国家教育部博士点基金(2011410511003)
- 作品数：4 被引量：4H指数：2
- 相关作者：陈陆王川庆余秋颖师润刘红英更多>>
- 相关机构：河南农业大学更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金国家自然科学基金河南省高校科技创新团队支持计划更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 稳定表达猪IRF7基因的PK-15细胞系建立及其抗病毒效果评价
- 2015年
- 为探讨猪IRF7基因对某些猪源病毒在PK-15细胞系中增值的影响,利用Piggy Bac真核转座子系统将猪源IRF7基因转染入PK-15细胞中,通过嘌呤霉素和绿色荧光进行双重筛选获得阳性转化细胞,再经克隆纯化得到单个阳性细胞克隆株。通过观察细胞荧光和荧光定量PCR鉴定,最终获得了稳定表达IRF7基因的PK-15细胞系。在Poly I:C诱导下,该细胞系能够显著上调IFN-β的表达。初步研究了该细胞系对病毒复制的影响,结果表明过表达IRF-7基因能够显著抑制猪伪狂犬病病毒(PRV)和猪水泡性口炎病毒(VSV)的复制。本研究为进一步探索猪IRF7基因的功能与作用机制提供有效工具。
- 赵永祥李永涛赵军陈陆常洪涛王川庆
- 关键词：抗病毒
- 雏鸡肠组织β1基因的鉴定及时空表达特性
- 2014年
- 设计1对引物，建立RT—PCR方法对β1基因mRNA进行鉴定；以GAPDH基因为内参，建立检测鸡β1基因表达水平的sYBRGreenI实时荧光定量PCR方法，并用此方法测定1～20日龄雏鸡不同肠段组织81基因表达水平。结果显示，从鸡肠组织成功鉴定出β1基因mRNA；检测内参基因GAPDH和目的基因β1的实时荧光定量PCR方法扩增效率一致（扩增曲线斜率差〈0．1），满足使用比较Ct值法对B1基因mRNA进行相对定量分析的前提；扩增曲线、熔解曲线及凝胶电泳结果提示该方法特异性好。实时荧光定量PCR检测结果表明，1日龄雏鸡十二指肠和盲肠、10日龄雏鸡空肠和直肠、5日龄雏鸡回肠组织中β1基因相对表达量最高。结果表明，鸡肠组织中存在β1基因表达，并在不同日龄不同肠段表达水平存在差异。
- 师润吕文强陈陆杨霞刘红英余秋颖明星王川庆
- 关键词：雏鸡Β1基因实时荧光定量PCR
- 人源福氏志贺菌对鸡肠上皮原代细胞侵袭特性研究被引量：3
- 2013年
- 为研究人源福氏志贺菌对鸡肠上皮原代细胞侵袭力和侵袭特性,进一步验证人源志贺菌对鸡的致病性并建立体外研究模型,采用Hela细胞庆大霉素保护试验和免疫组织化学染色检测分离的人源福氏志贺菌ZD02株的毒力。然后采用细胞免疫组织化学染色研究ZD02株对鸡肠上皮细胞的侵袭力和相关侵袭特性。人源福氏志贺菌ZD02株能够侵入Hela细胞,庆大霉素保护试验结果显示,感染后30、60、90、120min时ZD02株侵袭率分别为1.43%、2.43%、2.56%、2.62%,证明ZD02株具有毒力。ZD02株侵袭鸡肠上皮原代细胞免疫组织化学检测结果显示,ZD02株能侵入鸡肠上皮细胞,感染后1、2、3、4h时ZD02株侵袭率分别为1.7%、6.2%、8.0%、11.2%。鸡肠上皮原代细胞经EGTA处理后,ZD02株侵袭率显著提高。人源福氏志贺菌ZD02株对鸡肠上皮细胞具有侵袭力,且从肠上皮细胞基底侧部侵袭。本研究进一步验证了志贺菌人禽互传的可能性,鸡肠上皮原代细胞可作为研究志贺菌致病机理的体外模型。
- 师润刘红英陈陆杨霞吕文强余秋颖赵军王川庆
- 细胞信号转导和骨架在人源福氏志贺菌侵袭鸡肠上皮原代细胞中的作用被引量：2
- 2013年
- 为研究细胞信号转导和骨架在人源福氏志贺菌侵袭鸡肠上皮原代细胞中的作用,分别用酪氨酸蛋白激酶、酪氨酸蛋白磷酸酶、蛋白激酶C、Ca2+通道等信号转导抑制剂染料木黄酮、原钒酸钠、星状孢子素、硝苯地平和微丝蛋白聚合抑制剂细胞松弛素B处理鸡肠上皮原代细胞后,采用细胞免疫组织化学染色检测人源福氏志贺菌ZD02株对鸡肠上皮原代细胞侵袭率,用间接免疫荧光双重标记检测ZD02株侵袭鸡肠上皮原代细胞后F-肌动蛋白分布的变化。结果显示,染料木黄酮、硝苯地平和细胞松弛素B能显著抑制人源福氏志贺菌ZD02株内化,星状孢子素和原钒酸钠对ZD02株的内化无影响,人源福氏志贺菌侵袭鸡肠上皮原代细胞时F-肌动蛋白发生聚集。本研究表明人源福氏志贺菌ZD02株侵袭鸡肠上皮原代细胞过程中需要酪氨酸蛋白激酶、Ca2+通道活化以及细胞微丝重排。
- 师润杨霞陈陆刘红英常洪涛余秋颖明星郑关民王川庆
- 关键词：细胞信号转导
