相互作用翻译后加工
