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黑龙江省卫生厅科研项目(2006-466)
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1
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相关作者:
白静
傅松滨
赵亮
张岂凡
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2007
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应用RNA干扰技术抑制人胃癌细胞环氧合酶-2基因的表达研究
2007年
目的研究应用RNA干扰技术进行抑制胃癌SGC-7901细胞COX-2的表达研究。方法依据siRNA设计原则,针对人COX-2的mRNA序列,设计并合成3条21bp的双链RNA,瞬时转染人胃癌细胞SGC-7901,Western印迹t验证基因沉默效率以筛选合适的siRNA序列;根据筛选出的有效序列,合成编码短发卡RNA的双链寡核苷酸,定向克隆到含有U6RNA聚合酶Ⅲ启动子的pSilencer^TM2.1-U6neo真核表达载体,稳定转染胃癌细胞SGC-7901中,经G418筛选,获得克隆细胞。结果筛选出一条有效的干扰序列,位于291—311bp,成功构建表达载体,COX-2在蛋白水平的表达明显被抑制。结论利用化学合成siRNA进行初筛,再构建shRNA表达载体,可快速实现目的基因的表达抑制。
孙凌宇
赵亮
薛英威
赵育桢
白静
傅松滨
张岂凡
关键词:
胃癌
环氧合酶-2
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