广东省自然科学基金(9151008901000199)
- 作品数：10 被引量：10H指数：2
- 相关作者：韦曦吴博白文芳张鸣生张芳更多>>
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- 特异性多能转录因子及其作用的研究进展被引量：1
- 2011年
- 将自胚胎干细胞中筛选出的oct-4、sox-2、c-myc、klf-4四种基因组合转入体细胞,可获得与胚胎干细胞类似的诱导性多能干细胞。牙髓干细胞取材简单,尝试利用特异性多能转录因子将其重编程为与胚胎干细胞类似的诱导性多能干细胞,可为牙组织工程提供优质的种子细胞。本文就特异性多能转录因子的结构和功能、在体细胞去分化中的作用、在肿瘤发生中的作用、在牙髓细胞中的表达及其意义等作一综述。
- 张芳周晓燕韦曦
- 关键词：去分化牙髓干细胞多能干细胞
- Oct4及其亚型调控细胞多能性的研究进展被引量：1
- 2011年
- 利用oct4、sox2、c-Myc、klf4基因转染体细胞可获得与胚胎干细胞(ESC)类似的诱导性多能干细胞。其中,Oct4作为体细胞重编程必不可少的核心转录因子,在转录调节、信号传导通路、表观遗传修饰等方面具有重要调控作用。本文通过阐述Oct4及其亚型调控ESC多能性的作用机制,揭示其在体细胞重编程中的调节作用,以期为研究Oct4对牙髓干细胞的调节作用提供一定的理论依据。
- 孔倩颖韦曦
- 关键词：OCT4重编程多能干细胞牙髓干细胞
- 低频电磁场对BDNF基因修饰的BMSCs增殖影响的实验研究被引量：2
- 2012年
- 目的探讨低频电磁场(LFEMF)对脑源性神经营养因子(BDNF)基因修饰的骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖的影响。方法通过同源重组的方法,用pAd-easy I腺病毒包装系统在体外构建含BDNF基因的重组腺病毒表达载体(rADBDNF);体外分离纯化SD大鼠来源的BMSCs,rADBDNF感染后,用LFEMF(50 Hz、5 mT)进行干预,连续干预3 d,并设对照组、BDNF基因修饰组、LFEMF组。在倒置相差显微镜下,对经台盼蓝染色的各组细胞进行计数;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法对各组细胞的增殖效率进行检测;流式细胞仪分析细胞周期变化。结果 LFEMF作用于BDNF基因修饰后的BMSCs,细胞增殖速率与对照组、BDNF基因修饰组比较,差异有统计学意义(P<0.05),与LFEMF组相比,差异无统计学意义(P>0.05),G2/M期细胞数量明显增多。结论 LFEMF干预可促进BDNF基因修饰后BMSCs增殖。
- 邱家琦张鸣生李新平白文芳吴博白利明徐武华
- 关键词：骨髓间充质干细胞脑源性神经营养因子低频电磁场
- 骨形成蛋白4对人骨髓基质细胞端粒酶表达的调控作用
- 2011年
- 目的:检测外源性骨形成蛋白4(bone morphogenetic protein4,BMP4)对体外连续传代培养人骨髓基质细胞(bonemarrow stromal cells,BMSCs)生长和人端粒酶反转录酶催化亚单位(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)表达水平的影响,探讨BMP4对BMSCs体外传代培养过程中细胞老化的调控作用。方法:取第1、3和7代rhBMP4诱导组和对照组BM-SCs,细胞计数,免疫荧光染色检测hTERT表达,实时荧光定量聚合酶链反应检测第3和7代BMSCs中hTERT mRNA表达,统计学分析。结果:rhBMP4诱导组各代BMSCs细胞数均显著高于对照组(P<0.05)。免疫荧光示hTERT在第1和第3代rh-BMP4诱导组和对照组BMSCs均为细胞核表达,在第7代诱导组保持细胞核表达,而第7代对照组则表现为细胞浆表达。实时荧光定量聚合酶链反应显示,hTERT在第3和第7代诱导组BMSCs的表达均显著高于对照组(P<0.05)。结论:BMP4可促进BMSCs生长,维持传代后期hTERT表达,延缓细胞老化。
- 刘路韦曦凌均棨张芳吴莉萍
- 关键词：骨形成蛋白-4端粒酶骨髓间充质细胞
- Oct4基因转染对人牙髓细胞增殖和多向分化能力的影响
- 目的：检测转录因子Oct4转染人牙髓细胞(dental pulp cells,DPCs)对其增殖和多向分化能力的影响.方法：采用Admax包装系统构建携带目的基因Oct4和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的腺病毒载...
- 韦曦张芳刘路周晓燕
- 关键词：牙髓细胞增殖分化
- Oct4基因转染对人牙髓细胞多能相关转录因子表达的影响被引量：3
- 2011年
- 目的研究腺病毒介导的转录因子Oct4转染人牙髓细胞(DPCs)对其多能相关转录因子表达的影响。方法采用Admax包装系统构建携带目的基因Oct4和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的腺病毒载体,以不同感染复数(MOI)转染DPCs,荧光倒置显微镜检测转染率以最适MOI转染DPCs,实时荧光定量RT-PCR检测转染后1、2、3、5、7和14d,Oct4、AP、Nanog、Utf1和Sox2的表达变化。结果利用Admax包装系统成功构建并获得高滴度重组腺病毒载体,最适MOI=200,实时荧光定量RT-PCR检测结果发现,Oct4、AP、Nanog和Utf1 mRNA在转染后1d开始表达,7d达到最大值,与对照组相比有统计学意义(P<0.05),随后表达下调,且7d时AP mRNA的表达量显著高于Oct4、Utf1和Nanog(P<0.05),Sox2在转染后各时间点均不表达。结论转录因子Oct4瞬时转染可激活多能相关转录因子AP、Nanog和Utf1的表达,从而可能影响DPCs的未分化性能。
- 韦曦张芳刘路周晓燕孔倩颖
- 关键词：牙髓细胞
- hPDGF-BB腺病毒表达载体的构建及其在表皮干细胞中的表达
- 2010年
- 目的构建hPDGE-BB(human platelet-derived growth factor-BB)腺病毒表达载体并观察其在人表皮干细胞(human epidermal stem cells,hESCs)中PDGF-BB蛋白的表达情况。方法从质粒pCMV-SPORT6上通过PCR扩增hPDGF-BB基因,将其酶切后连接到穿梭质粒pAd-track-CMV上,线性化后在BJ5183细菌中和骨架质粒pAdeasy-1进行同源重组,筛选阳性克隆并酶切鉴定,线性化后转染入HEK293细胞中进行包装、扩增,得到重组腺病毒rAD-PDGF。原代培养hESCs,流式细胞术分析hESCs的纯度,用收集的腺病毒感染靶细胞hESCs后,Westornblot检测其表达PDGF-BB情况。结果成功使重组腺病毒载体rAD-PDGF携带PDGF-BB基因,流式细胞术检测hESCs的纯度达88%以上,rAD-PDGF成功导入hESCs后,Westorn blot检测hESCs能表达PDGF-BB蛋白。结论成功构建的重组腺病毒rAD-PDGF在hESCs中表达PDGF-BB蛋白。
- 李新平张鸣生白利明邱家琦白文芳吴志东吴博
- 关键词：腺病毒表皮干细胞
- 骨形成蛋白4对人牙髓细胞去分化基因表达的调控作用被引量：3
- 2011年
- 目的研究外源性骨形成蛋白4(BMP-4)对体外连续传代培养人牙髓细胞(DPCs)生长和去分化基因表达的影响,探讨BMP-4对DPCs体外传代培养过程中细胞未分化性能的调控作用。方法重组人骨形成蛋白(rhBMP-4)诱导组和对照组体外培养4周的人牙髓组织中的细胞进行细胞计数;取P2和P7代rhBMP-4诱导组和对照组DPCs,免疫荧光染色和实时荧光定量聚合酶链反应检测Oct-4、Sox-2、c-Myc表达情况,统计学分析。结果体外培养4周的人牙髓组织经rhBMP-4诱导后,DPCs数量显著高于对照组(P<0.05)。免疫荧光示Oct-4、Sox-2、c-Myc在P2代rhBMP-4诱导组和对照组DPCs均为细胞核表达,在P7代诱导组DPCs保持细胞核表达,而在P7代对照组DPCs表现为细胞浆表达。实时荧光定量聚合酶链反应显示Oct-4、Sox-2、c-Myc在P2代诱导组和对照组DPCs表达差异无统计学意义(P>0.05),而在P7代诱导组DPCs表达显著高于对照组(P<0.05)。结论 BMP-4可促进DPCs生长,维持传代后期去分化基因Oct-4、Sox-2、c-Myc的表达。
- 刘路韦曦凌均棨张芳吴莉萍
- 关键词：骨形成蛋白4牙髓细胞
- 腺病毒介导的KGF基因修饰促进表皮干细胞增殖
- 2011年
- 目的构建KGF腺病毒表达载体并转染表皮干细胞,观察其对表皮干细胞增殖的影响。方法 RT-PCR自人成纤维细胞中扩增KGF基因片段,pAD-easy I腺病毒系统构建KGF腺病毒表达载体,以MOI=50感染表皮干细胞;MTT法检测表皮干细胞增殖,流式分析细胞周期变化。结果 RT-PCR成功扩增KGF基因片段,成功构建的KGF腺病毒质粒经Pac I内切酶酶切获得4.5 kbp的特异条带,MOI=50的病毒转染效率超过90%;KGF基因修饰后的表皮干细胞增殖效率与对照组比较有显著差异(P<0.05),并且G2/M期细胞数量明显增多。结论成功构建腺病毒KGF表达载体,腺病毒载体介导的KGF基因修饰促进了表皮干细胞的增殖。
- 李新平白利明白文芳吴志东吴博张鸣生
- 关键词：KGF表皮干细胞增殖腺病毒
- 低频电磁场对两种不同支架培养的表皮干细胞增殖的影响
- 2011年
- 目的观察低频电磁场（LFEMF）对三维环境中培养的人表皮干细胞（ESCs）增殖的影响，为LFEMF用于皮肤组织工程提供实验依据。方法取人包皮来源的ESCs作为种子细胞，利用Ⅳ型胶原快速贴壁法体外分离纯化ESCs，并种植于胶原海绵和壳聚糖支架材料，外加LFEMF治疗仪（场强5mT，频率分别为1Hz、10Hz和50Hz）刺激ESCs（30min／d），用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法（MTT）检测支架材料细胞毒性，通过肉眼、HE染色后DAPI荧光核染色后镜下观察及扫描电镜观察ESCs生长情况，并收集培养2，7，10，14dESCs的DAPI核荧光染色数据，用显微图像软件分析细胞增殖数目，比较各时间点细胞增殖的区别。结果LFEMF促进ESCs增殖的作用在不同频率组间的差异和两种支架上培养的ESCs增殖情况的差异均有统计学意义（P〈0．01），10d后胶原海绵支架上细胞增殖较壳聚糖支架上的细胞明显（P〈0．05），各频率组LFEMF刺激均能促进ESCs增殖，频率不同，促增殖的效应不一（P〈0．05）。结论胶原海绵可较好地作为体外培养ESCs的支架，在LFEMF干预下可实现ESCs体外三维环境中较快扩增，LFEMF在皮肤组织工程中具有较大应用潜力。
- 白文芳张鸣生吴博李新平白利明朱洪翔
- 关键词：低频电磁场表皮干细胞增殖壳聚糖支架
