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国家自然科学基金(31101033)

作品数:7 被引量:10H指数:2
相关作者:牟彦双李辉王宇祥王丹付海鹏更多>>
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文献类型

  • 7篇期刊文章
  • 1篇会议论文

领域

  • 6篇农业科学
  • 1篇经济管理
  • 1篇生物学

主题

  • 3篇基因
  • 2篇细胞
  • 1篇顶体
  • 1篇顶体反应
  • 1篇董事
  • 1篇董事会
  • 1篇影响因素
  • 1篇油酸
  • 1篇原代肝细胞
  • 1篇脂肪
  • 1篇脂肪细胞
  • 1篇前脂肪细胞
  • 1篇转基因
  • 1篇转基因鸡
  • 1篇外源
  • 1篇小鼠
  • 1篇亮剑
  • 1篇精子
  • 1篇精子载体
  • 1篇精子载体法

机构

  • 6篇东北农业大学

作者

  • 6篇牟彦双
  • 4篇王宇祥
  • 4篇李辉
  • 2篇刘忠华
  • 2篇王丹
  • 1篇尹智
  • 1篇焦明霞
  • 1篇石慧
  • 1篇张琳琳
  • 1篇王加强
  • 1篇孔庆然
  • 1篇付海鹏

传媒

  • 2篇畜牧与兽医
  • 1篇黑龙江畜牧兽...
  • 1篇中国农业科学
  • 1篇中国电力
  • 1篇东北农业大学...
  • 1篇Journa...

年份

  • 2篇2014
  • 5篇2013
  • 1篇2012
7 条 记 录,以下是 1-8
排序方式:
精子介导的转基因效率关键影响因素被引量:2
2014年
【目的】精子介导的转基因技术简单易行,其作为制备转基因动物的一种方法已经被很多科学家所认同。但是不同实验室的研究结果显示其稳定性和重复性较低,转基因效率差异极大。现将主要探讨导致这种现象的原因。【方法】小鼠精子获能后分别与0、15、30和300nmol·L-1的Cy-3标记DNA(Cy-3-DNA)在37℃共孵育30 min。其后,血细胞计数板检测小鼠精子的活率;共孵育精子进行直接涂片,DPBS洗涤后涂片,DnaseI消化后涂片,精子涂片置于荧光显微镜下,记录视野中的精子总数及显示Cy-3信号的精子数,用于统计精子结合及内化DNA的效率。精子与300 nmol·L-1的Cy-3-DNA共孵育后,以50μmol·L-1的P4诱导精子顶体反应,统计顶体反应前后显示Cy-3信号的精子比例。精子分别与15和300 nmol·L-1 Cy-3-DNA共孵育后,精子进行体外受精,在荧光镜下观察合子期受精卵中Cy-3-DNA的存在位置。按照优化后的条件,精子分别与0、15和300 nmol·L-1 pEGFP-C1质粒共孵育后进行体外受精,制备转基因胚胎。比较试验组和对照组的受精率和发育效率,采用PCR和RT-PCR方法检测囊胚期外源基因整合和表达情况。【结果】获能后的精子分别与0、3、15、30和300 nmol·L-1的Cy-3-DNA共孵育后,精子的活率分别为82.21%、73.63%、77.38%、76.33%和77.80%;洗涤前精子结合DNA的效率分别为76%、94%、99%和100%,15、30和300 nmol·L-1组精子结合率均显著高于3 nmol·L-1组(P<0.05)。洗涤后精子结合DNA的效率,分别为45%、66%、84%和87%,消化后精子内化DNA的效率分别为44%、56%、71%和76%,并且洗涤后精子结合及消化后精子内化DNA的效率都为300 nmol·L-1组和30 nmol·L-1组均显著高于其他两组,而15 nmol·L-1组显著高于3 nmol·L-1组(P<0.05);Image J对精子结合Cy-3-DNA的强度进行分析的结果表明,外源DNA的量随着外源DNA浓度的增加而显著增加(P<0.01)。顶体反应后,精子顶体部DNA会有丢失,�
焦明霞牟彦双格日乐其木格张琳琳孔庆然付海鹏刘忠华
关键词:顶体反应小鼠
特锐德与一拉得战略合作亮剑西南市场
2013年
1月29日,青岛特锐德公司召开第二届董事会第五次会议.审议通过了《关于使用超募资金对外投资的议案》。青岛特锐德公司将以超募资金认购一拉得.增资后特锐德持有一拉得51.6%的股权。
关键词:董事会
IGFBP2基因表达载体构建及抗血清制备
2013年
为了研究类胰岛素样生长因子结合蛋白2(IGFBP2)基因在鸡脂肪细胞代谢中的功能,试验构建鸡IGFBP2基因的原核表达载体并制备鸡IGFBP2基因的多克隆抗体,采用RT-PCR的方法扩增鸡IGFBP2基因的cDNA片段并将其插入到原核表达载体pGEX-4T-1中,利用IPTG诱导重组原核表达载体pGEX-4T-1/IGFBP2在大肠杆菌BL21中表达融合蛋白,利用谷胱甘肽Sepharose 4B层析柱对融合蛋白进行纯化,免疫家兔,利用ELISA和Western-blot方法对抗体血清的效价进行检测。结果表明:试验免疫家兔获得了效价较高的鸡IGFBP2基因抗体血清。
牟彦双王丹王宇祥李辉
附加型载体结合精子载体法生产转基因鸡
转基因动物是生物工程及生物医学的重要工具之一。目前,整合型载体广泛应用于转基因技术,但整合型载体可能导致插入突变,以及转入基因的随机表达甚至沉默。核骨架/核基质附着区(scaffold/matrix attachment...
王加强牟彦双尹智刘忠华
关键词:转基因精子载体法
文献传递
油酸对鸡前脂肪细胞分化过程中基因表达的影响被引量:7
2013年
采用酶消化原代培养脂肪细胞的方法培养肉鸡前体脂肪细胞,在培养基中加入1 mmol·L-1油酸后,分别在24,48,72和96 h检测细胞中PPARγ基因,SREBP1基因、ApoAI基因、A-FABP基因、IGF-I基因和IGFIR基因的表达变化,同时对细胞中葡萄糖及甘油三酯的含量进行检测。结果表明,加入油酸48 h后前脂肪细胞中开始出现脂滴。油酸诱导后24 h的前脂肪细胞中,处理组中脂类代谢相关基因ApoAI基因、A-FABP基因的表达量显著高于对照组,处理组中参与脂质合成的甘油三酯和葡萄糖的含量随着时间不断积累。结果显示,油酸通过诱导脂类代谢基因ApoAI基因,A-FABP基因的表达进而使脂滴在前脂肪细胞中沉积。
牟彦双王宇祥李辉
关键词:前脂肪细胞油酸分化
鸡类胰岛素生长因子结合蛋白2基因编码区克隆及表达被引量:1
2014年
为了研究鸡类胰岛素生长因子结合蛋白2(insulin-like growth factor binding protein2,IGFBP2)基因在鸡脂肪发育中的功能,通过RT-PCR和5'-RACE的方法克隆该基因编码区序列并检测IGFBP2基因在鸡组织中表达。结果显示:本试验克隆并获得了鸡IGFBP2基因编码区536 bp序列,并用生物信息学方法证明了该序列的正确性。在检测的7周龄鸡27种组织中,IGFBP2基因在26种组织中均有表达,仅在胰腺中没有表达。
牟彦双王宇祥李辉
关键词:克隆
鸡原代肝细胞的分离及培养
2013年
选用18日龄肉仔鸡作为试验动物,应用半原位酶消化法分离鸡肝细胞。在获取鸡肝细胞过程中,先用灌流液在原位对肝脏进行灌流,然后取下肝脏用Ⅳ型胶原酶对肝脏进行灌流消化,200目筛网、300 g离心5 min可获得大量的、纯度均一、活力较高的细胞。细胞经形态学动态观察、电镜观察内部结构及对脂类相关基因表达的检测,证明肝细胞具有功能活性。本研究建立了鸡肝细胞原代培养方法,为研究鸡肝细胞脂类代谢的生物学过程提供技术平台。
牟彦双王丹王宇祥石慧李辉
关键词:肝细胞
Expression of an Episomal Vector in Developing Chicken Embryo and Chicks
2013年
The domesticated chicken has important roles in basic and applied research. The vector based on scaffold matrix attachment region (S/MAR) appears to be sufficient to maintain long-term expression in an episomal state in various mammalian cells. To explore the practical use of episomal vector in transgene technology of agricultural chickens, we fused the S/MAR of the human r-interferon gene into the pEGFP vector and transduced it into chickens by sperm-mediated gene transfer (SMGT). PCR detection indicated the positive rate of transgene chickens was 60%. The RT-PCR detection and fluorescence observation confirmed the expression of the GFP and indicated the existence of the GFP during the chicken embryogenesis and fetal development. The PCR detection and rescue experiments confirmed the episomal state of the pEPI-EGFP in chick embryos and chicks. These results showed that the S/MAR-based vector could function properly in chicken embryos and was a practicable tool combined with the SMGT to study the development of chickens.
Mu Yan-shuangWang Jia-qiangYin ZhiJiang Dan-danLi HuiLiu Zhong-hua
关键词:TRANSGENECHICKEN
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