国家自然科学基金(31101057)
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 相关作者：李涛姜科声阮琴房跃群葛丹婷更多>>
- 相关机构：浙江师范大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 重组Nkx2.5腺病毒的构建及心肌细胞感染实验
- 2013年
- 利用AdEasy腺病毒表达系统构建了Nkx2.5重组腺病毒.Nkx2.5基因克隆入pAdTrackcmv质粒,pAdTtrackcmv-Nkx2.5经PmeⅠ线性化后转化含pAdEasy-1的BJ5183菌进行同源重组,以构建pAdEsay-Nkx2.5重组质粒.pAdEsay-Nkx2.5转染293A细胞进行病毒包装.以Ad-Nkx2.5重组腺病毒感染Hela及乳鼠心肌细胞,检测了Nkx2.5蛋白表达及对下游ANF和β-MHC基因的表达调控;并采用感染病毒的H9c2心肌细胞经H2O2处理建立细胞凋亡模型,采用噻唑蓝法和荧光染色法检测了细胞存活率和凋亡细胞的形态变化.结果显示,Nkx2.5过表达能抑制H2O2诱导的H9c2细胞凋亡.
- 张勤应湾湾葛丹婷房跃群李涛
- 关键词：NKX2.5重组腺病毒心肌细胞H9C2细胞凋亡
- 重组nkx2.5腺病毒抑制过氧化氢诱导的H9c2细胞凋亡被引量：2
- 2012年
- 为研究心脏发育关键基因nkx2.5的功能及应用价值,构建Ad-Nkx2.5重组腺病毒,并检测nkx2.5过表达拮抗氧化应激损伤的效应及机制。采用AdEasy腺病毒表达系统构建Ad-Nkx2.5重组腺病毒,建立H2O2诱导H9c2心肌细胞凋亡模型,分别用Ad-Nkx2.5重组病毒或对照病毒感染细胞,采用Hoechst33342染色观察细胞形态变化、MTT法检测细胞存活率,免疫印迹检测caspase-3活化、细胞色素C的胞浆含量。并通过Real-timePCR检测凋亡相关基因bcl-2和bax表达。结果发现,nkx2.5过表达促进H9c2细胞存活,抑制H2O2诱导的caspase-3活化及线粒体细胞色素C的释放。Nkx2.5过表达上调bcl-2表达,显著下调H2O2诱导的bax表达。并发现H2O2对Nkx2.5核定位无明显影响。结果显示重组腺病毒介导的Nkx2.5过表达可通过调控凋亡相关基因表达,抑制线粒体凋亡途径,保护心肌细胞抗氧化损伤。
- 李涛姜科声阮琴刘志强
- 关键词：NKX2.5重组腺病毒H9C2细胞
