国家科技支撑计划(2010BAD04B02)
- 作品数：12 被引量：27H指数：3
- 相关作者：金宁一田明尧鲁会军田宇飞朱鸿飞更多>>
- 相关机构：军事医学科学院吉林农业大学吉林大学更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划公益性行业(农业)科研专项农业部动物疫情监测与防治项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 三种出血热病毒的荧光基因芯片检测方法的建立被引量：1
- 2016年
- 为建立可同时检测新疆出血热病毒(CCHFV)、裂谷热病毒(RVFV)、拉沙病毒(LSV)的荧光基因芯片,分别针对CCHFV和RVFV的S基因、LSV的NP基因,应用生物学软件设计了3对引物与6条探针。运用多重PCR扩增和标记目的片段,将其与基因芯片杂交,最后扫描分析结果。分别对杂交温度与杂交时间进行条件优化,最后对基因芯片的特异性、敏感性和重复性进行评估。结果显示,设计的所有探针都可以与目的片段特异性杂交,探针1a与1b可检测到CCHFV,探针2a与2b可检测到RVFV,探针3a与3b可检测到LSV。相比多重PCR,荧光基因芯片检测CCHFV的灵敏度提高了10倍,检测RVFV的灵敏度提高了100倍,检测LSV的灵敏度提高了100倍。结果表明,本试验建立的同时检测3种出血热病毒的荧光基因芯片检测方法特异性高、敏感性强,可用于这3种病毒的快速检测与甄别。
- 曹佳媛田明尧崔卓栋柴丹范园园赵飞张艳芳金宁一
- 关键词：新疆出血热病毒拉沙病毒多重PCR
- 乙型脑炎病毒可视化分型基因芯片的制备被引量：2
- 2014年
- 目的:制备乙型脑炎病毒(JEV)可视化分型基因芯片。方法:根据JEV的基因组序列,应用生物学软件设计JEV分型引物及探针,制备其可视化分型基因芯片;用生物素标记的引物PCR扩增目的片段,并与固定于玻片上的探针杂交,加入链霉亲和素标记的纳米金,银增强实现可视化;进行特异性、灵敏性及重复性试验。结果:探针特异地与相应的标记目的基因片段杂交,并在芯片上呈现较强的阳性杂交信号;2号探针能特异性检出JEV,3、4号探针可分别对Ⅰ型和Ⅲ型JEV进行分型;芯片对JEV质粒检测的灵敏度达105拷贝/mL;以蓝耳病病毒等5种病毒为对照,芯片只对JEV响应,具有特异性;制备的基因芯片具有批间、批内重复性。结论:制备的基因芯片具有高特异性、灵敏性及重复性,可以快速、准确、高通量地对JEV进行可视化分型检测。
- 薛斐辛舒田宇飞孙文超温树波阎富龙盛媛王茂鹏朱羿龙田明尧金宁一
- 关键词：乙型脑炎病毒基因型基因芯片可视化
- 甲型H1N1与季节性H1N1流感病毒检测基因芯片的制备与初步应用被引量：10
- 2010年
- 建立DNA微列阵技术检测甲型H1N1和季节性H1N1流感病毒的方法,进而探讨该方法用于检测临床标本的可行性。通过生物医学数据库甲型H1N1流感病毒及季节性H1N1亚型流感HA与NA基因进行检索和筛选,应用分子生物学软件,进行序列分析、引物及探针设计,并进行验证。试验所设计的探针可以对甲型H1N1流感与季节性H1N1流感病毒进行区分,用该方法检测了长春市CDC送检的6份疑似甲型H1N1流感病毒临床病例,4份阳性,检测结果同实时荧光定量PCR方法一致。结果表明,利用本研究建立的DNA微列阵技术检测甲型H1N1流感病毒方法,特异性和敏感性强,可作为甲型H1N1流感病毒临床标本检测方法。
- 孙珊珊沈国顺田明尧鲁会军李昌李霄颜雯谭磊李洋韩佳丽金宁一
- 关键词：甲型H1N1流感病毒核酸探针
- 基于甲病毒复制子的猪繁殖与呼吸综合征DNA疫苗的构建及在BHK-21细胞上的表达特性
- 2013年
- 以猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)FZ06A株全长cDNA为模板,扩增并修饰GP3、GP5、M蛋白的基因,同时融合牛疱疹病毒VP22基因,构建了基于甲病毒复制子的PRRSV DNA疫苗pSCA-VPm3、pSCA-VPm5、pSCA-VP6和pSCA-V56。将其分别转染BHK-21细胞,通过检测转染细胞中目的基因的mRNA水平、目的蛋白的表达水平和转染细胞的凋亡情况,对该疫苗的体外表达特性进行初步研究。结果显示,PCR扩增得到长度分别为765、603、525bp的GP3、GP5、M蛋白的基因。经置换、敲除、融合VP22基因等修饰后获得长度分别为1 545、1 386、1 320bp的修饰后基因。疫苗转染细胞后,用RT-PCR能检测到目的蛋白的mRNA。IFA和Western-blot结果显示,转染细胞中均有目的蛋白表达,转染48h后细胞发生核固缩,甚至核裂解现象。证实,成功构建了基于甲病毒复制子的疫苗pSCA-VPm3、pSCA-VPm5、pSCA-VP6和pSCA-V56,在转染的BHK-21细胞中能实现目的蛋白的表达,且能诱导转染细胞发生凋亡。
- 梁欠欠侯绍华李秀岭贾红袁维峰鑫婷孙建涛朱鸿飞
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒
- 基于甲病毒复制子的PRRSV DNA疫苗在小鼠体内诱导的免疫应答
- 2013年
- 本研究旨在构建含PRRSV FZ06A株GP3、GP5、M蛋白修饰后基因的复制子疫苗pSCA-Km5、pSCAVPm3、pSCA-VPm5、pSCA-VP6和pSCA-V56,研究其特异性表达目的蛋白的能力和在小鼠体内诱导免疫应答的能力。将构建的复制子质粒和空载体以100μg·只-1的剂量免疫小鼠,免疫3次,监测血清中特异性抗体和中和抗体水平及淋巴细胞经特异性抗原刺激后的增殖情况和释放IFN-γ、IL-4的水平。结果显示,各疫苗均能在转染细胞中高效表达目的蛋白。免疫小鼠,pSCA-VPm3、pSCA-VP6能引起较好的细胞免疫应答,但血清中未检测到特异性抗体。pSCA-Km5、pSCA-VPm5血清中能检测到低水平特异性抗体,但引起的细胞免疫较pSCA-VPm3、pSCAVP6低。pSCA-V56和pSCA-VPm5-PEI均能诱导细胞免疫反应和体液免疫反应,但体液免疫水平低于pSCAVPm5。pSCA-VPm5-PEI抗体水平在首免后7周突然降低,至首免后10周,无特异性抗体再次产生。所有免疫小鼠中未能检测到中和抗体。结果表明,构建的基于甲病毒复制子的PRRS DNA疫苗能诱导动物机体产生一定水平的细胞免疫和体液免疫,有望成为具有开发价值的PRRS标记疫苗。但各目的基因所能诱导机体产生体液免疫和细胞免疫的能力不同。
- 梁欠欠侯绍华贾红袁维峰郭晓宇朱鸿飞
- 关键词：PRRSV小鼠免疫应答
- 中药复方制剂治疗急性感染弓形虫小鼠的效果研究被引量：1
- 2014年
- 观察研制的中药复方制剂治疗急性感染弓形虫小鼠的效果。在测定感染弓形虫小鼠最小致死量的基础上,比较不同剂量的中药复方制剂(35、25和15 g/kg)和磺胺间甲氧嘧啶钠(300、200和100 mg/kg)的疗效。为进一步验证治疗剂量的效果,每只鼠经腹腔感染25个弓形虫速殖子后4 h,鼠逐只经胃灌服25 g/kg中药复方制剂或200 mg/kg磺胺间甲氧嘧啶钠,每日2次,连用5 d,同时设感染不用药组与空白对照组,以小鼠存活率与平均存活时间、腹腔液中虫体数、组织病变程度以及SOD活性等指标评价药物效果。不同剂量治疗效果的比较显示,中药高剂量组、中剂量组与磺胺间甲氧嘧啶钠中剂量组的小鼠存活率、平均存活时间及腹腔液中虫体数相近,三者间差异不显著(P>0.05)。验证试验显示,中药复方制剂组(25 g/kg)与磺胺间甲氧嘧啶钠组(200 mg/kg)的小鼠存活率、平均存活时间、腹腔液中虫体数和血清SOD活性相近,两者间无显著差异(P>0.05),两者均能减轻肝、肺、脾的组织病变。中药复方制剂具有一定的抗弓形虫效果,25 g/kg的剂量效果最佳。
- 张步彩陶建平蒋春茂魏宁於敏
- 关键词：刚地弓形虫中药复方制剂小鼠
- 基于甲病毒复制子的犬瘟热核酸疫苗的构建及表达性研究
- 2013年
- 本试验利用T-A克隆技术,构建克隆载体pEASY-Blunt-F,BamHⅠ酶切pEASY-Blunt-F,回收F基因,将其克隆至pSCA1真核表达载体中,获得重组质粒pSCA1-F。经DNA测序、限制性内切酶分析和PCR鉴定,结果表明重组质粒pSCA1-F成功构建。通过间接免疫荧光试验和Western blotting证实F基因在转染细胞中表达。此外,细胞凋亡的检测结果表明,pSCA1-F能引起转染的细胞发生凋亡。
- 孙建涛侯绍华于萍朱鸿飞梁欠郝志明
- 关键词：核酸疫苗犬瘟热病毒F基因
- 5种中药对急性感染弓形虫小鼠的治疗效果被引量：8
- 2015年
- 首先,测定感染小鼠最小致死量;然后,通过体内安全性试验确定各种药物治疗剂量;最后,评价5种中药对急性感染弓形虫小鼠的治疗效果,即:各药物组每只小鼠经腹腔感染25个弓形虫速殖子后4h,小鼠逐只经胃灌服剂量为25g/kg的白牛胆、垂花香薷、黄皮叶或桦褐孔菌,或10.4mg/kg蟾酥、200mg/kg磺胺间甲氧嘧啶钠,每日2次,连用5d,同时设感染不用药组和空白对照组,以小鼠存活率与平均存活时间、腹腔液中虫体数、组织病变程度以及SOD活性等指标评价药物效果。结果显示,磺胺间甲氧嘧啶钠、蟾酥、桦褐孔菌、黄皮叶、白牛胆、垂花香薷组的小鼠存活率分别为66.67%、61.11%、50.00%、5.56%、0%和0%。蟾酥、桦褐孔菌与磺胺间甲氧嘧啶钠组的小鼠平均存活时间、腹腔液中虫体数和血清SOD活性相近,三者间无显著差异(P>0.05),均显著好于黄皮叶、白牛胆、垂花香薷和感染不用药组(P<0.05)。在磺胺间甲氧嘧啶钠组和蟾酥组在肺脏仅出现肺泡隔毛细血管轻微充血,在肝脏和脾脏无明显病变或病变不明显;桦褐孔菌组的肝脏也无明显病变;其他治疗组的脾脏均有不同程度坏死。结果表明,蟾酥与桦褐孔菌的抗弓形虫效果与磺胺间甲氧嘧啶钠相近,白牛胆、垂花香薷和黄皮叶的抗弓形虫效果不明显。
- 张步彩陶建平蒋春茂魏宁王荣林於敏
- 关键词：小鼠刚地弓形虫中药疗效
- 基孔肯雅病毒和辛德毕斯病毒可视化基因芯片与荧光基因芯片的建立被引量：1
- 2014年
- 根据GenBank中收录的基孔肯雅病毒和辛德毕斯病毒E蛋白基因序列,设计及筛选针对2种病毒的寡核苷酸探针及引物,制备基孔肯雅病毒与辛德毕斯病毒可视化基因芯片与荧光基因芯片,对芯片的灵敏性、特异性进行了验证,并将可视化基因芯片、荧光基因芯片进行灵敏性比较.结果显示,制备的两种基因芯片都能检测到基孔肯雅病毒和辛德毕斯病毒特异性杂交信号.可视化基因芯片、荧光基因芯片检测两种病毒质粒的灵敏度达到9.1×103copies/mL,6.8×101copies/mL和9.1×104copies/mL,6.8×103copies/mL,与普通PCR比较差异显著.荧光基因芯片灵敏度是PCR方法的10倍,可视化基因芯片是荧光基因芯片灵敏度的100倍.模拟病毒检测过程特异性检验证明,可视化基因芯片都具有良好的特异性.本试验建立了基孔肯雅病毒与辛德毕斯病毒两种特异的可视化和荧光基因芯片检测方法,两种方法灵敏度高、特异性强,适用于基孔肯雅病毒与辛德毕斯病毒的流行病学调查和种特异性鉴定.
- 薛斐田明尧辛舒任静强孙文超阎富龙温树波鲁会军田宇飞金宁一
- 关键词：基孔肯雅病毒辛德毕斯病毒基因芯片可视化
- N亚型流感病毒分型基因芯片检测方法的建立被引量：1
- 2011年
- 利用生物信息学软件对流感病毒9种N亚型基因序列进行分析筛选,设计用于9种N亚型流感病毒基因芯片分型的特异性探针,制备了针对N1~N9亚型流感病毒的鉴定基因芯片,对9种N亚型流感病毒基因芯片分型检测方法进行初步研究。结果表明：所建立的N亚型流感病毒分型芯片检测方法可以检测A型流感病毒,可对N1~N9亚型进行特异性区分,待检样品的拷贝数需大于1×102个/μL,并且重复性好,稳定性高。
- 杨晓琳彭丽萍田明尧孙珊珊龙川金宁一
- 关键词：流感病毒基因芯片
