艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项(2013ZX10004001)
- 作品数：2 被引量：8H指数：1
- 相关作者：王翀昊赵彦杰朱娜陆柔剑王文更多>>
- 相关机构：中国疾病预防控制中心首都医科大学附属北京胸科医院首都医科大学附属北京天坛医院更多>>
- 发文基金：艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项中国疾病预防控制中心青年科研基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 鼠疫耶尔森菌F1-V融合蛋白改构体的构建、原核表达及纯化
- 2015年
- 目的：通过基于结构的基因突变获得鼠疫耶尔森菌F1抗原突变体（F1mut）,克隆、表达并纯化F1mut-V融合蛋白。方法：通过3轮PCR,将编码F1抗原分子N端1~14位氨基酸的基因序列移到3＇端,测序无误后将F1mut基因与V基因的5＇端连接,构建改构的融合基因F1mut-V,将其克隆到原核表达载体p ET-32a后转化大肠杆菌BL21（DE3）,经IPTG诱导后,目的蛋白为可溶性表达,通过硫酸铵分级沉淀、阴离子交换层析、疏水相互作用层析和凝胶过滤层析纯化,用SDS-PAGE和Western印迹分析纯化产物。结果：重组F1mut-V在大肠杆菌中为可溶性表达,表达量占全菌蛋白的25%以上,纯化后目的蛋白的纯度达95%,经Western印迹检测,与抗V、F1抗体均有特异性结合。结论：重组F1mut-V有望成为新一代亚单位疫苗的有效成分。
- 房婷尹可欣任军张晓鹏于蕊宋小红杨秀旭于长明
- 关键词：鼠疫耶尔森菌F1抗原突变体
- 人原代呼吸道上皮细胞体系分离人冠状病毒HKU1的方法及其复制特点被引量：8
- 2015年
- 目的 建立分化良好的人原代呼吸道上皮细胞（HAE）培养方法,从北京地区重症肺炎患儿呼吸道样本中分离人冠状病毒HKU1（HCoV-HKU1）并对其复制特点进行初步分析.方法 采用气-液两相的方法诱导原代HAE细胞体外分化成假复层纤毛柱状上皮结构,接种经PCR方法鉴定HCoV-HKU1单阳性的北京儿童医院住院患儿鼻咽拭子样本,进行病毒的分离培养.通过荧光定量PCR与序列分析检测病毒复制动力与遗传稳定性.结果 HCoV-HKU1可在HAE中复制,产生有活性的子代病毒,细胞上清中的子代病毒在接种后96 h达到高峰.子代病毒在HAE传代过程中基因相对保守.结论 在国内首次采用人原代呼吸道上皮细胞从重症肺炎患儿呼吸道样本中分离到人冠状病毒HKU1毒株并确定其复制特性.
- 朱娜牛培华赵彦杰王文宋敬东王延群陆柔剑苏崇玉王翀昊刘志东谭文杰
- 关键词：冠状病毒属
