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国家转基因植物研究与产业化专项(JY03A1802): 作品数：14 被引量：183H指数：10; 相关作者：王玉成姜静杨传平刘桂丰于影更多>>; 相关机构：东北林业大学中国科学院遗传与发育生物学研究所哈尔滨师范大学更多>>; 发文基金：国家转基因植物研究与产业化专项国家重点基础研究发展计划黑龙江省科技攻关计划项目更多>>; 相关领域：生物学农业科学更多>>

二色补血草中2个金属硫蛋白基因的克隆及分析被引量：2: 2007年; 从二色补血草中分离出2个金属硫蛋白基因的cDNA全序列,分别命名为LbMT1和LbMT2.LbMT1全长为569 bp,其中5＇非编码区23 bp,3＇非编码区300 bp,开放读码框（ORF）长246 bp,编码含81个氨基酸的蛋白,相对分子质量为8070,等电点为4.7;LbMT2全长为523 bp,其中5＇非编码区61 bp,3＇非编码区216 bp,开放读码框长246 bp,编码81个氨基酸,编码蛋白的相对分子质量为8000,等电点为5.0.这2个基因编码的氨基酸都含有14个半胱氨酸Cys,分布在蛋白质的N端和C端,呈CC、CXC和CXXC形式排列.疏水性分析表明：这2个蛋白都存在35～48个氨基酸之间较强的疏水区.通过对多种植物的MT蛋白序列比对分析表明,金属硫蛋白家族在氨基酸数目上保守性差,但半胱氨酸残基（Cys）的位置和数目保守性达到100%,揭示了Cys对金属硫蛋白的功能十分重要.这2个基因已经在Genbank上注册,LbMT1基因的登录号为EF103574,LbMT2基因的Genbank登录号为EF103575.; 李红艳杨传平王玉成王丙锋; 关键词：二色补血草基因克隆金属硫蛋白

星星草cDNA文库构建和金属硫蛋白(MT-1)基因的克隆被引量：16: 2005年; 以受NaHCO3胁迫后的星星草叶片组织为材料构建了cDNA文库,文库的初始滴度为2.0×106pfu,重组率为95%,平均插入片段长度为0.8kb,扩增后文库的滴度为4.0×109pfu·mL-1。文库克隆随机测序获得了星星草的金属硫蛋白(MT-1)基因的全长cDNA序列,显示文库中含有一定量的全长基因。MT-1基因全长622bp,其中5'非翻译区57bp,3'非翻译区343bp,开放读码框长222bp,编码73个氨基酸,氨基酸序列中具有植物MT-1蛋白特有的金属响应元件(MRE)序列,MT-1蛋白的分子量为7.814kD,理论等电点为4.72。; 刘桂丰褚延广王玉成侯英杰杨传平; 关键词：星星草 CDNA文库 NAHCO3胁迫金属硫蛋白文库构建全长基因全长CDNA序列

柽柳翻译起始因子(eIF-5A)基因的克隆及原核表达被引量：11: 2005年; 根据柽柳cDNA文库中获得的eIF-5A基因片段,用RACE技术克隆出其全长cDNA序列。cDNA长度为799bp,编码159个氨基酸。将该cDNA序列克隆到原核表达载体pET28a中,获得重组质粒pET28a-eIF5A。不同浓度NaCl胁迫下大肠杆菌(Escherichiacoli)BL21(pET28a-eIF5A)比E.coliBL21(pET28a)有明显的抗盐性,前者菌株存活率在1.0mol·L-1NaCl盐胁迫下是后者的9.3倍,据此认为E.coliBL21(pET28a-eIF5A)的耐盐性可能与eIF-5A基因的表达相关。该基因的GenBank登录号为AY587771(基因)、AAT01416(蛋白)。; 杨传平姜静田梗王玉成刘桂丰; 关键词：柽柳 EIF-5A 原核表达原核表达载体翻译起始全长CDNA序列

转LEA基因烟草的耐盐性分析被引量：12: 2006年; 目的:验证柽柳LEA基因的功能,为通过基因工程手段培育耐盐植物提供基础资料。方法:对转LEA基因烟草当代(T0)和子一代(T1)分别进行不同浓度的NaCl胁迫处理,研究转基因烟草的耐盐性。结果:转基因烟草T0代组培苗耐受NaCl的临界浓度为230mmol/L,而对照耐受NaCl的临界浓度为130mmol/L以下;T1代幼苗耐受NaCl的临界浓度为150mmol/L,对照耐受NaCl的临界浓度为100mmol/L以下;在临界浓度转基因烟草的T0代、T1代根系发育良好,生长量明显高于非转基因对照烟草。结论:柽柳LEA基因的转化提高了烟草的耐盐性。; 姜静于影赵鑫刘焕臻王玉成杨传平刘桂丰; 关键词：LEA基因烟草耐盐性

一种适用范围广的总RNA提取方法被引量：58: 2006年; 介绍一种RNA提取方法,该方法以SDS、氯仿和Tris苯酚为主要提取试剂,以LiC l和乙醇为RNA沉淀试剂。分别以柽柳(木本植物)、星星草(草本植物)、天牛(昆虫)、酿酒酵母和白腐菌(真菌)为RNA提取材料,用该方法成功地提取出了它们的总RNA。获得的RNA条带清晰,A260/A280在1.8以上。通过对LiC l和乙醇沉淀RNA的效果分析表明,该方法可在10 m in内完全沉淀RNA,同时也可以同时获得纯度较高的DNA。提取的RNA质量可满足cDNA文库构建,基因芯片探针标定和RT-PCR等对RNA质量要求较高的分子生物学操作,说明这是一种应用范围广的RNA提取方法。; 王玉成张国栋姜静; 关键词：RNA

转柽柳eIF1A基因烟草的耐盐性分析被引量：12: 2006年; 目的:验证柽柳eIF1A基因的功能,为通过基因工程手段培育耐盐植物提供基础资料。方法:对转eIF1A基因的烟草和对照烟草进行不同浓度NaCl胁迫实验,测定其相对电导率、SOD活性和丙二醛含量,统计生根率、生长量和盐害程度。结果:转基因烟草的相对电导率、丙二醛含量均随盐浓度的增加而增大,但都较非转基因对照烟草低。SOD活性随着盐浓度的升高而升高,相同浓度NaCl胁迫下各转基因烟草的SOD活性均高于对照烟草的SOD活性。NaCl浓度为240mmol/L时,非转基因对照烟草不能生根,盐害指数高达67.7%;而转基因烟草均能生根,大部分转基因株系的生根率大于50%。结论:柽柳eIF1A基因的转化提高了烟草的耐盐性。; 李艳霞姜静于影王玉成刘桂丰姜莹王有菊; 关键词：烟草 NACL 耐盐性

柽柳金属硫蛋白基因的克隆及分析被引量：6: 2006年; 应用生物信息学技术从柽柳cDNA文库中分离出了一种金属硫蛋白全长cDNA序列,去除PolyA后该基因全长517bp。其中,5′非翻译区31bp,3′非翻译区267bp,开放读码框(ORF)长219bp,编码72个氨基酸,含13个半胱氨酸Cys,分布在蛋白质的N端和C端,呈CXC形式排列,基因编码蛋白的分子量为7.1kD,等电点为4.71。疏水性分析表明,蛋白的30～50个氨基酸之间有较强的疏水性,经过Pfam15.0(St.Louis(USA))分析证明,为金属硫蛋白家族基因。金属硫蛋白基因参与了植物的发育、胚胎发生、抵抗逆境胁迫等多种生理过程,是一种重要的功能基因。此基因的Genbank登录号为AY620987(基因),AAT39518(蛋白)。; 常万霞王玉成姜静杨传平; 关键词：柽柳基因克隆金属硫蛋白

cDNA微阵列技术研究干旱胁迫下柽柳基因的表达被引量：17: 2007年; 运用cDNA微阵列技术研究干旱胁迫下柽柳(Tamarix androssowii)基因的表达。分别将Cy5和Cy3两种荧光染料标记在干旱处理和对照的柽柳cDNA上,并与载有柽柳基因的微阵列进行杂交,通过计算机对芯片进行扫描和分析研究干旱胁迫下基因的表达。共获得了47个下调表达和62个上调表达的基因。Blastx分析表明这些基因按功能可以分为脱水保护、信号传导与调控、活性氧清除、光合作用、代谢、核糖体蛋白、蛋白质的分解与再生等几大类别。同时,发现了一些与干旱胁迫相关的功能未知基因和新基因。从而揭示了柽柳具有活性氧消除、代谢调节、脱水保护、蛋白质降解与再生等抗旱途径,并阐述了干旱胁迫前后柽柳基因的差异表达。; 王玉成李红艳杨传平张国栋; 关键词：基因芯片柽柳干旱胁迫基因表达

转柽柳晚期胚胎富集蛋白基因烟草的耐低温性分析被引量：14: 2006年; 目的:验证转柽柳晚期胚胎富集蛋白(LEA蛋白)基因烟草对低温的忍耐程度。方法:采用低温方式,对转LEA蛋白基因烟草的11个株系及非转基因对照烟草组培苗和大棚盆栽苗进行胁迫处理,测定其相对电导率和丙二醛含量。结果:烟草组培苗在非胁迫条件下,转基因和非转基因对照烟草的相对电导率、丙二醛含量无显著差异;在0℃胁迫条件下,非转基因对照烟草的相对电导率和丙二醛含量均明显高于转基因烟草。大棚盆栽烟草在-4℃条件下,各转基因烟草的相对电导率、丙二醛含量与0℃胁迫时均变化不大;但非转基因对照烟草相对电导率高于0℃胁迫的25.2%,丙二醛含量高于0℃胁迫的59.29%。结论:柽柳LEA蛋白基因的导入提高了烟草的耐低温能力。; 林士杰李俊涛姜静白爽于影赵鑫王玉成; 关键词：LEA蛋白烟草耐低温

差异显示技术研究NaHCO_3胁迫下星星草基因表达被引量：19: 2005年; 用差异显示技术研究NaHCO3胁迫下星星草(Puccinelliatenuiflora)基因的表达。经ReverseNorth-ern检测,获得了7个差异表达的基因片段。其中,6个为胁迫后诱导表达,1个为胁迫后抑制表达。序列同源性分析表明,胁迫诱导表达的6个基因片段中,1个与钙依赖性蛋白激酶(CDPKs)基因同源性较高,其余5个可能为新序列,胁迫后抑制表达的基因片段与假定的adaptor蛋白基因同源性较高。本研究为进一步研究星星草的抗盐机理奠定了基础。; 王玉成杨传平刘桂丰姜静; 关键词：差异显示技术星星草胁迫基因表达钙依赖性抗盐机理

国家转基因植物研究与产业化专项(JY03A1802)

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