广东省科技计划工业攻关项目(2008B030301066)
- 作品数：8 被引量：19H指数：3
- 相关作者：吴燕峰王潇娉张碧红陈纯魏菁更多>>
- 相关机构：中山大学孙逸仙纪念医院中山大学附属第二医院中山大学更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 最优化细胞因子诱导杀伤细胞／自然杀伤细胞少因子培养体系的探索被引量：4
- 2009年
- 【目的】尝试使用IL-2、IL-7和IL-12的单因子、双因子和三因子组合进行杀伤细胞/自然杀伤细胞(CIK/NK)细胞扩增培养,探讨最优化CIK/NK细胞少因子培养体系的建立。【方法】采用Ficoll-Hypaque法分离脐血单个核细胞并分成6组,每组分别加入IL-2(80ng/mL)、IL-7(40ng/mL)及IL-12(40ng/mL)的单因子、双因子和三因子组合(IL-7组;IL-12组;IL-7+IL-12组;IL-2+IL-7组;IL-2+IL-12组;IL-2+IL-7+IL-12组),每组6个重复孔,共培养21d收获细胞。在细胞培养开始和第21天,实验各组取细胞悬液进行流式细胞仪检测CD3+CD56+CIK细胞及CD3-CD56+NK细胞比例。【结果】单因子培养体系的IL-12组在CIK细胞扩增比例上是各组中最高的(22.96±1.41)%,双因子体系的IL-2+IL-12组的CIK细胞扩增比例也达到(18.58±0.68)%;上述两组的CIK细胞扩增比例已经达到或基本达到使用传统多因子扩增方法所获得的比例。IL-12组的NK细胞扩增比例为(30.23±1.18)%,IL-2+IL-7组的NK细胞扩增比例也达(29.52±0.89)%。【结论】使用IL-12、IL-2+IL-12或IL-2+IL-7组合的少因子培养体系进行CIK/NK细胞的培养扩增是可行的。
- 吴燕峰林永潮黎阳王潇娉魏菁
- 关键词：细胞培养细胞因子诱导杀伤细胞自然杀伤细胞细胞因子
- 姜黄素对Saos-2细胞增殖和凋亡的影响被引量：4
- 2010年
- 目的观察姜黄素对人骨肉瘤细胞系Saos-2增殖和凋亡的影响及其对Fas蛋白表达的调控。方法体外培养人骨肉瘤细胞系Saos-2,MTT法检测不同浓度姜黄素对骨肉瘤细胞系Saos-2的生长抑制作用,Annexin V/PI染色,流式细胞术检测细胞凋亡,Hoechst 33258染色,显微镜下观察细胞凋亡的形态学变化,Western blot法检测Saos-2细胞Fas蛋白表达情况。结果 MTT检测显示姜黄素可抑制人骨肉瘤Saos-2细胞增殖,并具有时间和剂量依赖性,在姜黄素浓度为20μmol·L-1时,对细胞生长的抑制作用明显增强;流式细胞检测显示姜黄素可明显诱导骨肉瘤细胞凋亡;Hoechst33258染色可见凋亡小体;Western blot分析显示经姜黄素作用后的骨肉瘤细胞系Saos-2表达Fas较用药前明显增强。结论姜黄素对骨肉瘤细胞系Saos-2的增殖有抑制作用,并可诱导其发生凋亡,其可能通过上调Fas的表达,启动细胞凋亡程序,发挥其抗肿瘤作用。
- 吴燕峰梁新军郭宇夏侃夏仁云沈慧勇
- 关键词：姜黄素骨肉瘤增殖凋亡流式细胞术FAS
- 儿童白血病患者PTPN11基因突变及其临床意义分析被引量：1
- 2012年
- 本研究探讨儿童白血病患者PTPN11基因的突变率及其临床意义。提取初诊101例急性淋巴细胞白血病(ALL)、26例急性髓系白血病(AML)、3例慢性髓系白血病(CML)、1例幼年粒单核细胞白血病(JMML)患者外周血基因组DNA,运用聚合酶链反应(PCR)扩增PTPN11基因突变热点外显子3、8及13,并对研究病例进行临床随访,分析PTPN11基因突变的临床意义。结果表明:在101例ALL中发生PTPN11突变10例,突变率9.9%。PTPN11基因突变与初诊时年龄、性别、白细胞数、强的松敏感试验反应、临床危险度、疾病复发等因素无关(P>0.05)。在26例AML中发生突变2例,其中AML-M2及M4各1例;在3例CML中无1例突变;在1例JMML中可见PTPN11基因突变。结论:PTPN11基因3号外显子E76密码子是儿童白血病的突变热点,G503E为新检测出的JMML突变方式,PTPN11基因突变与初诊时年龄、性别、白细胞数、强的松敏感试验反应、临床危险度、早期复发等无关。
- 杨三珍陈炳强路素英张碧红薛红漫陈纯
- 关键词：白血病儿童基因突变
- HLA-A、-B、-DRB1等位基因多态性与儿童获得性再生障碍性贫血的易感相关性研究被引量：2
- 2012年
- 本研究探讨儿童再生障碍性贫血(AA)易感与HLA-A、-B、-DRB1等位基因多态性之间的相关性。获得性AA患儿80例,其中男48例、女32例,平均年龄8.1岁。在80例AA患者中非重型AA(nsAA)6例,重型AA(sAA)74例。同地区随机选择健康献血者109例作为对照。采用PCR-SSP方法进行HLA-A、-B、-DRB1高分辨等位基因分型。基因频率差异分析采用Pearsonχ2检验或连续性校正χ2检验或Fisher精确概率法。结果表明,与健康对照组比较,80例AA儿童患者中,HLA-B*48:01、DRB1*09:01表达频率升高(均P<0.05,OR分别为12.000和3.403);HLA-B*51:01、DRB1*03:01、DRB1*11:01表达频率降低(均P<0.05,OR分别为0.207、0.266和0.139)。研究还发现,在74例SAA患儿中HLA-B*48:01、DRB1*09:01的表达频率与健康对照组相比亦呈显著升高,而HLA-B*51:01、DRB1*03:01、DRB1*11:01的表达频率与健康对照组相比均显著降低。结论:HLA-B*48:01、DRB1*09:01与儿童期AA相关联,可能是罹患儿童期SAA的易感风险基因。HLA-B*51:01、DRB1*03:01、DRB1*11:01在儿童AA中低表达,是否为相对的保护基因有待进一步研究。
- 路素英肖露露罗敏张碧红陈纯
- 关键词：获得性再生障碍性贫血HLA-AHLA-BHLA-DRB1
- CIK/NK细胞对荷骨肉瘤NOD/SCID小鼠肺转移瘤的杀伤作用被引量：2
- 2013年
- 目的制备骨肉瘤U-2OS细胞NOD/SCID小鼠肺转移模型,探讨CIK/NK细胞对肺转移瘤的杀伤作用。方法 60只NOD/SCID小鼠随机分为3组(每组20只),A组:每只鼠经尾静脉接种U-2OS细胞2×106(0.2 ml)后24 h,输注CIK/NK细胞(2×107/0.2 ml);B组:每只鼠经尾静脉接种U-2OS细胞2×106(0.2 ml)后24 h,注射生理盐水0.2 ml;C组:每只鼠经尾静脉注射生理盐水0.2 ml后24 h,注射生理盐水0.2 ml。比较各组小鼠生存时间及肺部肿瘤负荷情况。结果 B组接种U-2OS细胞后29 d内小鼠全部死亡,其中16只肺部出现肉眼可见瘤块;A组接种U-2OS细胞后60 d内小鼠死亡8只,肺部均发现肉眼可见瘤块,余12只肺部均无瘤块。A组平均生存时间显著高于B组,差异有统计学意义(P<0.05),而与C组比较差异无统计学意义(P>0.05)。B组小鼠死亡时体重明显低于A组,而肿瘤细胞比例明显高于A组(P<0.05)。结论 CIK/NK细胞在NOD/SCID小鼠体内有肯定的抗骨肉瘤肺转移瘤效果。
- 杨洁文王潇娉冯东华梁新军吴燕峰
- 关键词：骨肉瘤NODSCID小鼠
- 环氧乙烷灭菌物品对生物治疗细胞致畸性研究被引量：1
- 2009年
- 目的观察经环氧乙烷灭菌处理的物品感染生物治疗细胞后对其的致畸性。方法将分离诱导的3种细胞分别接种至环氧乙烷灭菌处理保存的不同时间及高温高压灭菌的玻璃培养瓶中进行培养,分别将脐血诱导的NK/CIK细胞、人骨髓间充质干细胞和脐血CD34+细胞,接种至环氧乙烷灭菌保存至培养瓶中,分别为1 d(A组)、3个月(B组)、>6个月(C组);接种至高温高压蒸汽灭菌的玻璃培养瓶中D组为对照组;培养10 d,观察细胞的生长状况、形态、染色体断裂、断片、裂隙及核内染色体复制情况,计算染色体畸变率。结果A、B组的NK/CIK细胞的诱导率明显低于C、D两组,差异有统计学意义(P<0.05),染色体断裂、断片及裂隙数量均明显高于C、D两组,差异有统计学意义(P<0.05),而C组与D组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论经环氧乙烷灭菌处理保存至1 d和3个月的物品对细胞产生明显的损伤作用,>6个月的物品对细胞未造成明显损伤作用;环氧乙烷对细胞会产生致畸致突变作用,建议采用保存至>6个月的灭菌物品,从而保证生物治疗的安全有效实施。
- 吴燕峰王潇娉李红玉
- 关键词：环氧乙烷间充质干细胞脐血
- IL-2和IL-15刺激脐血NK细胞对K562/Jurkat细胞的杀伤活性研究被引量：4
- 2011年
- 本研究旨在探讨脐血(cord blood,CB)NK细胞的杀伤功能及细胞因子IL-2和IL-15对NK细胞杀伤K562/Jurkat细胞活性的影响。采用autoMACS及CD3阴选后CD56阳选两步免疫磁珠分选法从脐血单个核细胞纯化NK细胞,分选后NK细胞用流式细胞仪测定纯度,通过IL-2及IL-2和IL-15两种细胞因子组合培养3天,用LDH释放法检测培养前后脐血NK细胞对白血病细胞株K562和Jurkat的细胞毒活性(效靶比10∶1),并记录不同细胞因子培养体系条件下NK细胞的生长状况。结果表明,CB-MNC中CD3-CD56+细胞含量为(14.88±9.2)%,分选后CD3-CD56+细胞含量为(92.39±0.8)%;培养3天后,IL-2组NK细胞形成集落数为148.60±13.0,IL-2复合IL-15组NK细胞形成集落数为831.80±23.0,两者比较,有显著性差异;以K562为靶细胞时,新鲜纯化CB-NK的杀伤活性为(27.76±8.8)%,IL-2组杀伤活性为(61.9±9.1)%,IL-2复合IL-15组杀伤活性为(87.62±3.7)%,差别有统计学意义;以Jurkat为靶细胞时,新鲜纯化CB-NK细胞的杀伤活性为(29.32±2.5)%,IL-2组杀伤活性为(69.43±4.4)%,IL-2复合IL-15组杀伤活性为(92.95±3.2)%,差别有统计学意义。结论:脐血新鲜纯化NK细胞对K562、Jurkat细胞有一定的杀伤作用,但自发细胞毒活性较低,IL-2/IL-15刺激后杀伤活性显著提高,IL-15复合IL-2对促进脐血NK细胞的生长和提高其细胞毒活性明显优于单用IL-2。
- 张碧红吴燕峰岑丹阳魏菁刘勇陈纯
- 关键词：脐血白介素2白介素15NK细胞JURKAT细胞
- 环氧乙烷灭菌对临床生物治疗细胞体外培养的影响被引量：1
- 2009年
- 目的观察环氧乙烷灭菌处理的物品对临床生物治疗细胞体外培养过程中的影响。方法采用细胞培养法,观察了环氧乙烷灭菌处理的物品对几种细胞生长的影响。结果经环氧乙烷灭菌处理保存至1 d内和3个月的物品对细胞产生明显的损伤作用,6个月以上的物品对细胞生长的影响基本消失。结论环氧乙烷灭菌处理的物品在灭菌后3个月之内其残留物对体外细胞培养会产生有害影响,建议将灭菌后物品保存至6个月以上再用于生物治疗。
- 吴燕峰王潇娉李红玉黎阳
- 关键词：环氧乙烷灭菌物品细胞培养生物治疗
