上海市科学技术委员会科研基金(054119512)
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
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- 相关机构：复旦大学上海医学院复旦大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- raldh2基因阻抑导致斑马鱼心脏发育畸形的机制被引量：1
- 2011年
- 目的通过显微注射吗啡啉修饰的反义寡核苷酸(MO)阻抑视黄醛脱氢酶2(raldh2)基因表达,探讨raldh2基因阻抑对斑马鱼胚胎心脏发育的影响及可能的分子机制。方法根据斑马鱼raldh2基因起始密码区域序列设计合成吗啡啉修饰的反义寡核苷酸,采用显微注射方法阻抑斑马鱼胚胎raldh2基因表达。构建raldh2-EG-FP重组质粒进一步验证MO的特异性和有效性。分析raldh2基因阻抑后对胚胎发育,尤其心脏表型和功能的影响。通过胚胎整体原位杂交,分析心脏相关nppa和tbx20基因表达模式以及raldh2阻抑后对其表达的影响。结果显微注射raldh2-MO能有效地特异地阻抑斑马鱼胚胎raldh2基因表达,raldh2-MO对胚胎发育影响呈剂量依赖性。raldh2基因阻抑可导致胚胎心脏发育畸形,干扰正常的房室分化和向右环化,导致房室瓣血液反流。与野生型胚胎比较,raldh2基因阻抑组胚胎心率和心室收缩分数降低(P<0.05),心功能受损。整体原位杂交结果显示raldh2基因阻抑后nppa基因表达改变,心室部位nppa表达清晰,而心房部位表达减弱。tbx20基因在心脏、运动神经元、顶盖及视网膜表达,raldh2基因阻抑后,tbx20表达下调,在心脏表达减弱,以心房和流出道部位更显著。结论 raldh2基因在心脏早期发育的多个环节发挥重要作用,影响房室分化、心管环化和心肌收缩等。在心脏发育过程中nppa和tbx20基因表达受到raldh2基因调控,可能参与RA信号缺乏导致心脏畸形的潜在分子机制。
- 侯佳桂永浩王跃祥宋后燕
- 关键词：斑马鱼心脏发育
- 视黄醛脱氢酶2抑制剂对斑马鱼胚胎心脏发育的影响被引量：3
- 2010年
- 目的利用新型模式生物斑马鱼，采用外源性视黄醛脱氢酶2抑制剂——对二乙氨基苯甲醛（4-diethylaminobenzaldehyde，DEAB），建立维甲酸（retinoicacid，RA）缺乏的斑马鱼模型，探讨其对斑马鱼胚胎心脏发育的影响。方法在斑马鱼胚胎受精后5、8、10．3h，分别用1×10^-6、5×10^-6、10×10^-6、25×10^-6mol／L的DEAB处理，在解剖显微镜下实时观察胚胎发育的全过程，在受精后5h给予1×10^-9mol／L外源性RA干预，观察其对DEAB致畸的拮抗作用。通过胚胎心脏表型观察、心率和心室收缩分数比较以及心脏特异分子标记——心房利钠肽A基因整体原位杂交实验分析RA缺乏对胚胎心脏发育的影响。结果外源性DEAB处理后，胚胎生存率随着处理浓度增加而降低，随着处理时间点后移而升高。当DEAB浓度≥5×10^-6mol／L时，斑马鱼畸胎率为100％，异常表型一致，并能被1×10^-6mol／L外源性RA有效援救。RA缺乏时斑马鱼心脏表现出管状心脏、无向右环化或环化不完全、房室分化异常及房室管区血液反流。与野生型胚胎相比，DEAB处理后斑马鱼胚胎心率和心室收缩分数降低，心房利钠肽A基因表达改变，在心室部位表达清晰强烈，在心房部位表达明显减弱。结论DEAB影响胚胎发育有剂量依赖性和时效性，其致畸作用能被外源性RA有效拮抗。RA缺乏影响心脏早期发育的多个重要环节，导致心脏收缩功能受损。心脏心房利钠肽A基因表达受RA信号调控。
- 侯佳桂永浩王跃祥张立凤宋后燕
- 关键词：维甲酸斑马鱼心脏胚胎发育
